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阿拉伯海假交替单胞菌N1230-9两个甲基受体趋化蛋白的功能鉴定
1
作者 金佳凡 舒国靖 +2 位作者 朱四东 杨季芳 陈吉刚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1641-1653,共13页
【目的】作为海洋中的特有及优势种群,假交替单胞菌(Pseudoalteromonas)普遍拥有多个甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein,MCP),探究这些趋化受体的功能。【方法】以太平洋表层海水来源的一株阿拉伯海假交替单胞菌(Ps... 【目的】作为海洋中的特有及优势种群,假交替单胞菌(Pseudoalteromonas)普遍拥有多个甲基受体趋化蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein,MCP),探究这些趋化受体的功能。【方法】以太平洋表层海水来源的一株阿拉伯海假交替单胞菌(Pseudoalteromonas arabiensis)N1230-9为研究对象,利用软琼脂平板法测试该菌株对23种碳源的趋化能力,继而利用同源重组策略构建2个含sCache结构域MCP编码基因(woc28264和woc27036)缺失突变体,并分析突变体对10种碳源的趋化能力。【结果】菌株N1230-9对海藻糖、麦芽糖、蔗糖、N-乙酰氨基葡萄糖、L-苹果酸、乙酸钠、丙酸钠、丙酮酸钠、柠檬酸和琥珀酸10种碳源具有趋化能力。WOC28264是L-苹果酸和蔗糖的特异性趋化受体,WOC27036则是柠檬酸和琥珀酸的特异性趋化受体。此外,WOC28264和WOC27036还均是N-乙酰氨基葡萄糖和海藻糖的趋化受体。【结论】WOC28264和WOC27036存在重叠的碳源效应物。 展开更多
关键词 假交替单胞菌 趋化 甲基受体趋化蛋白
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AI-2通过甲基化趋化受体McpU调控恶臭假单胞菌KT2440的趋化运动及生物膜形成 被引量：2
2
作者 谢来工 赵文瑾 张磊 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期628-639,共12页
【背景】广泛存在于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中的自诱导物autoinducer-2(AI-2)能够介导细菌种内和种间通讯,并调节细菌的多种生理过程。然而恶臭假单胞菌KT2440能否感知AI-2信号还未见报道。【目的】挖掘介导恶臭假单胞菌KT2440对AI-... 【背景】广泛存在于革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌中的自诱导物autoinducer-2(AI-2)能够介导细菌种内和种间通讯,并调节细菌的多种生理过程。然而恶臭假单胞菌KT2440能否感知AI-2信号还未见报道。【目的】挖掘介导恶臭假单胞菌KT2440对AI-2趋化反应的趋化受体,检测AI-2信号通过趋化受体对恶臭假单胞菌KT2440生物膜形成的调控作用。【方法】本研究首先检测恶臭假单胞菌KT2440对AI-2信号的趋化反应,随后表达纯化了与铜绿假单胞菌AI-2受体高度同源的甲基化趋化受体McpU的配体结合结构域(ligand-binding domain,LBD),利用哈维氏弧菌的生物发光实验和等温滴定量热法(ITC)分析McpU-LBD与AI-2的相互作用;软琼脂平板法和毛细管定量分析法分析KT2440及mcpU敲除菌株(ΔmcpU)对AI-2的趋化反应;结晶紫染色法检测AI-2对KT2440及ΔmcpU生物膜形成能力的影响。【结果】软琼脂平板法和毛细管定量分析发现KT2440对AI-2信号表现出明显的正趋向性。哈维氏弧菌的生物发光实验和ITC分析发现AI-2与McpU-LBD具有高亲和力相互作用。进一步研究发现KT2440对AI-2的趋化反应是通过McpU介导的。生物膜测定结果显示,AI-2能通过其受体McpU显著增强KT2440的生物膜形成能力(P<0.05)。【结论】以上结果表明,甲基化趋化受体McpU介导了恶臭假单胞菌KT2440对AI-2的趋化作用,并且AI-2通过作用于该受体显著提高恶臭假单胞菌KT2440的生物膜形成能力。 展开更多
关键词 恶臭假单胞菌 甲基化趋化受体蛋白 AI-2 趋化作用 生物膜
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根癌农杆菌化学受体MCP_(1912)调节趋化响应功能的鉴定
3
作者 宗仁杰 高苗苗 +3 位作者 张梦琪 王浩 徐楠 郭敏亮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1949-1961,共13页
【目的】本研究以根癌农杆菌C58为材料,鉴定其甲基趋化受体蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein,MCP)MCP_(1912)能够识别的配体,并研究该蛋白在调控根癌农杆菌趋化响应中的具体功能。【方法】通过异源表达MCP_(1912)的配体结合结... 【目的】本研究以根癌农杆菌C58为材料,鉴定其甲基趋化受体蛋白(methyl-accepting chemotaxis protein,MCP)MCP_(1912)能够识别的配体,并研究该蛋白在调控根癌农杆菌趋化响应中的具体功能。【方法】通过异源表达MCP_(1912)的配体结合结构域(ligand binding domain,LBD),获得带有His标签的LBD蛋白(LBD_(1912))。利用基于荧光的热位移测定法(fluorescence-based thermal shift assay,TSA)筛选出LBD_(1912)的潜在配体;通过等温滴定量热(isothermal titration calorimetry,ITC),进一步确定筛选出的潜在配体,并测定LBD_(1912)与配体结合之后的解离平衡常数K_(D)。利用基于同源重组的精准DNA片段删除方法,敲除根癌农杆菌C58中编码MCP_(1912)的基因atu1912,获得MCP_(1912)缺失突变体(ΔMCP_(1912));以质粒回补的方法,获得ΔMCP_(1912)回补株(ΔMCP_(1912)C)。利用毛细管趋化测定法,测定根癌农杆菌及其突变体对筛选出来的MCP_(1912)潜在配体的趋化响应,并最终确定MCP_(1912)在调控根癌农杆菌C58趋化响应中的具体功能。【结果】通过TSA,筛选出5种能引起LBD_(1912)的熔解温度(Tm)变化大于2℃的潜在配体(大于2℃意味着可能结合),这5种潜在配体是丙酮酸、L-乳酸、丙酸、乙酸和乙醇酸。ITC实验进一步确定,只有丙酮酸和丙酸能与LBD_(1912)特异性结合。丙酮酸与LBD_(1912)的结合是放热过程,KD为(17.0±0.9)μmol/L,而丙酸与LBD_(1912)的结合是吸热过程,K_(D)为(31.5±5.4)μmol/L。毛细管趋化试验证实,根癌农杆菌C58能够被丙酮酸吸引和躲避丙酸,MCP_(1912)的缺失,完全消除了根癌农杆菌对这两种物质的趋化响应,MCP_(1912)的回补能够恢复其对这两种物质的趋化响应。【结论】化学受体MCP_(1912)识别的配体是丙酸和丙酮酸,MCP_(1912)介导C58对于丙酮酸的吸引趋化响应以及躲避丙酸的趋化响应。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 甲基趋化受体蛋白 趋化响应 吸引物 驱避剂 配体结合结构域
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十字花科黑腐病菌中甲基趋化受体蛋白的研究
4
作者 崔萍 丘献娟 +2 位作者 卢卓健 张达培 陆光涛 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期4051-4058,共8页
趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也... 趋化性是有运动能力的细菌对环境中的刺激物产生的趋向或离避行为。在细菌的趋化系统中,能够感应环境中化学物质浓度梯度的化学受体称为趋化受体。十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestrispv. campestris, Xcc)是重要的植物病原菌,也是一种研究微生物与宿主互作机理的重要模式菌,然而关于Xcc 中趋化受体的研究还较少。本研究利用生物信息学技术对Xcc8004 中的21 个甲基受体趋化蛋白(methyl- accepting chemotaxis proteins, MCPs)进行功能域分析并构建了系统进化树。结果表明,Xcc 中MCP具有比较高的保守性。利用同源双交换法构建了MCP编码基因的缺失突变体,对这些突变体的生物学功能分析表明:21 个MCP编码基因突变后,皆影响Xcc 对糖类、氨基酸等趋化物的趋化性;大多数突变不影响细菌的运动性,但XC_2311、XC_2304、XC_1937、XC_2223 分别突变后,影响细菌的游动性和泳动性。 展开更多
关键词 十字花科黑腐病菌 甲基趋化受体 功能域 系统发育分析 趋化性
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肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达及纯化 被引量：1
5
作者 牛凌云 夏国盛 +4 位作者 李菁 郭蒸 秦和平 王继德 白杨 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2009年第10期930-933,共4页
目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+... 目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCP)基因,制备MCP重组蛋白,为以后检测我国人群肝螺杆菌感染率提供实验基础。方法利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),构建MCP的原核表达质粒pET22b+/MCP。将质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni-NTA亲和层析系统纯化重组蛋白。结果构建了原核表达质粒pET22b+/MCP,含有该质粒的大肠杆菌经1 mmol/L IPTG诱导4 h后表达一相对分子质量约14 kD的重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析系统纯化获得了MCP的纯化重组蛋白rhMCP。结论获得了肝螺杆菌MCP的纯化重组蛋白,为进一步利用血清学方法调查我国人群肝螺杆菌感染率提供可能。 展开更多
关键词 肝螺杆菌 甲基基团接受趋化信号转导蛋白 克隆 重组蛋白
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肝螺杆菌MCSTP的基因克隆及生物信息学分析
6
作者 牛凌云 白杨 +4 位作者 郭蒸 夏国盛 李菁 秦和平 王继德 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1212-1215,共4页
目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCSTP)全基因,并应用生物信息学方法对其进行分析。方法以肝螺杆菌全基因组作为模板,设计肝螺杆菌MCSTPc1977特异性引物,利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pE... 目的克隆肝螺杆菌(H.hepaticus)甲基基团接受趋化信号转导蛋白(MCSTP)全基因,并应用生物信息学方法对其进行分析。方法以肝螺杆菌全基因组作为模板,设计肝螺杆菌MCSTPc1977特异性引物,利用PCR方法扩增目的基因片段,连接至原核表达载体pET22b(+),从而构建原核表达质粒pET22b+/MCSTP并测序鉴定。应用生物信息学方法分析MCSTP基因的序列同源性及其结构特征。结果克隆的MCSTP基因经测序可知与GenBank公布的肝螺杆菌标准株ATCC51449序列一致性达99%,仅第1160bp处由A变为T。利用生物信息学方法进行分析可发现此基因与空肠弯曲杆菌、幽门螺杆菌具有非常低的相似性,表明其在微生物界中具有一定的特异性。结论成功构建pET22b+/MCSTP重组质粒,并通过生物信息学技术进行序列及结构分析,为进一步研究其生物学功能及致病机制提供了线索和依据。 展开更多
关键词 肝螺杆菌 MCSTP 基因克隆 生物信息学
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