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蓝氏贾第鞭毛虫甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因的克隆、表达与纯化
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作者 吴文杰 郑国侠 +2 位作者 高倩 杜曙光 王云华 《中国热带医学》 CAS 2019年第11期1014-1017,共4页
目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构... 目的蓝氏贾第鞭毛虫(简称为贾第虫)甲硫氨酸硫氧化物还原酶基因(GlMSR),进行原核表达获得其重组蛋白。方法依据GenBank中GlMSR序列设计引物,以贾第虫中国C2克隆株基因组DNA为模板,通过PCR扩增编码序列,将所得片段连接至质粒pET28a以构建原核表达载体pET28a-GlMSR,将pET28a-GlMSR导入大肠杆菌E.coli JM109并挑取阳性克隆进行基因测序和鉴定。用化学方法将经测序验证的重组质粒pET28a-GlMSR转化至E.coli BL21(DE3)。经异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导表达后,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测重组蛋白表达结果。收集沉淀中的重组表达产物,镍柱亲和层析纯化带组氨酸标签的重组蛋白,并通过免疫印迹鉴定纯化结果。结果电泳结果显示在约624 bp处出现目的DNA条带,表明成功得到GlMSR编码序列;PCR鉴定、酶切鉴定以及基因测序结果表明成功构建重组表达载体pET28a-GlMSR,经IPTG诱导后在沉淀中获得目的蛋白,目的蛋白分子量(Mr)约为25000,与预期分子量(Mr)22800基本相符。经Western blot分析显示该重组蛋白含有His6标签。结论本研究克隆、表达了蓝氏贾第虫GlMSR基因,并纯化获得重组蛋白,为进一步探索该酶的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 甲硫氨酸硫氧化物还原酶 克隆 表达 纯化
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