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代谢光反应交联技术在生物大分子相互作用研究中的应用
1
作者 王明超 应万涛 钱小红 《生命的化学》 CAS CSCD 2014年第6期779-786,共8页
具备光反应交联活性的苯甲酮基团、叠氮苯基团以及双吖丙啶基团被广泛应用于对糖、氨基酸等代谢底物的修饰。利用生物自身的代谢机制,引入带有光反应交联基团的底物类似物,可以实现生物大分子间相互作用的原位、实时研究,从而获得更为... 具备光反应交联活性的苯甲酮基团、叠氮苯基团以及双吖丙啶基团被广泛应用于对糖、氨基酸等代谢底物的修饰。利用生物自身的代谢机制,引入带有光反应交联基团的底物类似物,可以实现生物大分子间相互作用的原位、实时研究,从而获得更为准确的相互作用复合物的信息。本文将综述代谢光反应交联技术在聚糖-蛋白质、蛋白质-蛋白质相互作用研究中的应用进展。 展开更多
关键词 代谢引入 光反应交联基团 光反应交联糖类似物 光反应交联氨基酸类似物
原文传递
特定激活性吞噬受体的配体与广谱肿瘤抗原的化学生物学桥接
2
作者 张国秀 郑晨晨 赵智辉 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期92-99,共8页
目前肿瘤疫苗制备方法尚无法做到将广谱肿瘤抗原通过特定激活性吞噬受体途径递送给抗原呈递细胞,这可能是现有肿瘤疫苗临床疗效不佳的原因之一.因此,本研究利用化学生物学方法,尝试将激活性吞噬受体的配体与广谱肿瘤抗原连接,为制备肿... 目前肿瘤疫苗制备方法尚无法做到将广谱肿瘤抗原通过特定激活性吞噬受体途径递送给抗原呈递细胞,这可能是现有肿瘤疫苗临床疗效不佳的原因之一.因此,本研究利用化学生物学方法,尝试将激活性吞噬受体的配体与广谱肿瘤抗原连接,为制备肿瘤疫苗提供新的方法.首先,通过非天然糖代谢掺入对培养的小鼠4T1乳腺癌细胞和CT26.WT结直肠癌细胞抗原进行标记,使糖基化肿瘤抗原携带叠氮化的唾液酸,利用流式细胞术和免疫荧光技术确定代谢掺入的最优条件参数.其次,利用生物正交反应使肿瘤抗原叠氮修饰位点再进一步共价缀合生物素,利用Western Blot检测蛋白的生物素化情况.最后,利用抗原-抗体结合原理,将小鼠抗生物素单抗(IgG1亚型,其Fc结构域是IgG1FcR的配体)与生物素化肿瘤抗原交联形成免疫复合物,通过Western Blot判断最优交联参数.实验结果表明,唾液酸前体物代谢掺入能高效地使肿瘤细胞发生叠氮化修饰,最佳浓度是2 mmol/L、最佳时间是24 h;通过生物正交反应能使叠氮化肿瘤抗原进一步生物素化;生物素化肿瘤抗原能高效地与抗生物素抗体形成复合物,二者交联的最佳比例(w/w)是20/1(4T1)或25/1(CT26.WT).结果证明,本研究通过化学生物学手段实现了广谱肿瘤抗原与特定吞噬受体的配体的交联,在方法学上为研制新型肿瘤疫苗奠定了基础. 展开更多
关键词 代谢掺入 生物正交反应 激活性吞噬受体 抗原递送 肿瘤疫苗
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