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小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞的制备及莲子心新碱对其收缩的抑制作用
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作者 王鑫 李源 +2 位作者 万朋 杨光明 潘扬 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1001-1008,共8页
目的建立小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMCs)分离、培养和鉴定的方法,并探讨莲子心新碱(NeoL)对其收缩的抑制作用及机制。方法采用胶原酶消化法分离制备小鼠原代MASMCs;免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;细胞计数法检测传代细胞的生... 目的建立小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMCs)分离、培养和鉴定的方法,并探讨莲子心新碱(NeoL)对其收缩的抑制作用及机制。方法采用胶原酶消化法分离制备小鼠原代MASMCs;免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;细胞计数法检测传代细胞的生长特性;CCK-8法检测MASMCs细胞活力;成像技术法观察NeoL对KCl诱导MASMCs收缩的影响;蛋白免疫印迹法及免疫荧光法检测MASMCs中ROCK1蛋白的表达情况。结果MASMCs生长曲线近似“S”形,第4~7天处于对数生长期,可用于传代,细胞的成活率达95%。经鉴定,MASMCs为典型的平滑肌细胞且纯度高。NeoL对MASMCs增殖能力有显著抑制作用,IC50值为1.327μmol·L^(-1)。与124 mmol·L^(-1)KCl诱导的模型组比较,0.3、0.6μmol·L^(-1)NeoL干预后MASMCs的细胞长度均显著延长(P<0.01),ROCK1蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.001)。结论成功构建了小鼠MASMCs模型,细胞纯度高,多次传代后细胞特征稳定;NeoL对KCl诱导的MASMCs收缩具有抑制作用,可能与其下调ROCK1蛋白表达有关。 展开更多
关键词 肠系膜动脉平滑肌细胞 胶原酶消化法 莲子心新碱 收缩抑制 ROCK1蛋白 小鼠
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