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大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养和鉴定 被引量：12
1
作者 倪玉霞 李澎 +1 位作者 李贻奎 束云 《广西医科大学学报》 CAS 2009年第1期10-13,共4页
目的:培养符合实验要求的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)并进行鉴定,为进一步的研究打基础。方法:分别采用全骨髓贴壁培养法和密度梯度离心法培养大鼠骨髓间充质干细胞,对细胞的形态及生长特性进行观察,并应用流式细胞术对细胞表面抗原CD3... 目的:培养符合实验要求的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)并进行鉴定,为进一步的研究打基础。方法:分别采用全骨髓贴壁培养法和密度梯度离心法培养大鼠骨髓间充质干细胞,对细胞的形态及生长特性进行观察,并应用流式细胞术对细胞表面抗原CD34、CD44、CD45、CD29、CD90以及CD11b进行表型鉴定。结果:两种方法培养的细胞均为成纤维样细胞,呈集落式生长,全骨髓培养法培养的BMSCs表达CD34-(95.4%),CD44+(94.2%),CD45-(91.6%),CD29+(93.8%),CD90+(98%),CD11b-(87.6%),梯度离心法培养的BMSCs表达CD34-(96.9%),CD44+(97.3%),CD45-(97.5%),CD29+(99.4%),CD90+(99.8%),CD11b-(96%)。结论:两种方法均可分离培养出较纯化的BMSCs,但全骨髓贴壁培养法简单易行,原代培养周期较短。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 流式细胞术 细胞培养 表型鉴定
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透明质酸定向诱导骨髓间充质干细胞治疗兔骨关节炎模型的实验研究 被引量：4
2
作者 李鸿斌 龚瑜林 +7 位作者 于阳 白丽杰 贾永峰 施琳 王雪梅 赵静 王静 肖镇 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期3-8,I0001,共7页
目的探讨透明质酸定向诱导骨髓MSCs分化修复兔OA模型软骨缺损的作用。方法分离、纯化并扩增兔骨髓MSCs，5-溴-2’脱氧脲嘧啶核苷（BrdU）和4’6二脒基．2．苯吲哚盐酸（DAPI）标记。Muehlema法构建兔OA软骨缺损模型24只，并按照随机数... 目的探讨透明质酸定向诱导骨髓MSCs分化修复兔OA模型软骨缺损的作用。方法分离、纯化并扩增兔骨髓MSCs，5-溴-2’脱氧脲嘧啶核苷（BrdU）和4’6二脒基．2．苯吲哚盐酸（DAPI）标记。Muehlema法构建兔OA软骨缺损模型24只，并按照随机数字表法随机分为3组：透明质酸治疗组（Th组）、MSCs治疗组（Tm组）、透明质酸联合MSCs治疗组（Th＋m组）。治疗侧膝关节分别予以相应治疗，对照侧膝关节以等量O．9％氯化钠注射液治疗，每周1次。治疗结束3周后，行单光子发射计算机断层扫描（SPECT）和正电子发射断层扫描／计算机断层扫描（PET。CT）成像。修复标本行大体形态学、组织病理学、免疫组织化学和免疫荧光等检测。采用t检验、方差分析、Newman—Stud。nt—Keul检验进行统计分析。结果①各组组织病理学Mankin评分治疗侧均低于对照侧（Th组：3．3±0．4，5-3±0．5；Tm组：3．9±0．6，5．4±0．6；Th＋m组：2-2±0_3，5．3±0．7），差异均有统计学意义（t=-4．83，-3．83，-13．50；JP均〈0．05）；Th＋m组治疗侧Mankin评分（2．2±0．3）显著低于Th组（3．3±0．4）和Tm组（3．9±0．6），差异有统计学意义（P〈O．01）；②PET．CT检测18F标记的2-氟-2．脱氧-D葡萄糖（t8F—FDG）放射性核素平均计数率，Th＋m治疗组治疗侧（43773±1371）显著高于Th组（37983±1270）和Tm组（37097±1214），差异均有统计学意义（P〈0．01）；③SPECT检测各治疗组治疗侧99Tc标记的亚甲基二膦酸盐（99Tc-MDP）的放射性核素平均计数率，Th＋m治疗组治疗侧（768＋19）显著高于Th组（590±16）和Tm组（597±14），差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论透明质酸联合MSCs移植可以有效地修复软骨缺损。 展开更多
关键词 骨髓 间质干细胞 透明质酸 骨关节炎
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在心肌细胞/MSCs共培养体系中MSCs出现心肌分化表型 被引量：2
3
作者 苏立 陈运贞 +1 位作者 张晓刚 佘强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2005年第5期644-647,651,共5页
目的:观察MSCs在心肌细胞/MSCs共培养体系中向心肌细胞的分化情况。方法:体外分离培养大鼠心肌细胞,然后将传代后大鼠MSCs与心肌细胞混合培养,建立心肌细胞/MSCs共培养体系,同时以心肌细胞培养上清液及成纤维细胞培养上清液为诱导因素... 目的:观察MSCs在心肌细胞/MSCs共培养体系中向心肌细胞的分化情况。方法:体外分离培养大鼠心肌细胞,然后将传代后大鼠MSCs与心肌细胞混合培养,建立心肌细胞/MSCs共培养体系,同时以心肌细胞培养上清液及成纤维细胞培养上清液为诱导因素作对照。培养1周后行免疫细胞化学染色,鉴定MSCs中心肌特异性cTnT蛋白的表达。结果:在心肌细胞/MSCs共培养体系中,MSCs与心肌细胞交织成网状,部分MSCs出现cTnT的表达,而对照组MSCs未检出cTnT的表达。结论:体外模拟的心肌环境可以诱导MSCs向心肌细胞分化并表达心肌细胞特异性标志物,诱导MSCs向心肌分化的分子信号可能是心肌细胞膜蛋白。 展开更多
关键词 间充质干细胞 诱导 细胞分化 其培养 心肌
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丹酚酸B抑制氧化应激引起骨髓间质干细胞凋亡的研究 被引量：2
4
作者 卢碧燕 童秀珍 +2 位作者 邓宇斌 吴洪福 侯景义 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期475-480,共6页
目的:观察丹酚酸B(Sal B)对氧化应激介导骨髓间质干细胞(BMSCs)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:大鼠BMSCs培养鉴定后分为5组:空白对照组、氧化应激组、低浓度Sal B+H2O2组、中浓度Sal B+H2O2组和高浓度Sal B+H2O2组。应用MTT、流式... 目的:观察丹酚酸B(Sal B)对氧化应激介导骨髓间质干细胞(BMSCs)凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:大鼠BMSCs培养鉴定后分为5组:空白对照组、氧化应激组、低浓度Sal B+H2O2组、中浓度Sal B+H2O2组和高浓度Sal B+H2O2组。应用MTT、流式细胞仪(FCM)及Hoechst标记的方法检测Sal B对氧化应激介导的细胞活性下降以及凋亡效应的影响;通过DCF荧光染色的方法检测过氧化氢及Sal B对细胞内活性氧生成的影响;用Western blotting的方法检测p-ERK1/2表达情况。结果:MTT结果显示不同浓度的Sal B共处理BMSCs 24 h能够提高氧化应激情况下的细胞活性,其中中浓度组的作用更为明显。Hoechst标记以及FCM检测的结果表明:10μmol/L Sal B处理能够提高细胞活性,减少凋亡数。正常组细胞的DCF阳性细胞率为28.7%±8.1%,经500μmol/L H2O2刺激24 h后,阳性细胞数急剧上升,高达86.9%±12.4%。而10μmol/L Sal B处理组的上升不明显,仅有42.1%±10.8%。由此可见,Sal B处理可以减少细胞内活性氧的生成;细胞在氧化应激的条件下p-ERK1/2在15 min内开始上调,持续120 min。而这种上调经10μmol/L Sal B处理可以有效降低,同时Sal B可以降低细胞基础的p-ERK1/2表达。结论:Sal B增强BMSCs抗氧化应激能力从而减少H2O2刺激引起的细胞凋亡,其保护机制可能与参与调节凋亡相关信号通路MEK/ERK1/2和抑制细胞内活性氧生成有关。 展开更多
关键词 丹酚酸B 骨髓间质干细胞 氧化性应激 活性氧簇 细胞外信号调节激酶1/2
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