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题名河鲀毒素诱导菊黄东方鲀膜转运蛋白基因的表达
被引量：1
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作者
叶雅萍
伍和星
滕飞
鲍宝龙
龚小玲
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机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室
上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心
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出处
《上海海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第4期690-698,共9页
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基金
国家自然科学基金(31872546)。
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文摘
为探究参与河鲀肝脏和皮肤累积河鲀毒素(Tetrodotoxin, TTX)的过程及相关调控基因,按每克体质量河鲀0.25μg TTX剂量尾部肌肉注射人工繁育的菊黄东方鲀(Takifugu flavidus),发现肝脏中TTX含量在注射后4 h时最高(19.12 ng/g),24 h下降到8.92 ng/g, TTX主要在肝实质细胞中累积;皮肤中TTX含量一直处于上升趋势,4 h为13.70 ng/g, 24 h为22.91 ng/g;TTX主要在皮肤表皮层、基底层细胞中累积。比较对照组和注射24 h后肝脏和皮肤转录组发现:TTX注射导致肝脏组织338个基因上调、350个基因下调;而皮肤组织有598个基因上调,同时有595个基因下调;RT-qPCR验证slc2a12、slc5a7、slc25a22、slc25a15、slc35a3、arap1、ugt2a2、ggt5、psbp2等膜转运蛋白相关基因在注射TTX后在肝脏和皮肤中的表达水平显著上调,可能与TTX累积过程有关。
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关键词
菊黄东方鲀
河鲀毒素
免疫组化
液相色谱串联质谱
膜转运蛋白基因
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Keywords
Takifugu flavidus
tetrodotoxin
immunohistochemistry
liquid chromatography-tandem mass spectrometry
membrane transporter protein gene
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分类号
S917
[农业科学—水产科学]
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题名家蚕膜镁转运蛋白的表达及其纯化
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作者
田凤鸣
王瀚
卓平清
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机构
陇南师范高等专科学校农林技术学院
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出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2015年第6期570-574,578,共6页
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基金
国家高技术研究发展计划"863"项目(2011AA100603)
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文摘
目的在原核细胞中表达并纯化家蚕膜镁转运蛋白(Bombyx mori membrane magnesium transporter,Bm MMg T)。方法利用PCR法从家蚕蚕蛹c DNA文库中扩增Bm MMg T基因,对其进行生物信息学分析后,将该基因克隆至原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组克隆质粒p ET-32a-Bm MMg T,将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析柱和阴离子交换柱纯化后,进行SDS-PAGE鉴定。用无血清培养基(Mg2+饥饿)、镁离子终浓度分别为1、2、4、8 mmol/L的培养基培养Bm N细胞,设正常培养基培养的Bm N细胞作为对照,提取各组细胞总RNA,逆转录合成c DNA第1条链,以其为模板,荧光定量PCR检测体外Mg2+对Bm MMg T基因m RNA转录水平的影响。结果在c DNA文库中获得1个Bm MMg T基因,该蛋白是一个单次跨膜蛋白,等电点为6.7,相对分子质量约13 000。质粒p ET-32a-Bm-MMg T经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,表达的重组蛋白相对分子质量为31 000,主要以可溶性形式存在,表达量约占菌体总蛋白的60%,纯度约95%。与对照组细胞相比,处在镁饥饿状态下及不同浓度Mg Cl2处理的细胞,Bm MMg T基因m RNA转录水平差异均有统计学意义(P<0.05),且当Mg2+终浓度为4 mmol/L时,转录水平达到最高。结论成功在原核细胞中表达并纯化了Bm MMg T,并对其功能进行了初步探讨,为其后续的深入研究奠定了基础。
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关键词
家蚕
膜蛋白
镁转运蛋白
基因表达
纯化
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Keywords
Bombyx mori
membrane protein
Magnesium transporter protein
gene expression
Purification
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分类号
S881.2
[农业科学—特种经济动物饲养]
Q78
[农业科学—畜牧兽医]
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