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膜结合型TNF-α基因转导人胃癌细胞株的建立及其生物学特性研究 被引量:4
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作者 胡荫 许佐良 +1 位作者 于杰 张桂国 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第1期17-20,共4页
本研究利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体,将重组载体及空载体导入包装细胞CRIP.筛选G418抗性克隆。测定病毒滴度均为1×10^4CFU/ml,并转入胃癌细胞MGC-803.经筛选分别获得抗性克... 本研究利用逆转录病毒载体LXSN构建了插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体,将重组载体及空载体导入包装细胞CRIP.筛选G418抗性克隆。测定病毒滴度均为1×10^4CFU/ml,并转入胃癌细胞MGC-803.经筛选分别获得抗性克隆MGC-803^T及MGC-803^T,经Southern杂交证实目的基因已整合在MGC-803^T细胞基因组中。MGC-803^T对L929细胞有杀伤作用.而对照细胞无杀伤作用。MGC-803^T细胞的形态,体外增殖率无明显改变。裸鼠体内接种结果表明,与对照组相比,MGC-803^T细胞在裸鼠体内的生长受到明显抑制,表现为肿瘤发生延缓.肿瘤重量明显减轻。上述结果表明.逆转录病毒介导的突变型膜结合型TNF-α基因可在人胃癌细胞中获得有效表达.并能改变其生物学特性。 展开更多
关键词 膜结合型tnf-α基因 转导 胃癌细胞株 建立 生物学特性
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多聚甲醛固定法检测MGC803^T细胞膜表面分子功能的研究
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作者 胡荫 尹维刚 许佐良 《包头医学院学报》 CAS 1998年第2期1-2,共2页
用插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体转染人胃癌细胞MGC803,获得膜结合型TNF-α基因转染的阳性人胃癌细胞MGC803(MGCT803)。用多聚甲醛固定MGCT803及未转染的人胃癌组胞MGC8... 用插入突变的膜结合型TNF-α基因的重组逆转录病毒载体转染人胃癌细胞MGC803,获得膜结合型TNF-α基因转染的阳性人胃癌细胞MGC803(MGCT803)。用多聚甲醛固定MGCT803及未转染的人胃癌组胞MGC803(MGCN803),检测其细胞膜表面TNF-α的细胞毒活性。结果表明,MGCT803细胞对鼠纤维肉瘤细胞L929有杀伤作用,而对照细胞MGCN803无杀伤作用,说明逆转录病毒介导的膜结合型TNF-α基因在人胃癌细胞中获得有效表达,多聚甲醛固定后MGCT803细胞膜表面TNF-α活性仍然存在。认为多聚甲醛固定法用于检测细胞膜表面分子功能,方法简便、易行、敏感。 展开更多
关键词 多聚甲醛 细胞膜表面分子 MGC803 细胞因子
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膜结合型TNF-α基因对人胃癌细胞生长的影响
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作者 胡荫 尹维刚 +2 位作者 赵晶 许佐良 王芳 《宁波大学学报(理工版)》 CAS 2000年第2期102-105,共4页
目的:探讨突变的膜结合型 TNF-α基因对人胃癌细胞生长的影响.方法:用突变的 膜结合型 TNF-α基因作为目的基因,以逆转录病毒为载体将目的基因导 入人胃癌细胞 MGC803,经 G418筛选得到抗性克隆 MGCT803... 目的:探讨突变的膜结合型 TNF-α基因对人胃癌细胞生长的影响.方法:用突变的 膜结合型 TNF-α基因作为目的基因,以逆转录病毒为载体将目的基因导 入人胃癌细胞 MGC803,经 G418筛选得到抗性克隆 MGCT803结果: Southern杂交证实目的基因已整合在 MGCT803细胞中.用 ELISA方法检测MGCT803细胞表面TNF- α表达量明显增 高.MGCT803细胞形态、体外增殖能力无显著改变.裸鼠体内接种表明,MGCT803细胞在裸鼠体 内的生长受到明显抑制.结论:膜结合型TNF-α基因导入人胃癌细胞后其动物体内致瘤 性明显下降. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 人胃癌细胞 致瘤性
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单纯分泌型TNF-α真核表达质粒的构建及表达细胞株的建立 被引量:1
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作者 黄家强 卜夏 +2 位作者 史须 李卓娅 龚非力 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期6-9,共4页
目的揭示膜结合的TNF α前体(mTNF α)与分泌型TNF α(sTNF α)生物学活性的不同。方法在克隆出mTNF α基因的基础上,我们采用IL 2信号肽编码序列置换m TNF α前导肽编码序列,构建出只产生分泌型TNF α的真核表达质粒pBK sTNFm,并转染至... 目的揭示膜结合的TNF α前体(mTNF α)与分泌型TNF α(sTNF α)生物学活性的不同。方法在克隆出mTNF α基因的基础上,我们采用IL 2信号肽编码序列置换m TNF α前导肽编码序列,构建出只产生分泌型TNF α的真核表达质粒pBK sTNFm,并转染至NIH3T3细胞中。结果筛选出的阳性克隆细胞经Westernblot分析及活性测定显示,pBK sTNFm转染细胞裂解液及培养上清 ,均可检出相对分子质量 (Mr)17000的TNF α,且上清具有sTNF α活性,但细胞固定后其活性丧失。结论成功地构建了在真核细胞中只产生sTNF α的表达质粒,并建立相应的表达细胞株。为比较两种类型的TNF α的生物学活性及其作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 真核表达 质粒构建 细胞株 分泌型tnf
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CD_3AK介导的MHC非限制性杀瘤作用途径的研究 被引量:1
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作者 赵雅莉 施广霞 +1 位作者 郭连英 钱振超 《大连医科大学学报》 CAS 1998年第3期16-18,共3页
本实验探讨了小鼠CD3AK介导的MHC非限制性杀瘤作用途径。CD3AK可在体外杀伤小鼠肝癌细胞HCa-F和成纤维瘤细胞L929,但其培养上清无杀瘤活性,多聚甲醛固定能明显降低CD3AK对Hca-F的杀瘤活性,但对L9... 本实验探讨了小鼠CD3AK介导的MHC非限制性杀瘤作用途径。CD3AK可在体外杀伤小鼠肝癌细胞HCa-F和成纤维瘤细胞L929,但其培养上清无杀瘤活性,多聚甲醛固定能明显降低CD3AK对Hca-F的杀瘤活性,但对L929的杀瘤活性影响不大,结果表明CD3AK的杀瘤机制主要是直接杀伤。 展开更多
关键词 CD3AK 杀瘤作用途径 tnf
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