microRNA-10a对脓毒症小鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg免疫功能的影响 被引量：14

1

作者 陈隆望 邱俏檬 +4 位作者 连洁 李海啸 洪广亮 卢中秋 赵光举 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期152-158,共7页

目的探讨脓毒症小鼠CD4＋CD25＋Treg（regulatory cell）细胞中microRNA-10a（miR-10a）表达规律及与细胞免疫功能的关系。方法采用清沽级雄性Balb／c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔（ cecal ligation and puncture, CLP ）模型，分别... 目的探讨脓毒症小鼠CD4＋CD25＋Treg（regulatory cell）细胞中microRNA-10a（miR-10a）表达规律及与细胞免疫功能的关系。方法采用清沽级雄性Balb／c小鼠建立稳定的小鼠盲肠结扎穿孔（ cecal ligation and puncture, CLP ）模型，分别于术后1、3、5、7d处死小鼠，无菌留取脾脏，免疫磁珠法分选CD4＋T细胞与CD4＋CD25＋T细胞（CD4＋CD25＋Trego流式细胞术检测CD4＋CD25＋Treg胞内叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3（ Forkhead/winged helix transcription factor p3, Foxp3 ），CCK-8法检测脾效应T淋巴细胞增殖，实时定量PCR（Real—timePCR）检测Treg中miR-10a的基因表达水平。小鼠尾静脉注射慢病毒下调miR-10a，观察小鼠免疫功能。数据采用SPSS19．0统计软件进行数据处理，两组样本比较采用独立样本t检验，多组均数比较采用单因素方差分析（ANOVA）和Dunnett-t检验。结果正常组小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞在CD4＋T细胞中的比例为（7．34±1．2）％，造模后脓毒症小鼠脾脏CD4＋CD25＋Treg比例1、3、5、7d明显升高（P〈0．05o与假手术组相比，脓毒症小鼠Foxp3的平均荧光强度（ mean fluorescence intensity, MFI ）也明显高于假手术组（P〈0．05）。Real-imePCR检测CD4＋CD25＋reg中miR-10a的表达。结果发现假手术组小鼠与正常组小鼠相比差异无统计学意义（P〉0．05）。毒症小鼠Treg中miR-0a表达较假手术组升高（P〈0．05o脓毒症鼠尾静脉注射携带miR-10a抑制序列的慢病毒后，CD4＋CD25＋Treg／CD4＋T比例明显升高（P〈0．05），且Foxp3的平均荧光强度也明显增强（P〈0．05），CD4＋T细胞的增殖能力相应减弱（P〈0．05）。结论在脓毒症致病过程Treg中miR-10a表达上调，抑制miR-10a水平能够显著提高Treg的比例和促进免疫抑制功能。鉴于CD4＋CD25＋Treg在脓毒症免疫功能紊乱中的重要作用，miR-10a可能是脓毒症免疫调理治疗的有效靶点。 展开更多

关键词 调节性T细胞 脓毒症 microRNA-10a 叉头蛋白翼状螺旋转录因子P3 免疫功能 效应T细胞 细胞增殖 平均荧光强度

原文传递

Eplets配型方法在HLA-Ⅰ类抗体所致血小板输注无效患者中的应用评价 被引量：8

2

作者 邓晶 叶欣 +7 位作者 徐秀章 丁浩强 陈扬凯 邵媛 夏文杰 王嘉励 刘静 陈大伟 《中国输血杂志》 CAS 2018年第4期384-387,共4页

目的了解Eplets配型方法在HLA-Ⅰ类抗体所致血小板输注无效（PTR）患者中的适用性。方法以PCR-SBT方法检测24名PTR患者及血小板供者的HLA基因型;利用Luminex技术平台、采用抗-HLA检测试剂（LSA）检测患者的HLA特异性抗体（DSA）;再借助H... 目的了解Eplets配型方法在HLA-Ⅰ类抗体所致血小板输注无效（PTR）患者中的适用性。方法以PCR-SBT方法检测24名PTR患者及血小板供者的HLA基因型;利用Luminex技术平台、采用抗-HLA检测试剂（LSA）检测患者的HLA特异性抗体（DSA）;再借助HLA Matchmaker软件获得患者的预存HLA-Ⅰ类抗体对应的表位（Eplets）及DSA荧光指数中值（MFⅠ）;最后统计分析Eplets错配数对PTR的影响。结果对DSA不同MFⅠ阈值（1 000—3 000）的统计分析：DSA MFⅠ〈1 000时的血小板输注效果最佳,且随着DSA MFⅠ的增加,血小板输注效果均出现不同程度的下降。本组32次输注有效与PTR患者的DSA MFⅠ平均值分别为1 289.67±1 121.83 vs 4 078.60±2 578.57（P〈0.01）,Eplets错配数0—5的患者与错配数〉5的患者输注效果分别为29.38±22.47 vs 18.47±15.38（P〉0.05）。结论 Eplets配型方法结合DSAMFⅠ水平可筛选到适合的血小板供者,从而避免对于HLA-Ⅰ类抗体所致的PTR,保证输注效果。 展开更多

关键词 血小板输注无效 供者特异性抗体 表位 HLA-Ⅰ类抗体 荧光指数中值

下载PDF 职称材料

冠心病患者血白细胞不同亚群内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100含量的变化 被引量：6

3

作者 毛源杰 敖彩卉 +3 位作者 薛琳 齐丽彤 熊卓为 霍勇 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2006年第10期879-883,共5页

目的研究冠心病患者白细胞不同亚群内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100的变化,并分析其与冠状动脉狭窄病变的关系。方法对冠状动脉造影证实无冠状动脉病变者(n=18)和冠状动脉三支病变者(n=13)进行研究。通过逆转录聚合酶链反应和荧光共聚焦显... 目的研究冠心病患者白细胞不同亚群内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100的变化,并分析其与冠状动脉狭窄病变的关系。方法对冠状动脉造影证实无冠状动脉病变者(n=18)和冠状动脉三支病变者(n=13)进行研究。通过逆转录聚合酶链反应和荧光共聚焦显微镜、流式细胞仪分别检测细胞内载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100的基因表达和蛋白含量。结果通过逆转录聚合酶链反应发现白细胞不能合成载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100,而荧光共聚焦显微镜和流式细胞仪均证实白细胞三亚群内存在载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100。流式细胞仪定量分析发现,冠状动脉三支病变组与无冠状动脉病变组比较细胞内代表载脂蛋白B100含量的平均荧光强度粒细胞(417±250比183±88,P<0.05)、单核细胞(189±77比41±13,P<0.01)及淋巴细胞(102±65比16±6,P<0.01)都明显增加,分别增加了128%、364%和532%。经过与血浆载脂蛋白B100浓度校正后也存在明显差异(P<0.01)。结论白细胞各亚群均可携带载脂蛋白(a)和载脂蛋白B100,其中细胞内载脂蛋白B100含量增加与冠状动脉狭窄病变有关。 展开更多

关键词 内科学 白细胞内载脂蛋白含量的变化 流式细胞仪检测 冠心病 载脂蛋白(a) 载脂蛋白B100 白细胞

下载PDF 职称材料

手足口病患儿胃生长激素释放素水平与TLR4信号通路的相关性研究

4

作者 冯海鹰 陈裕佳 +4 位作者 黄波 梁庆 廖素雯 梁莹 廖必才 《内科》 2024年第3期257-261,共5页

目的 分析手足口病患儿胃生长激素释放素水平与Toll样受体(TLR)4信号通路的相关性,并探讨胃生长激素释放素在手足口病炎症免疫反应中的作用机制。方法 回顾性分析100例手足口病患儿的临床资料,根据病情将其分为轻症组(n=65)和重症组(n=3... 目的 分析手足口病患儿胃生长激素释放素水平与Toll样受体(TLR)4信号通路的相关性,并探讨胃生长激素释放素在手足口病炎症免疫反应中的作用机制。方法 回顾性分析100例手足口病患儿的临床资料,根据病情将其分为轻症组(n=65)和重症组(n=35),另选择100例健康儿童作为对照组(n=100)。比较三组胃生长激素释放素水平、TLR4阳性表达率和平均荧光强度(MFI),应用线性相关分析探究胃生长激素释放素水平与TLR4阳性表达率、MFI的相关性。结果 三组胃生长激素释放素水平、TLR4阳性表达率和MFI差异均有统计学意义(均P<0.05)。在胃生长激素释放素水平方面,对照组>轻症组>重症组;在TLR4阳性表达率和MFI方面,重症组>轻症组>对照组(均P<0.05)。线性相关分析结果显示,手足口病患儿胃生长激素释放素水平与TLR4阳性表达率(r=-0.729)、MFI(r=-0.697)均呈负相关(均P<0.05)。结论 手足口病患儿的胃生长激素释放素水平下降,TLR4阳性表达率和MFI升高,且胃生长激素释放素水平与TLR4阳性表达率、MFI均呈负相关。胃生长激素释放素可能在手足口病的发病机制炎症免疫反应中起到保护作用,具有抑制TLR4信号通路的作用。 展开更多

关键词 手足口病 胃生长激素释放素 TOLL样受体4 平均荧光强度

下载PDF 职称材料

小鼠骨髓来源树突状细胞体外诱导培养及其不同生长状态差异性探索 被引量：4

5

作者 刘钟 胡燕燕 +5 位作者 陈金波 董碧麟 马东霞 段武 李东升 陈柳青 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期190-195,共6页

目的:体外诱导扩增获取大量高纯度小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DC),并研究DC不同生长状态、不同培养时间的生物学特性差异。方法:重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant-murine granulocyte-macrophage colonysti... 目的:体外诱导扩增获取大量高纯度小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DC),并研究DC不同生长状态、不同培养时间的生物学特性差异。方法:重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(recombinant-murine granulocyte-macrophage colonystimulating factor,rmGM-CSF)体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,在培养接种后0 h及1 d、4 d、7 d、9 d、11 d用倒置光学显微镜动态观察DC的数量、存活率及形态学变化。分别收集9 d不加入重组小鼠白细胞介素-4(recombinant mouse interleukin-4,rmIL-4)及加入rmIL-4刺激的悬浮细胞和贴壁细胞,流式细胞术(flow cytometry,FACS)检测悬浮细胞和贴壁细胞表面分子CD11c、CD80、CD86、MHC-Ⅱ的表达水平。收集培养9 d、11 d的DC,利用FACS分析BMDC细胞CD11c表达水平。采用SPSS17.0软件进行统计学分析,两独立样本间的比较采用t检验。结果:培养0 h及1 d、4 d、7 d、9 d、11 d的BMDC成活率均为90%~95%。培养4 d,大量集落细胞团形成并逐渐增多。培养9 d,细胞明显变大,表面可见明显不规则树突或伪足。培养9 d,流式细胞术显示悬浮细胞表面标志CD11C^(+)CD80+、CD11C^(+)CD86、CD11C^(+)MHC-Ⅱ的表达比例分别为(88.10±2.41)%、(84.60±3.26)%、(92.90±3.93)%,高于贴壁细胞的(79.17±2.32)%、(75.40±4.41)%、(82.77±4.80)%,差异有统计学意义(P<0.05)。加入rmIL-4刺激与不加入rmIL-4 BMDC中CD11c+表达差异无统计学意义(P>0.05)。培养11 d,悬浮细胞及贴壁细胞的CD11c+表达明显高于培养9 d的表达(P<0.05)。结论:体外简易诱导培养可以获得高纯度小鼠骨髓来源的各具特性DC;rmGM-CSF单独或者联合rmIL-4诱导刺激对DC特异表面标志物CD11c+无明显影响;悬浮细胞的成熟度高于贴壁细胞;延长培养时间可提高CD11c+DC的产量及纯度。 展开更多

关键词 树突状细胞 表型 平均荧光强度 生长状态 培养时间 活性度

下载PDF 职称材料

多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群的影响 被引量：4

6

作者 杨锐创 胡燕 +8 位作者 屈蒙蒙 毕京峰 高鸿雁 柴燕涛 孙慧伟 冯帆 王志杰 邢小燕 侯俊 《临床检验杂志》 CAS 2020年第10期729-733,共5页

目的考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1%PFA(10 g/L)和4%PFA(40 g/L)进行重... 目的考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1%PFA(10 g/L)和4%PFA(40 g/L)进行重悬或固定,用流式细胞仪在固定0、4、8、12、24、48和72 h后检测CD19-CD3^+T、CD3^+CD4^+T、CD3^+CD8^+T、CD3-CD19^+B、CD3-CD56^+NK细胞占淋巴细胞百分比,及CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的平均荧光强度。结果与PBS对照组相比,72 h内,PFA浓度及固定时间对外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比均没有影响(P均>0.05);固定8 h内,PBS对各淋巴细胞亚群平均荧光强度均无影响,1%PFA组CD4平均荧光强度下降,4%PFA组CD45、CD3、CD4、CD8平均荧光强度均下降;固定24 h后,各淋巴细胞亚群平均荧光强度均下降,同时4%PFA固定后平均荧光强度均低于1%PFA(P<0.05)。结论使用流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群,细胞染色后若8 h内检测用PBS进行细胞重悬检测效果最好,PFA固定不应超过12 h,1%PFA固定效果优于4%PFA。 展开更多

关键词 流式细胞术 多聚甲醛 淋巴细胞亚群 平均荧光强度

下载PDF 职称材料

以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏体外评价方法的确定和验证 被引量：2

7

作者 董建欣 黄舒佳 +5 位作者 王宇 姜华 赵华琛 祝清芬 刘丽 李波 《药物评价研究》 CAS 2022年第1期20-29,共10页

目的确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育,在光照射或避光处理后,用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的... 目的确定并验证以细胞表面标志物CD54作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法将THP-1细胞与多种光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂和阴性受试物分别孵育,在光照射或避光处理后,用流式细胞仪测定细胞表面标志物CD54和CD86的表达水平并统计分析,进一步确定具体的评价指标,并对该方法的准确性、特异性、灵敏度、重复性进行验证。结果19种光致敏剂中有15种引起照射组THP-1细胞表达CD54的平均荧光强度(MFI)较非照射组显著增加(P<0.05、0.01),且照射组细胞表达CD54的相对荧光强度(RFI)值均在1.5以上。光刺激剂经光照射后也可引起细胞表达CD54的MFI显著增加(P<0.01),但经过预照射处理后,CD54的表达水平较直接照射组显著下降(P<0.01)。未经光照射条件下,皮肤致敏剂即可引起THP-1细胞表达CD54和CD86的MFI比对照组显著增加(P<0.01),光照后CD54的表达反而略有下降。在光照和避光条件下,皮肤刺激剂、阴性受试物(乳酸)均未引起细胞表达CD54或CD86的显著性变化。以CD54为评价指标的THP-1细胞光致敏评价方法检测光致敏剂的准确性、特异性和灵敏度分别是85.2%、100%和78.9%,具有良好的重复性。结论确定了THP-1细胞光致敏评价方法的细胞表面标志物评价指标为CD54,判定标准为:(1)光照后THP-1细胞表达CD54的MFI较照射前显著性增加;(2)光照后THP-1细胞表达CD54的RFI≥1.5;(3)当上述条件均满足时,对受试物进行预照射处理,结果仍然满足前2条标准。 展开更多

关键词 光致敏 THP-1细胞 CD54 CD86 平均荧光强度 相对荧光强度 方法学验证

原文传递

WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究 被引量：3

8

作者 胡绍燕 陈子兴 +5 位作者 赵晔 岑建农 谷敏 傅铮铮 何军 顾伟英 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期1050-1055,共6页

本研究探讨WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性,为开展基于WT1基因调控的白血病基因治疗奠定基础。以EGFP做报告基因,构建含有WT1基因启动子和增强子的重组表达载体;利用脂质体和电穿孔技术将重组质粒转染13个细胞株,包括WT... 本研究探讨WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性,为开展基于WT1基因调控的白血病基因治疗奠定基础。以EGFP做报告基因,构建含有WT1基因启动子和增强子的重组表达载体;利用脂质体和电穿孔技术将重组质粒转染13个细胞株,包括WT1基因高表达的白血病细胞株(K562、NB4、THP-1、SHI-1),WT1基因低表达的白血病细胞株(U937和Jurkat);非造血细胞株中WT1基因高表达的MCF-7、T47D、293株细胞和WT1基因低表达的ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44细胞株;利用流式细胞术检测转基因细胞稳定表达EGFP的平均荧光强度。以平均荧光强度代表启动子和(或)增强子的转录活性。结果表明:通过基因重组技术构建了含有WT1基因启动子的表达载体pEWP,以及含有WT1基因启动子和增强子的表达载体pEWPA。就启动子的转录活性而言,在非白血病细胞株中,ECV304细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体(pEGFP-1)的16.54±2.45倍,明显高于白血病细胞株(p<0.05);MCF-7和SHG44细胞次之,分别为9.46±1.10和7.29±0.73倍,HT-29细胞表达最低,仅为0.99±0.02倍。在人类血病细胞株中,K562细胞EGFP的平均荧光强度最高,是空载体pEGFP-1的2.93±0.27倍,明显高于Jurkat和SHI-1细胞株(p<0.05)。后二者分别为0.74±0.03和0.84±0.09倍。pEWPA可以使HT-29、SHI-1和K562细胞中WT1基因启动子的转录活性增强,分别增强到4.81、3.06和1.01倍。结论:WT1基因启动子的转录活性与细胞内在WT1基因的表达水平不相关,增强子增强部分细胞株中WT1基因启动子的转录活性,但不具有造血组织特异性。 展开更多

关键词 WT1基因 WT1基因启动子 WT1基因增强子 平均荧光强度 白血病细胞株 造血组织特异性

下载PDF 职称材料

量子点流式微球技术定量检测血清胃癌相关抗原MG7的方法学建立及评价 被引量：3

9

作者 胡晓璐 段荣 +1 位作者 柯江维 王占科 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期894-897,共4页

目的建立一种基于量子点流式微球技术检测胃癌相关抗原MG7的方法,并对该方法进行评价。方法将兔抗人MG7多克隆抗体与5μm聚苯乙烯微球耦联,与MG7结合,加入鼠抗人MG7单克隆抗体,最后加入生物素化羊抗鼠Ig G和链霉亲合素化量子点,通过流... 目的建立一种基于量子点流式微球技术检测胃癌相关抗原MG7的方法,并对该方法进行评价。方法将兔抗人MG7多克隆抗体与5μm聚苯乙烯微球耦联,与MG7结合,加入鼠抗人MG7单克隆抗体,最后加入生物素化羊抗鼠Ig G和链霉亲合素化量子点,通过流式细胞仪检测量子点平均荧光强度（mean fluorescent intensity,MFI）。对该方法的灵敏度、线性范围、精密度、干扰实验、阳性临界值等指标进行初步评价,并检测19例胃癌、23例胃溃疡、25例浅表性胃炎、21例萎缩性胃炎/增生患者和25例体检健康者血清MG7水平。结果聚苯乙烯微球粒径均一性好,2 h为最佳耦联时间,耦联率为67.43%。方法检测灵敏度为0.21 ng/m L,线性范围为0.39~100 ng/m L。体检健康者混合血清及胃癌组混合血清的变异系数分别为10.43%和7.87%。低浓度胆固醇（6.50 mmol/L）、胆红素（0.15 mmol/L）和三酰甘油（18.00 mmol/L）对检测干扰较小。ROC曲线下面积（AUCROC）为0.922,最佳临界值为15.00 ng/m L。胃癌组血清MG7浓度显著高于体检健康组、浅表性胃炎组、胃溃疡组、萎缩性胃炎/增生组（P均〈0.01）;萎缩性胃炎/增生组MG7浓度显著高于体检健康组、浅表性胃炎组、胃溃疡组（P均〈0.01）;胃溃疡组MG7浓度高于体检健康组（P〈0.05）;以15.00 ng/m L为临界值时,胃癌阳性检出率为73.68%。结论本实验建立的量子点流式微球技术可用于血清胃癌相关抗原MG7的定量测定,其检测性能良好,检测结果与临床疾病发展规律相符合。 展开更多

关键词 量子点 流式微球技术 MG7 平均荧光强度

下载PDF 职称材料

HLA-Ⅰ类基因及其抗体定量强度与配型血小板临床输注效果的相关性 被引量：1

10

作者 黄新宇 陈舒 +4 位作者 刘瑛 张兵 何吉 许先国 朱发明 《中国输血杂志》 CAS 2022年第11期1101-1104,共4页

目的 探讨具有不同平均荧光强度(MFI)的抗-HLA-Ⅰ对HLA-A,-B基因配型血小板输注效果的影响,为临床血小板基因配型输注策略提供科学数据。方法 从81名临床血小板输注无效(PTR)、申请在本实验室血小板基因数据库中搜寻HLA-Ⅰ类基因配合型... 目的 探讨具有不同平均荧光强度(MFI)的抗-HLA-Ⅰ对HLA-A,-B基因配型血小板输注效果的影响,为临床血小板基因配型输注策略提供科学数据。方法 从81名临床血小板输注无效(PTR)、申请在本实验室血小板基因数据库中搜寻HLA-Ⅰ类基因配合型血小板的患者中,选择28名需要采用供者特异性抗体(DSA)部分规避策略患者(MFI<5 000),按输注患者抗-HLA-Ⅰ靶向抗原血小板MFI值分为阴性输注者(MFI<500)(A组)和阳性输注者(MFI≥500),后者进一步分为B组(500≤MFI<1 000)、C组(1 000≤MFI<3 000)、D组(MFI≥3 000);以校正血小板计数增加值(CCI)比较4组患者的血小板输注效果。结果 28名MFI<5 000的做血小板基因配型患者,有19例(67.86%)成功完成72次有效输注。A、B、C、D组首次CCI(×10~9/L)分别为10.27±7.46、7.58±4.75(P>0.05)、17.36±7.63(P>0.05)、-0.77±2.30(P<0.05)。结论 PTR患者采用HLA-Ⅰ基因配型血小板可以根据患者情况适当调整MFI阈值(<2 000)而不影响血小板输注效果。 展开更多

关键词 血小板抗体强度 血小板基因配型 人类白细胞抗原抗体 平均荧光强度 血小板输注无效 校正血小板计数增加值

下载PDF 职称材料

白血病耐药细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶对P-糖蛋白药物泵出功能的影响 被引量：1

11

作者 张杨杨 谢可鸣 +4 位作者 李玉玲 穆会君 殷莹 张滨 谢平 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第4期605-608,612,共5页

目的探讨人白血病多药耐药细胞株K562/AO2中葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)对P-糖蛋白(P-gp)泵出功能的影响,以便进一步研究GCS在白血病细胞耐药形成中的作用机制。方法采用RNA干扰技术分别靶向干扰K562/AO2中的GCS和多药耐药基因1(MDR1),并... 目的探讨人白血病多药耐药细胞株K562/AO2中葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)对P-糖蛋白(P-gp)泵出功能的影响,以便进一步研究GCS在白血病细胞耐药形成中的作用机制。方法采用RNA干扰技术分别靶向干扰K562/AO2中的GCS和多药耐药基因1(MDR1),并通过荧光定量PCR检测小干扰RNA(siRNA)的干扰效果;用流式细胞术检测细胞内罗丹明123(rh123)的滞留量,以rh123的平均荧光强度(MFI)反映P-gp蛋白的泵出功能。结果 GCSsiRNA和MDR1siRNA对各自靶基因的抑制率分别是(68±5.72)%和(75.3±2.62)%;转染siRNA 48 h后,GCS干扰组MFI为255.75±76.1,MDR1干扰组MFI为357.25±41.57,分别是阴性干扰组的3.3倍和4.6倍。结论特异性的沉默GCS基因可以降低P-gp的泵出功能,提示GCS可通过协同P-gp的药物泵出功能参与白血病细胞的耐药形成过程。 展开更多

关键词 葡萄糖神经酰胺合成酶 P-糖蛋白 罗丹明123 RNA干扰 白血病 平均荧光强度

原文传递

TdT在儿童期B-ALL中的表达特点 被引量：1

12

作者 徐翀 蒋黎敏 +1 位作者 李莉 沈立松 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第6期436-439,442,共5页

目的分析末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达特点,并探讨TdT在B-ALL微小残留(MRD)检测中的意义。方法用TdT/CD10/CD34/CD19四色荧光抗体组合对初发时的白血病细胞进行检测,以3例正常骨髓标本作为对照... 目的分析末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在儿童B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)中的表达特点,并探讨TdT在B-ALL微小残留(MRD)检测中的意义。方法用TdT/CD10/CD34/CD19四色荧光抗体组合对初发时的白血病细胞进行检测,以3例正常骨髓标本作为对照,分析TdT在B-ALL中的表达特点。同时,以能够使白血病细胞在TdT/CD10双参数点图上出现的位置完全不同于TdT+CD19+的正常骨髓细胞分布的位置,作为TdT/CD10/CD34/CD19组合有效并可用于MRD监测的标准。以该组合对病人诱导治疗结束后以及持续治疗过程中的骨髓标本进行监测。结果在70例B-ALL中,TdT阳性为63例(90.0％)。其中,Common B-ALL中的TdT阳性例数比例,及TdT阳性表达率都显著高于其它各期;其它各期之间无显著差异。虽然大部分病例的TdT与CD34都呈现较高的阳性表达率,但TdT与CD34阳性表达率之间并无明显的相关性。Pro B-ALL、Pre B-ALL和Common B-ALL之间,平均TdT MFI无显著差异,但三者中除了前两者的平均TdT MFI都显著低于正常骨髓中的TdT+CD19+细胞外,Common B-ALL的平均TdT MFI与正常细胞无显著差异。所有B-ALL总的平均TdT MFI显著低于正常细胞。应用TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合可在65.7%的B-ALL病例中进行MRD检测,其有效频率高于其它用于MRD检测的抗体组合。 展开更多

关键词 TDT 儿童期 B-ALL 末端脱氧核苷酸转移酶 微小残留病 基因表达

下载PDF 职称材料

整合素连接激酶在强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞中表达的研究 被引量：1

13

作者 邓伟明 廖泽涛 +1 位作者 黄志祥 李天旺 《临床和实验医学杂志》 2016年第4期320-322,共3页

目的对比强直性脊柱炎(AS)患者、健康志愿者(HV)和类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中整合素连接激酶(ILK)的表达情况,探讨ILK在AS疾病发生发展中的可能作用。方法外周血样本分别采集自AS患者、HV及RA患者各30例,通过流式... 目的对比强直性脊柱炎(AS)患者、健康志愿者(HV)和类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中整合素连接激酶(ILK)的表达情况,探讨ILK在AS疾病发生发展中的可能作用。方法外周血样本分别采集自AS患者、HV及RA患者各30例,通过流式细胞仪分析PBMCs的ILK蛋白平均荧光强度(MFI),同时通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中ILK在mRNA表达水平,比较各实验组中ILK在蛋白质水平和转录水平的表达差异。结果 AS组CD3+T淋巴细胞及CD14+单核细胞中ILK MFI水平均明显高于HV组及RA组(P<0.05),而HV与RA组间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测PBMCs中TLN mRNA在AS患者的相对表达量同样高于HV组和RA组(1.82±0.30,0.23±0.04,0.26±0.04,P<0.05),而HV与RA组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论AS患者PBMCs中ILK水平明显高于HV及RA患者,提示ILK可能在AS发病及炎症活动过程中起发挥作用。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 外周血单个核细胞 整合素连接激酶 平均荧光强度 逆转录聚合酶链反应

下载PDF 职称材料

聚肌胞对人早孕绒毛外滋养细胞TLR3表达的调节作用

14

作者 王菊 钟刚 《医学信息》 2011年第23期141-143,共3页

目的通过体外实验研究Toll样受体3（TLR3）在人早孕绒毛外滋养细胞株TEV—I的表达及聚肌胞（PolyI：c）对TLR3mRNA和蛋白的调节作用，方法体外培乔TEV—I细胞；用不同时间及浓度聚肌胞刺激TEV～I细胞后RT—PCR和流式细胞仪检测其TLR3mRN... 目的通过体外实验研究Toll样受体3（TLR3）在人早孕绒毛外滋养细胞株TEV—I的表达及聚肌胞（PolyI：c）对TLR3mRNA和蛋白的调节作用，方法体外培乔TEV—I细胞；用不同时间及浓度聚肌胞刺激TEV～I细胞后RT—PCR和流式细胞仪检测其TLR3mRNA和蛋白的表达变化；免疫细胞化学SP染色法检测TLR3蛋白的定位表达。结果①PolyI：C刺激可上调TEv—I细胞株TLR3raRNA的表达（P〈0.01），且与刺激时间和剂量呈正相关。②PolyI：C刺激可上调TEV—I细胞株TLR3蛋白表达的平均荧光强度，（P〈0．01）；但荧光阳性细胞数刺激12h与刺激前比较无统计学意义（胗005）；刺激24h、48h的荧光阳性细胞数与刺激时间和剂量呈正关。（24hP〈0.05；48hP〈0.01）。③免疫细胞化学显示TLR3主要定位于TEV—I细胞株的细胞浆。结论TEV—I细胞株TLR3的mRNA及蛋白的表达与poly（I：C）刺激时间及剂量呈正相关；TLR3主要定位于TEV—I细胞株的细胞浆，而细胞核及细胞膜没有观测到明显表达。提示人早孕绒毛外滋养细胞可能通过细胞浆的TLR3参与早孕母一胎界面的免疫反应． 展开更多

关键词 TLR3 poly(I:C) TEV—I细胞株 流式细胞仪:平均荧光强度 荧光阳性细胞数 免疫细胞化学

下载PDF 职称材料

强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞踝蛋白1表达的研究

15

作者 邓伟明 廖泽涛 +2 位作者 黄志祥 郭欣 李天旺 《新医学》 2016年第6期373-376,共4页

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者、类风湿关节炎(RA)患者及健康志愿者(HV)外周血单个核细胞(PBMC)中踝蛋白1的表达水平及其差异。方法采集AS、RA患者及HV外周血样本各30例,流式细胞术分析CD3^+T细胞及CD14^+单核细胞中踝蛋白1蛋白平均荧... 目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者、类风湿关节炎(RA)患者及健康志愿者(HV)外周血单个核细胞(PBMC)中踝蛋白1的表达水平及其差异。方法采集AS、RA患者及HV外周血样本各30例,流式细胞术分析CD3^+T细胞及CD14^+单核细胞中踝蛋白1蛋白平均荧光强度(MFI),逆转录PCR(RT-PCR)检测PBMC中踝蛋白1 mRNA表达水平,比较组间踝蛋白1在蛋白及mRNA表达的差异。结果在CD3^+T细胞及CD14^+单核细胞中,AS患者的踝蛋白1 MFI水平均高于HV和RA患者(P均<0.05),而HV与RA患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。RTPCR提示AS患者、HV及RA患者踝蛋白1 mRNA相对表达水平分别为1.37±0.22、0.26±0.05、0.27±0.06,AS患者的踝蛋白1 mRNA相对表达水平均高于HV和RA患者(P均<0.05)。结论AS患者PBMC中踝蛋白1表达水平明显高于HV及RA患者,提示踝蛋白1可能在AS发病机制中发挥作用。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 外周血单个核细胞 踝蛋白1 平均荧光强度 逆转录聚合酶链反应

下载PDF 职称材料

流式细胞术检测抗生素最低抑菌浓度 被引量：13

16

作者 马筱玲 李庆 翟志敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期36-39,共4页

目的　建立一种流式细胞术 (FCM )快速检测抗生素最低抑菌浓度 (MIC)的方法 ,与常规药敏试验结果进行比较 ,探讨其应用价值。方法　取 2 0株肠杆菌科细菌 ,用碘化丙啶 (PI)染色 ,分别检测阴性对照管和MIC浓度抗生素作用管的平均荧光强度... 目的　建立一种流式细胞术 (FCM )快速检测抗生素最低抑菌浓度 (MIC)的方法 ,与常规药敏试验结果进行比较 ,探讨其应用价值。方法　取 2 0株肠杆菌科细菌 ,用碘化丙啶 (PI)染色 ,分别检测阴性对照管和MIC浓度抗生素作用管的平均荧光强度 (MFI) ,计算两者比值 ,据此 ,设定流式细胞药敏试验 (FCST)检测MIC的判断值 ,根据设定的判断值对 2 8株临床分离细菌同时进行常规药敏和FCST双盲测定。结果　 2 0株肠杆菌科细菌测得的MFI比值 x为 2 .0 7,CV为 0 .3 1;将MFI大于阴性对照细菌 2倍 (增加 10 0 % )的最低药物浓度定义为该菌的MIC ,2 8株临床菌株FCST所测得的MIC与常规药敏试验相比r=0 .92 ,(P <0 .0 0 1) ,回归方程为 :Y =1.4X -0 .48。结论　FCST与常规药敏试验结果有显著相关性 ,并且具有快速、稳定、准确、便于自动化等优点 ,有着较大的临床应用前景。 展开更多

关键词 流式细胞术 抗生素 最低抑菌浓度 平均荧光强度 药敏试验 合理用药

原文传递

nCD64对化疗后血液肿瘤患者细菌感染的诊断意义 被引量：12

17

作者 史晋叔 张娟 +1 位作者 吴琼 李剑 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期852-855,共4页

目的:探讨化疗后的血液肿瘤患者外周血中中性粒细胞CD64(neutrophil CD64,n CD64)平均荧光强度对细菌感染的诊断意义。方法:采用流式细胞术测定研究对象外周血n CD64平均荧光强度,并测定部分研究对象的降钙素原(PCT)及C-反应蛋白(CRP)... 目的:探讨化疗后的血液肿瘤患者外周血中中性粒细胞CD64(neutrophil CD64,n CD64)平均荧光强度对细菌感染的诊断意义。方法:采用流式细胞术测定研究对象外周血n CD64平均荧光强度,并测定部分研究对象的降钙素原(PCT)及C-反应蛋白(CRP)值作为对照;通过连续动态监测部分血液肿瘤患者外周血n CD64平均荧光强度,分析其与细菌感染之间的关系。结果:n CD64的表达不受中性粒细胞数量的影响(P>0.01),感染组、动态监测组n CD64平均荧光强度及PCT、CRP值均明显高于未感染组(P<0.01);n CD64平均荧光强度诊断细菌感染的敏感性及特异性高于PCT及CRP。结论:n CD64平均荧光强度可作为化疗后血液肿瘤患者细菌感染的诊断指标,并可在一定程度上预测细菌感染。 展开更多

关键词 n CD64平均荧光强度 细菌感染 化疗 血液肿瘤

下载PDF 职称材料

CD64指数、NEU%、NLR比值及PCT对2型糖尿病酮症酸中毒合并细菌感染的预测价值 被引量：6

18

作者 赵富利 康艳丽 +2 位作者 赵迪 马瑜瑾 梁丽君 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第16期2439-2443,共5页

目的 探究外周血CD64平均荧光强度指数(CD64指数)、中性粒细胞百分比(NEU%)、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值(NLR比值)及降钙素原(PCT)水平对2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)患者合并细菌感染的预测价值。方法 选择2019年1月-2021年1月来河... 目的 探究外周血CD64平均荧光强度指数(CD64指数)、中性粒细胞百分比(NEU%)、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值(NLR比值)及降钙素原(PCT)水平对2型糖尿病酮症酸中毒(DKA)患者合并细菌感染的预测价值。方法 选择2019年1月-2021年1月来河南科技大学第一附属医院就诊的2型糖尿病DKA患者110例,根据是否合并细菌感染,分为感染组(n=52)和未感染组(n=58)。患者入院后,收集其一般资料、生化指标、外周血CD64指数、NEU%、NLR比值及PCT水平,分析感染组患者病原菌分布。根据患者感染程度,分为轻度感染组(n=29)及重度感染组(n=23),探究四项指标与患者感染程度相关性。结果 DKA合并细菌感染组患者最常见细菌类型为金黄色葡萄球菌,占19.23%,其次为大肠埃希菌,占17.31%;DKA合并细菌感染组外周血CD64指数、NEU%、NLR比值及PCT水平均高于未感染组(P<0.05);重度感染组患者的四项指标水平均高于轻度感染组(P<0.05),且四项指标水平与患者感染程度均呈正相关(P<0.05);ROC曲线分析显示四项指标联合检测预测DKA合并细菌感染的AUC值高于单一CD64指数、NEU%、NLR比值及PCT检测。结论 外周血CD64指数、NEU%、NLR比值及PCT水平对早期DKA合并细菌感染具有一定预测作用,且四项指标联合检测预测价值最高。 展开更多

关键词 糖尿病酮症酸中毒 细菌感染 CD64平均荧光强度指数 中性粒细胞百分比 中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值 降钙素原

原文传递

以细胞表面标志物为研究指标的光致敏体外评价方法 被引量：2

19

作者 赵华琛 刘丽 李波 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期408-417,共10页

目的:建立一种以细胞表面标志物作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法:应用THP-1细胞,分别与光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性受试物等10余种受试物进行孵育,紫外照射和非照射条件下分别检测细胞表面标志物CD54和C... 目的:建立一种以细胞表面标志物作为评价指标的光致敏体外评价方法。方法:应用THP-1细胞,分别与光致敏剂、光刺激剂、皮肤致敏剂、皮肤刺激剂、阴性受试物等10余种受试物进行孵育,紫外照射和非照射条件下分别检测细胞表面标志物CD54和CD86的表达变化,确定合适的辐照强度、受试物剂量和光照后检测时间点,并确定评价光致敏的敏感指标和初步判定标准。结果:光致敏剂与THP-1细胞孵育并经紫外照射后,表达CD54的THP-1细胞百分比及平均荧光强度MFI比非照射组显著增加,相对荧光强度RFI在1. 4以上。光致敏剂未引起CD86表达的明显变化。其他受试物模型在照射前后CD54的MFI未见显著变化或变化程度明显低于光致敏剂。皮肤致敏剂引起的细胞表面标志物变化特点与光致敏剂明显不同。结论:THP-1细胞表面标志物CD54对于评价化合物光致敏性具有良好的灵敏度和特异性,本研究建立了一种应用细胞表面标志物进行光致敏性评价的体外方法,初步确定了评价指标和判定标准。 展开更多

关键词 光致敏 THP-1细胞 细胞表面标志物 平均/相对荧光强度

原文传递

红细胞免疫指标在老年股骨粗隆间骨折患者术后肺炎发生中的应用价值 被引量：2

20

作者 李韶华 杜慧杰 +3 位作者 张进一 常建设 李瑞峰 银晓永 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第12期1469-1472,1476,共5页

目的研究红细胞免疫指标在老年股骨粗隆间骨折患者术后肺炎发生中的应用价值。方法选择2018年6月至2020年6月该院骨科收治的老年股骨粗隆间骨折患者770例为研究对象,将术后发生肺炎的46例患者纳入肺炎组,未发生其他任何感染的724例患者... 目的研究红细胞免疫指标在老年股骨粗隆间骨折患者术后肺炎发生中的应用价值。方法选择2018年6月至2020年6月该院骨科收治的老年股骨粗隆间骨折患者770例为研究对象,将术后发生肺炎的46例患者纳入肺炎组,未发生其他任何感染的724例患者纳入对照组。分析白细胞计数(WBC)、红细胞免疫指标[红细胞补体受体1花环率(ECR1-RR)、红细胞补体受体1几何平均荧光强度(ECR1-GMFI)]与患者术后发生肺炎的相关性;分析患者术后发生肺炎的危险因素;分析ECR1-GMFI、WBC单独及联合检测对患者术后发生肺炎的诊断价值。结果WBC水平与患者术后肺炎发生呈正相关(r=0.550,P<0.05);ECR1-RR、ECR1-GMFI水平与患者术后肺炎发生呈负相关(r=-0.289、-0.313,P<0.05)。年龄>80岁、吸烟、WBC>10×10^(9)/L、贫血、标准化的ECR1-GMFI水平下降、美国麻醉医师协会分级≥Ⅲ级、手术时间≥60 min是患者术后发生肺炎的独立危险因素(P<0.05)。ECR1-GMFI联合WBC诊断患者术后发生肺炎的曲线下面积为0.984,灵敏度为96.32%,特异度为91.57%,高于2项指标单独检测。结论ECR1-GMFI是老年股骨粗隆间骨折患者术后发生肺炎的独立危险因素,且将其与WBC联合还可提高对患者术后肺炎发生的诊断效能。 展开更多

关键词 股骨粗隆间骨折 肺炎 红细胞补体受体1花环率 红细胞补体受体1几何平均荧光强度

下载PDF 职称材料