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IGF1通过BMP2-Smad1/5信号通路调控犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化 被引量：6
1
作者 廖春晖 李明飞 +2 位作者 叶金梅 彭伟 陈松龄 《口腔疾病防治》 2020年第1期16-23,共8页
目的探讨骨形态形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP2)-Smad1/5及p38MAPK信号通路在胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)介导的促犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化中... 目的探讨骨形态形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP2)-Smad1/5及p38MAPK信号通路在胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF1)介导的促犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化中的作用。方法构建表达胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor1,IGF1)基因的重组腺病毒载体(recombinant adenovirus,rAdv)Ad-IGF1。感染Ad-IGF1的犬上颌窦黏膜干细胞,经成骨诱导培养后,qRT-PCR和Western blot检测BMP-Smads信号通路中重要信号蛋白Smad1/5的磷酸化水平和BMP2蛋白的表达;免疫组化观察磷酸化Smad1/5核转位情况;qRT-PCR及Western blot检测BMP-Smads通路抑制剂Noggin和p38MAPK信号通路抑制剂SB203580对IGF1介导的促犬MSMSCs成骨分化的影响。结果成功构建IGF1基因表达重组腺病毒载体Ad-IGF1;感染Ad-IGF1的犬MSMSCs,经成骨诱导培养后,Smad1/5的磷酸化水平和BMP2蛋白的表达升高,IGF1可促使Smad1/5核转位;BMP-Smads信号通路抑制剂Noggin可抑制Smad1/5的磷酸化,降低成骨标志物Runx2、OPN和ALP mRNA的表达,钙结节形成减少。p38MAPK信号通路抑制剂SB203580不能降低Ad-IGF1犬MSMSCs的p38磷酸化水平,亦不能降低成骨标志物Runx2、OPN和ALP mRNA的表达。结论犬MSMSCs成骨分化过程中,IGF1通过经典的Smads蛋白依赖性信号转导通路BMP2-Smad1/5促进成骨,而Smads蛋白非依赖性信号转导通路p38MAPK在IGF1介导的犬MSMSCs成骨过程中可能并不发挥作用。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 上颌窦黏膜干细胞 BMP2⁃Smad1/5信号通路 P38MAPK信号通路 成骨分化 Runx2 骨桥蛋白 碱性磷酸酶
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犬上颌窦黏膜干细胞的培养和成骨性能的鉴定 被引量：2
2
作者 张静 朱双喜 +3 位作者 彭伟 李祥 荣琼 陈松龄 《口腔疾病防治》 2018年第7期422-427,共6页
目的探讨犬上颌窦黏膜干细胞的成骨性能。方法取健康Beagle犬上颌窦黏膜,免疫磁珠法分选CD146阳性细胞,培养犬上颌窦黏膜干细胞。流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD146和CD44、CD34。犬上颌窦黏膜干细胞经基础培养(基础培养组)和成骨... 目的探讨犬上颌窦黏膜干细胞的成骨性能。方法取健康Beagle犬上颌窦黏膜,免疫磁珠法分选CD146阳性细胞,培养犬上颌窦黏膜干细胞。流式细胞术检测一代细胞的表面抗原CD146和CD44、CD34。犬上颌窦黏膜干细胞经基础培养(基础培养组)和成骨诱导培养(成骨诱导组)后,应用Real-time PCR、免疫组化法检测2组成骨相关基因mRNA和蛋白的表达,应用ALP测试盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,应用茜素红染色、Von KOSSA染色观察成骨诱导后矿化结节的形成。结果成功培养犬上颌窦黏膜干细胞,流式细胞术检测显示CD146和CD44阳性、CD34阴性。成骨诱导组犬上颌窦黏膜干细胞Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)(t=14.44,P<0.001)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)(t=7.85,P=0.001)和ALP mRNA(t=14.27,P<0.001)表达量明显高于基础培养组,差异均有统计学意义;成骨诱导组RUNX2和OPN蛋白表达水平增强。犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后,与基础培养组相比,ALP活性增高,3 d(t=8.79,P<0.001)、7 d(t=9.75,P<0.001)、14 d(t=12.14,P<0.001)、21 d(t=19.62,P<0.001)、28 d(t=17.53,P<0.001)时,成骨诱导组明显高于基础培养组;犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导后茜素红和Von KOSSA染色可见到明显的矿化结节。结论犬上颌窦黏膜干细胞具有成骨能力。 展开更多
关键词 上颌窦黏膜 干细胞 成骨 碱性磷酸酶 Runt相关转录因子2 骨桥蛋白 矿化结节
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miR-27a调控比格犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化的研究 被引量：1
3
作者 张静 朱双喜 +3 位作者 荣琼 彭伟 李祥 陈松龄 《口腔疾病防治》 2018年第8期484-490,共7页
目的检测miR-27a在犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化过程中的表达情况,探讨其在犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化中的作用。方法体外培养犬上颌窦黏膜干细胞,经成骨诱导培养后,RT-PCR检测miR-27a的... 目的检测miR-27a在犬上颌窦黏膜干细胞(maxillary sinus membrane stem cells,MSMSCs)成骨分化过程中的表达情况,探讨其在犬上颌窦黏膜干细胞成骨分化中的作用。方法体外培养犬上颌窦黏膜干细胞,经成骨诱导培养后,RT-PCR检测miR-27a的表达。犬上颌窦黏膜干细胞转染pre-miR-27a和anti-miR-27a后,RT-PCR检测Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)m RNA的表达,Western blot检测Runx2和OPN蛋白的表达。转染pre-miR-27a的细胞成骨诱导培养后与BioOss复合,建立裸鼠皮下异位成骨模型,观察miR-27a体内抑制成骨情况。结果犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,miR-27a表达量降低。miR-27a 1 d(tD=3.795,P=0.023),3 d(tD=4.493,P=0.011),7 d(tD=11.591,P<0.001),14 d(tD=12.542,P<0.001),21 d(tD=5.621,P=0.008)的表达量均高于0 d组。转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,与阴性对照组相比,成骨标志物Runx2 m RNA(t=4.923,P=0.007)及蛋白(t=4.425,P=0.008)和OPN m RNA(t=5.253,P=0.006)及蛋白(t=5.132,P=0.006)表达量明显降低。相反,转染anti-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞经成骨诱导培养后,Runx2(t=3.925,P=0.013)和OPN(t=3.712,P=0.019)m RNA表达量比阴性对照组明显升高。单纯培养细胞与Bio-Oss复合后,在裸鼠皮下有成骨表现;但转染pre-miR-27a的犬上颌窦黏膜干细胞与Bio-Oss复合后,犬上颌窦黏膜干细胞在裸鼠皮下异位新骨形成面积减少(t=7.219,P=0.002)。结论 miR-27a负向调控上颌窦黏膜干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 miR-27a 上颌窦黏膜干细胞 成骨分化 Runt相关转录因子2 骨桥蛋白
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