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酵母细胞壁主要结构蛋白CWP33的纯化与研究 被引量：2
1
作者 张西平 黄昆 +2 位作者 黄磊 张楚瑜 王鄂生 《武汉大学学报（自然科学版）》 CSCD 1998年第2期245-248,共4页
在酵母Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ细胞壁上发现一种细胞壁主要结构蛋白（ＣＷＰ３３），其分子量为３３×１０３，与其它细胞壁蛋白不同，该蛋白在细胞壁上对胰蛋白酶作用不敏感，而其它细胞壁蛋白组分几乎完全被胰蛋白酶降解．利... 在酵母Ｃａｎｄｉｄａｕｔｉｌｉｓ细胞壁上发现一种细胞壁主要结构蛋白（ＣＷＰ３３），其分子量为３３×１０３，与其它细胞壁蛋白不同，该蛋白在细胞壁上对胰蛋白酶作用不敏感，而其它细胞壁蛋白组分几乎完全被胰蛋白酶降解．利用这一性质将该蛋白从细胞壁上抽提后，经ＤＥＡＥ－纤维素离子交换柱层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ凝胶层析得到纯化．经研究ＣＷＰ３３蛋白具有葡聚糖内切酶活性，可以水解地衣糖，但不能水解对硝基苯葡萄糖苷．该蛋白可能具有重要的结构功能． 展开更多
关键词 细胞壁 结构蛋白 酵母
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蓝舌病病毒血清Ⅰ型VP2与VP5、VP3与VP7两组蛋白在杆状病毒系统中的表达与鉴定
2
作者 李占鸿 杨恒 +3 位作者 宋子昂 高林 李华春 廖德芳 《中国动物检疫》 CAS 2019年第5期77-84,共8页
为表达具有天然构象的蓝舌病病毒血清1型(BTV1)主要结构蛋白VP2、VP3、VP5和VP7,研制针对流行于我国的BTV1型毒株的病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)疫苗提供基础,将编码BTV1 VP2和VP5蛋白的基因分别克隆到双表达载体pFastBacDual... 为表达具有天然构象的蓝舌病病毒血清1型(BTV1)主要结构蛋白VP2、VP3、VP5和VP7,研制针对流行于我国的BTV1型毒株的病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)疫苗提供基础,将编码BTV1 VP2和VP5蛋白的基因分别克隆到双表达载体pFastBacDual的启动子pPH和pP10下游,构建重组质粒pFastBacDualBTV1-VP2-VP5,将重组质粒转化DH10Bac感受态细胞,获得重组穿梭质粒rBacmidBTV1-VP2-VP5,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBacBTV1-VP2-VP5;按照同样策略,制备重组杆状病毒rBacBTV1-VP3-VP7。使用兔抗BTV1-VP5蛋白多克隆抗体和鼠抗BTV-VP7蛋白单克隆抗体,分别对rBacBTV1-VP2-VP5和rBacBTV1-VP3-VP7感染的Sf9细胞进行间接免疫荧光试验(IFA)检测,结果病毒感染细胞可见特异性荧光出现;使用兔抗BTV1-VP2蛋白多克隆抗体和兔抗BTV1-VP3蛋白多克隆抗体,分别对rBacBTV1-VP2-VP5和r BacBTV1-VP3-VP7感染的Sf9细胞进行Western-blot检测,可见相对分子质量约100 kDa左右的条带,大小与预期相符。IFA检测和Western Blot检测结果显示,BTV1 VP2、VP3、VP5和VP7蛋白均得以表达,且具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 蓝舌病病毒血清1型 主要结构蛋白 杆状病毒表达
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广东省猪生殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因的变异分析 被引量：8
3
作者 王旭荣 宋长绪 +5 位作者 杨增岐 王刚 李春玲 王贵平 黄忠 祝卫国 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期261-266,共6页
根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段... 根据GenBank中猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株(ATCC VR-2332)基因序列分别设计合成了针对PRRSV ORF3、ORF5和ORF6基因的引物,利用RT-PCR从广东省送检的5份病料中均分别扩增得到了大小约787、630和550 bp的片段,将扩增的cDNA片段克隆入pMD 18-T载体并测序.应用DNAStar软件分析,并与国内外已发表毒株和疫苗株(RespPRRS/Repro、RespPRRS MLV)、LV4.2.1株的序列进行比较.结果显示,这5个毒株与CH-1a、HB-1(sh)、BJ-4、ATCC VR-2332、疫苗株等毒株ORF3、ORF5、ORF6的核苷酸同源性分别为87.2%～98.7%、85.4%～96.8%、91.8%～98.9%,推导的氨基酸同源性分别为84.6%～97.6%、84.5%～95.5%、94.8%～98.9%;而与LV4.2.1株的核苷酸同源性分别为56.1%～58.3%、54.4%～57.0%、62.2%～64.4%,推导的氨基酸同源性分别为53.9%～56.7%、54.0%～57.0%、78.0%～80.3%.基因系统发育树表明,广东省流行的PRRSV与HB-1(sh)株的亲缘关系比较近. 展开更多
关键词 猪生殖与呼吸综合征病毒 结构蛋白基因 广东省 变异分析 核苷酸同源性 氨基酸同源性 GENBANK PRRSV ORF6基因 RT-PCR cDNA片段 设计合成 基因序列 软件分析 BJ-4 ATCC 系统发育 亲缘关系 疫苗株 T载体 毒株 国内外 推导
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番鸭细小病毒国内分离株主要结构蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：2
4
作者 陈晓月 赵承辉 +4 位作者 章金刚 李雪梅 金宁一 向华 赵玉军 《中国家禽》 北大核心 2006年第24期9-12,25,共5页
根据国外已发表的番鸭细小病毒(MDPV)FM株基因组核苷酸序列设计1对引物,应用PCR技术扩增MDPV FS株的VP2-VP3蛋白基因片段。将扩增后的VP2-VP3结构蛋白基因克隆到T载体上,MDPV FS株基因大小为1764bp,编码528个氨基酸,对插入片段进行序列... 根据国外已发表的番鸭细小病毒(MDPV)FM株基因组核苷酸序列设计1对引物,应用PCR技术扩增MDPV FS株的VP2-VP3蛋白基因片段。将扩增后的VP2-VP3结构蛋白基因克隆到T载体上,MDPV FS株基因大小为1764bp,编码528个氨基酸,对插入片段进行序列测定。结果表明,我国分离的MDPV FS株基因序列与国外发表序列的同源性为98.6%,与已发表的YZ株同源性为99.5%,可见番鸭细小病毒结构蛋白基因较保守。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 主要结构蛋白基因 克隆 序列分析
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番鸭细小病毒MDPV YZ株VP_2和VP_3蛋白基因的克隆和序列测定
5
作者 陈晓月 章金刚 +3 位作者 李雪梅 向华 宣华 赵玉军 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2001年第10期3-5,共3页
根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MDPV )FM株基因组核苷酸序列设计了 1对引物 ,应用PCR技术扩增了MDPVYZ株的VP2 和VP3 蛋白基因片段。将扩增后的VP2 和VP3 蛋白基因克隆到 pCR 3 .1T载体上 ,MDPVYZ株基因大小为 176 4bp ,编码 5 2 8个... 根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MDPV )FM株基因组核苷酸序列设计了 1对引物 ,应用PCR技术扩增了MDPVYZ株的VP2 和VP3 蛋白基因片段。将扩增后的VP2 和VP3 蛋白基因克隆到 pCR 3 .1T载体上 ,MDPVYZ株基因大小为 176 4bp ,编码 5 2 8个氨基酸 ,并对插入片段进行序列测定。测定结果表明 ,我国分离的MDPVYZ株蛋白基因序列与国外发表的序列的同源性为 98.5 %。 展开更多
关键词 番鸭细小病毒 结构蛋白基因 克隆 序列分析
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番鸭细小病毒国内分离株主要结构蛋白基因的克隆和序列分析 被引量：5
6
作者 陈晓月 李雪梅 +3 位作者 向华 宣华 赵玉军 章金刚 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期225-227,共3页
根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MPV) FM株基因组核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,分别对国内 2株番鸭细小病毒分离株 MPV扬州 (YZ)株和 MPV佛山 (FS)株主要结构蛋白 (VP2和 VP3)基因进行 PCR扩增 ,并克隆到p CR3.1T载体 ,经酶切鉴定筛选... 根据国外已发表的番鸭细小病毒 (MPV) FM株基因组核苷酸序列 ,设计了 1对引物 ,分别对国内 2株番鸭细小病毒分离株 MPV扬州 (YZ)株和 MPV佛山 (FS)株主要结构蛋白 (VP2和 VP3)基因进行 PCR扩增 ,并克隆到p CR3.1T载体 ,经酶切鉴定筛选出阳性克隆质粒并进行核苷酸序列分析比较。结果表明 ,MPV YZ和 MPV FS的VP2 - VP3基因大小均为 176 4bp,编码 5 88个氨基酸。 MPV YZ、MPV FS与 MPV FM核苷酸序列同源性分别为98.5 %和 98.6 % ,氨基酸序列同源性为 97.1%和 97.8% ;MPV YZ与 MPV FS核苷酸序列的同源性为 99.5 % ,氨基酸序列同源性为 98.8%。 展开更多
关键词 番鸭 细小病毒 分离株 蛋白基因 序列分析 基因结构 基因克隆
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表达GⅡ.4型诺如病毒VP1复制缺陷型腺病毒构建与鉴定
7
作者 施鹏 林晓晨 +7 位作者 周艳 李娇春 宋泽鑫 鲁辰星 谭银珍 胡晓青 陈蓉 李鸿钧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期7-11,共5页
人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定... 人诺如病毒(norovirus,NoV)在体外难以培养,不宜采用经典疫苗的方式进行疫苗研发,以腺病毒为载体的重组腺病毒疫苗为诺如病毒疫苗的研发提供另一种路线选择。构建表达人GⅡ.4型诺如病毒VP1蛋白的重组腺病毒为该技术路线的疫苗研发奠定基础。首先使用PCR扩增诺如病毒VP1片段,通过酶切、连接、转化,克隆含VP1基因的pshuttle-CMV-VP1穿梭质粒,再与腺病毒骨架质粒进行同源重组,重组质粒鉴定正确后使用PacⅠ酶切线性化,转染至HEK293细胞进行病毒包装,包装成复制缺陷型的完整腺病毒颗粒命名为rAd-VP1,病毒传代后进行滴度测定,并感染HEK293细胞,通过Western Blot方法鉴定重组腺病毒外源蛋白VP1的表达情况。结果表明,包装传代后的重组腺病毒浓缩后滴度达到CCID_(50)=5×10^(9)/mL,并且能在HEK293细胞成功表达VP1蛋白。研究为rAd-VP1的动物免疫评价和诺如病毒的疫苗研发提供基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 主要结构蛋白VP1 腺病毒载体 同源重组 病毒包装
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