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双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞 被引量：12
1
作者 慕宁 高毅 唐力军 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期535-537,共3页
目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式... 目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5～10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,最长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态. 展开更多
关键词 人骨髓来源多能成体祖细胞 免疫磁珠分离法 分离纯化 细胞培养 流式细胞术
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钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4^+T细胞体外增殖的影响 被引量：10
2
作者 王志睿 黄昌全 +2 位作者 张忠义 张兰兰 林敬明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期562-564,共3页
目的探讨小鼠脾脏CD4+T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4+T细胞体外增殖的影响。方法以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4+T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力。将10~320μg/mlKou分别作用于... 目的探讨小鼠脾脏CD4+T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4+T细胞体外增殖的影响。方法以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4+T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力。将10~320μg/mlKou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量。结果经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4+T细胞纯度达到90.3%±5.8%;0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±3.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4+T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20~320μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μg/ml)作用后,CD4+T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05)。结论免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4+T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4+T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4+T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关。 展开更多
关键词 CD4^+T细胞 免疫磁珠分选 钩吻素子
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基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较 被引量：1
3
作者 唐苗苗 宾雅棣 +2 位作者 赵蓝波 李奇灵 孙超 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期155-161,共7页
目的:将密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)与免疫磁珠法(magnetic-activated cell sorting,MACS)相结合,应用4种不同的筛选方案,对脐血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)进行分离,评估不同... 目的:将密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)与免疫磁珠法(magnetic-activated cell sorting,MACS)相结合,应用4种不同的筛选方案,对脐血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)进行分离,评估不同策略富集FNRBC的效果。方法:对10例脐血标本(12 mL/例)按4种不同方案进行筛选:DGC;DGC+MACS阴性筛选(CD45^(-));DGC+MACS阳性筛选(CD71^(+));DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45^(-)/CD71^(+))。通过细胞计数板计数,K-B染色后显微镜下人工FNRBC计数,从获得总细胞量、FNRBC量和FNRBC比例经t检验后评估不同方案富集FNRBC的效果。结果:(1)与其他3组相比,DGC方案可获得的总细胞量(0.95×10^(7)/mL)最多,FNRBC数量(39.87/mL)最多,FNRBC比例最低(0.004‰),差异均具有统计学意义(均P=0.000);(2)与其他3组相比,DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45^(-)/CD71^(+))组合法所获得的总细胞量最少(0.81×10^(6)/mL),获得FNRBC数量也最少(7.47/mL),差异均具有统计学意义(均P=0.000);(3)DGC+MACS单种抗体筛选方案中,DGC+MACS阳性筛选(CD71^(+))所获得总细胞量为1.99×10^(6)/mL,较DGC+MACS阴性筛选(CD45^(-))(2.56×10^(6)/mL)低,差异有统计学意义(P=0.000),而两方案所得FNRBC数量之间差异无统计学意义(P=0.910);(4)DGC+MACS阴性筛选(CD45^(-)),DGC+MACS阳性筛选(CD71^(+)),DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45^(-)/CD71^(+))所得FNRBC比例之间差异无统计学意义(P=0.030、0.050、0.210)。结论:DGC方案获得FNRBC数量最多;DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45^(-)/CD71^(+))方案去除混杂细胞能力最强。在不降低获取目标细胞数量基础上,DGC+MACS阳性筛选(CD71^(+))方案富集FNRBC效果最好。 展开更多
关键词 胎儿有核红细胞 密度梯度离心 免疫磁珠筛选
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高端流式分选与免疫磁珠法纯化T细胞的比较 被引量：4
4
作者 黄莹莹 尹盛夏 +2 位作者 曹文强 李艳伟 王佳佳 《国际医药卫生导报》 2016年第22期3377-3383,共7页
目的 为建立一种高效、高活性的T细胞的分离纯化方法,分别采用流式细胞分选技术（FACS）及免疫磁珠分选技术（MACS）从小鼠脾脏组织分离纯化CD8＋T细胞.方法 通过测定分选后细胞的纯度、回收率、细胞活力、实验耗时及细胞学形态等指标,... 目的 为建立一种高效、高活性的T细胞的分离纯化方法,分别采用流式细胞分选技术（FACS）及免疫磁珠分选技术（MACS）从小鼠脾脏组织分离纯化CD8＋T细胞.方法 通过测定分选后细胞的纯度、回收率、细胞活力、实验耗时及细胞学形态等指标,综合全面地比较了上述两种纯化方法分离CD8＋T细胞的差异.结果 流式细胞分选仪分选后CD8＋T细胞纯度为（99.5±0.00）％,而免疫磁珠法的纯度为（95.6±0.25）％.流式细胞分选仪分选CD8＋T细胞的回收率为（74.33±3.28）％,而免疫磁珠法的回收率为（60.00±1.53）％.流式细胞分选法耗时1.5 h,免疫磁珠法则需要2.5 h.流式细胞分选后的细胞活力要比免疫磁珠法收集的要高.经流式分选后得到的细胞在12h时就开始出现集落生长,24 h时生长最佳,而经免疫磁珠分选后的细胞总体生长趋势较流式分选后的细胞缓慢.结论 流式细胞分选法较免疫磁珠法效率更高,能得到更高活性的细胞. 展开更多
关键词 流式细胞分选 免疫磁珠分选 T细胞
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免疫磁珠负性分离纯化小鼠脾脏CD8^+ T细胞 被引量：3
5
作者 杨曌 傅晓岚 +3 位作者 尚小云 吴玉章 赵建平 王莉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期91-93,共3页
目的探讨小鼠脾脏CD8^+ T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测。方法以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8^+ T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增... 目的探讨小鼠脾脏CD8^+ T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测。方法以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8^+ T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增殖能力。结果经过流式细胞仪测定免疫磁珠负性分选后的小鼠脾脏CD8^+ T细胞纯度达到(91.6±3.6)%,台盼兰染色细胞活力为(94.9±3.2)%,ConA刺激72h后有(56.3±1.7)%的细胞增殖。结论免疫磁珠负性分选法能够分选出高纯度的CD8^+ T细胞,并且不影响分选靶细胞的细胞活力和功能。 展开更多
关键词 CD8^+T细胞 免疫磁珠负性分选
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含噻唑烷-4-酮的免疫刺激剂CH2a增强人iNKT细胞的功能 被引量：2
6
作者 孟明 李春晓 +5 位作者 王泽瑞 韩华 史建红 陈华 李小六 陈冬志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期345-349,共5页
目的研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞)。5(... 目的研究含噻唑烷-4-酮的糖类衍生小分子免疫刺激剂CH2a对人iNKT细胞功能的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),经α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2体外扩增后,利用磁珠分选分离纯化得到恒定型自然杀伤T细胞(iNKT细胞)。5(6)-羧基二乙酸荧光黄琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)标记的纯化iNKT细胞,与CH2a共孵育后,流式细胞术检测细胞增殖和分代,IFN-γ和IL-4的表达;MTT法定量检测细胞增殖率及对K562细胞的杀伤活性。ELISA检测CH2a处理细胞培养基中IFN-γ和IL-4水平。结果 CH2a能显著促进IL-2引起的iNKT细胞体外增殖;提高IFN-γ和IL-4的生成量及IFN-γ/IL-4的比值;并显著增强iNKT细胞的杀伤活性。结论 CH2a有可能通过诱导iNKT分泌Th1类的细胞因子,调节T细胞向Th1分化,从而增强细胞免疫功能;同时显著提高iNKT的细胞毒功能。 展开更多
关键词 INKT细胞 磁珠分选 IFN-Γ IL-4 免疫刺激剂
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磁珠分选法与密度梯度离心法分离精子对辅助生殖结局的影响 被引量：2
7
作者 方力 叶英辉 +1 位作者 李恩书 冯国芳 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第40期3263-3267,共5页
目的比较新型磁珠分选法（MACS-DGC）与传统的密度梯度离心法（DGC）分离精子对辅助生殖（ART）结局的影响。方法回顾分析2014年1至12月在浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心进行精子DNA碎片率（DFI）检测并进入体外受精-胚胎移植（I... 目的比较新型磁珠分选法（MACS-DGC）与传统的密度梯度离心法（DGC）分离精子对辅助生殖（ART）结局的影响。方法回顾分析2014年1至12月在浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心进行精子DNA碎片率（DFI）检测并进入体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期的病例。根据DFI将病例分为3组：DFI异常（DFI≥120）且使用新型精子磁珠分选法（A组）；DFI异常（DFI≥120）且使用传统精子密度梯度离心法（B组）；DFI正常（DFI〈20）且使用传统精子密度梯度离心法（C组）。根据受精方式的不同，将常规体外受精（IVF）标记为1组，卵细胞质内单精子显微注射（ICSD标记为2组。对各组的正常受精率、优胚率、临床妊娠率，胚胎种植率、抱婴率等临床结果进行统计分析。结果在IVF三组中（A1、B1、C1）正常受精（2PN）率、优胚率、临床妊娠率，胚胎种植率、抱婴率差异均无统计学意义（均P〉0．05）。在高DFI的ICSI患者（A2、B2）中，A2组对比B2组发现优胚率（87．8％比46．3％，P〈0．001）、临床妊娠率（66．7％比29．2％，P=0．031）、胚胎种植率（50．0％比19．5％，P=0．010）、抱婴率（66．7％比25．0％，P=0．016）差异均有统计学意义。结论新型精子磁珠分选法对比传统梯度分离法对于IVF的临床结果差异无统计学意义，但在ICSI受精周期中临床结局得到了显著改善。 展开更多
关键词 精子 DNA碎片 磁珠分选 体外受精
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干细胞表面标志物在牙髓干细胞中的表达 被引量：2
8
作者 高丽 江文欣 +3 位作者 牛晨光 何智妍 朱彩莲 黄正蔚 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2015年第3期257-262,共6页
目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面... 目的:探讨磁珠分选后培养的人牙髓干细胞的表面标记抗原随培养代数增加的变化情况。方法:改良组织块法培养的人牙髓细胞,至第2代(P2)时,用磁珠方法分选出STRO-1阳性细胞,用流式细胞术分别检测P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8代的干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105、CD166、STRO-1。取P3代细胞,分别进行成骨诱导和成脂诱导。21 d后,分别行茜素红染色和油红O染色,观察矿化物形成情况和脂滴形成情况,同时以未诱导细胞为对照。结果:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,CD73、CD90、CD105、CD166的表达比较稳定,茜素红染色可见矿化结节形成,油红O染色显示形成大量脂滴。结论:STRO-1在牙髓干细胞表面随代数增加而下降,其他干细胞标志物比较稳定。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 磁珠分选 间充质干细胞 表面标志物
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CD4＋T淋巴细胞分选方法的效果评价 被引量：1
9
作者 张艳 王记红 《国际医药卫生导报》 2014年第21期3246-3250,共5页
目的 建立一种准确且对细胞活性影响小的分离人外周血CD4＋T细胞的分选方法.方法 对人外周血依次采用密度梯度离心（density gradient centrifugation,DGC）和免疫磁珠分选（magnetic-activated cell sorting,MACS）进行CD4＋T细胞分选... 目的 建立一种准确且对细胞活性影响小的分离人外周血CD4＋T细胞的分选方法.方法 对人外周血依次采用密度梯度离心（density gradient centrifugation,DGC）和免疫磁珠分选（magnetic-activated cell sorting,MACS）进行CD4＋T细胞分选.分选后的细胞用流式细胞仪（flow cytometry,FCM）、倒置显微镜及细胞周期分析进行分选纯度和生长状态检测.结果 Percoll密度梯度离心法收集的单个核细胞中CD4＋T细胞纯度为（38.8±2.7）％,免疫磁珠分选后CD4＋T细胞纯度为（96.2±0.7）％,两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）,且分选后细胞形态及功能完好,24 h内活性最高.结论 密度梯度离心和免疫磁珠分选相结合可以有效提高CD4＋T细胞的分选纯度及保持其活性,可继续用于相关功能研究. 展开更多
关键词 CD4+T细胞 细胞分选 免疫磁珠分选
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原代肝星状细胞分离方法新进展
10
作者 孔洋洋 刘立新 《中华消化病与影像杂志（电子版）》 2017年第3期125-128,共4页
肝星状细胞(HSCs)又称储脂细胞、Ito细胞,是肝脏固有非实质细胞类型之一,在肝脏细胞中所占比例不到8%。它存在于肝窦内皮细胞与肝细胞之间的Disse间隙内,并以脂滴的形式储存人体维生素A。HSCs是细胞外基质的主要来源,它的活化是肝纤维... 肝星状细胞(HSCs)又称储脂细胞、Ito细胞,是肝脏固有非实质细胞类型之一,在肝脏细胞中所占比例不到8%。它存在于肝窦内皮细胞与肝细胞之间的Disse间隙内,并以脂滴的形式储存人体维生素A。HSCs是细胞外基质的主要来源,它的活化是肝纤维化发生发展过程中的关键环节。原代HSCs分离方法的研究是进行肝纤维化发生机制研究的基础,是肝纤维化研究的热点之一。目前关于HSCs的分离方法有经典的肝脏二步酶灌注法、流式细胞术分选法、磁珠分选法等,本文就近年来原代HSCs分离方法新进展进行综述。 展开更多
关键词 肝星状细胞 细胞分离 二步酶灌注法 流式细胞术分选法 磁珠分选法
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小熊猫精原干细胞的分选与培养
11
作者 封同英 刘玉良 +7 位作者 陈依娇 史可瑜 蔡志刚 王东辉 张名岳 李博琦 侯蓉 安俊辉 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期897-904,共8页
野生动物的保护手段主要包括就地保护、易地保护与离体保护。精原干细胞(SSCs)是雄性动物维持生殖能力的根本,既能通过自我更新产生新细胞,也能通过分化产生精子,在小熊猫(Ailurus fulgens)离体保护方面具有广阔的应用前景。动物睾丸中... 野生动物的保护手段主要包括就地保护、易地保护与离体保护。精原干细胞(SSCs)是雄性动物维持生殖能力的根本,既能通过自我更新产生新细胞,也能通过分化产生精子,在小熊猫(Ailurus fulgens)离体保护方面具有广阔的应用前景。动物睾丸中精原干细胞数量极少,分离纯化与体外培养对于其研究和应用至关重要。本研究选择整合素α6(ITGA6)蛋白作为精原干细胞分子标记,采用免疫磁珠分选(MACS)技术富集了3月龄小熊猫睾丸中的ITGA6阳性细胞。流式细胞术检测发现分选后ITGA6阳性细胞纯度可达74.27%±8.73%,显著高于分选前(32.60%±3.06%)。将分选后的细胞接种到层粘连蛋白包被的细胞培养板中,用含胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、表皮细胞生长因子(EGF)与成纤维细胞生长因子(bFGF)的培养基进行体外培养。培养10 d后,在显微镜下可观察到典型的精原干细胞集落,结合逆转录PCR(RT-PCR)和细胞免疫荧光染色发现这些细胞集落特异性表达精原干细胞分子标记蛋白ITGA6、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)和胸腺细胞分化抗原1(THY1),同时也表达生殖细胞标记蛋白VASA和DAZL。本研究结果证实,ITGA6可作为小熊猫精原干细胞的分子标记用于细胞分选富集,同时初步建立的培养体系也为小熊猫精子发生机制与应用研究提供材料。 展开更多
关键词 小熊猫 精原干细胞 免疫磁珠分选 细胞培养
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人外周血巨噬细胞培养及功能鉴定 被引量：14
12
作者 林炜明 戴爱玲 +1 位作者 尹会方 杨小燕 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期86-89,共4页
目的：从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离单核细胞,诱导分化成巨噬细胞并鉴定其功能。方法：应用免疫磁珠法从人外周血单个核细胞中分选CD14^＋单核细胞,分离后的细胞用流式细胞仪检测其纯度,用含有10%人AB血清和10 ng/ml人M-CSF的IMD... 目的：从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离单核细胞,诱导分化成巨噬细胞并鉴定其功能。方法：应用免疫磁珠法从人外周血单个核细胞中分选CD14^＋单核细胞,分离后的细胞用流式细胞仪检测其纯度,用含有10%人AB血清和10 ng/ml人M-CSF的IMDM培养基体外培养CD14^＋单核细胞,诱导分化成巨噬细胞,并进行形态特征和吞噬功能鉴定。结果：免疫磁珠法能从外周血中分离到高纯度的CD1^4＋单核细胞,分选前CD14阳性率为10%,分选后CD14阳性率为85.8%。诱导培养7天后巨噬细胞的直径最大可达40~45μm,大部分细胞呈煎蛋状,能有效地吞噬淋巴瘤Raji细胞。结论：从外周血中分离了高纯度的CD14^＋单核细胞,诱导形成的巨噬细胞具有吞噬淋巴瘤细胞的功能。 展开更多
关键词 巨噬细胞 磁珠分选 培养 功能鉴定
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免疫磁性活化细胞分选方法优化及纯化后细胞的生物学特性检测 被引量：13
13
作者 耿珊 张琛 +3 位作者 刘俊 刘典锋 周玥 王亚平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期752-754,共3页
目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细... 目的:改良常规免疫磁性活化细胞分选(MACS)的分离纯化方法,提高分选后细胞的纯度并确保细胞仍具有良好活性及功能。方法:以干细胞抗原-1(Sca-1)标记的Sca-1+造血干/祖细胞(Sca-1+HSC/HPC)为例,分别用改良后和常规MACS法分选出小鼠骨髓细胞Sca-1+细胞,流式细胞术检测两种分选方法获得Sca-1+细胞纯度;计算阳性细胞回收率;台酚蓝染色检测分选细胞存活百分率;CCK-8检测细胞增殖,混合造血祖细胞(CFU-Mix)体外培养评价分选Sca-1+细胞分化能力。结果:改良MACS法分选获得的Sca-1+细胞纯度达93%以上(常规MACS法仅为87%),阳性细胞的回收率可达73%(常规法仅为62.3%);细胞存活率、细胞增殖和CFU-Mix集落形成能力两种分选方法无明显差别。结论:改良法能明显提高细胞分选纯度及回收率,细胞活性和功能保持良好,值得各种细胞免疫磁性分选参考采用。 展开更多
关键词 免疫磁性活化细胞分选 方法 干细胞抗原-1 生物学特征
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免疫磁珠分选系统在分离大鼠骨髓干细胞群中的应用 被引量：8
14
作者 舒赛男 魏来 +1 位作者 方峰 王宇 《标记免疫分析与临床》 CAS 2006年第1期35-37,共3页
采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群。收集大鼠胫骨和股骨的骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy1.1单抗标记,间接MACS分离纯化Thy-1.1+干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34+百分比,台盼兰... 采用免疫磁珠分选系统(MACS)分离大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群。收集大鼠胫骨和股骨的骨髓细胞,Percoll密度梯度离心分离单个核细胞,Thy1.1单抗标记,间接MACS分离纯化Thy-1.1+干细胞群,流式细胞仪检测其纯度和分选前后CD34+百分比,台盼兰拒染法检测细胞活力,计算回收率。结果表明分选后的Thy-1.1+细胞纯度达94.2%,回收率64.7%;分选后细胞活力为99.6%,与分选前99.8%无明显差异;分选前CD34+百分比为1.2%,与分选后1.3%无差异。MACS能有效分选大鼠骨髓Thy-1.1+干细胞群,所得细胞纯度高,细胞活力保持好。大鼠Thy-1.1抗原与CD34分子无明显相关性。 展开更多
关键词 骨髓干细胞 Thy-1.1抗原 CD34 免疫磁珠分选系统
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四种精液处理方法优选冷冻精子的比较 被引量：9
15
作者 陈娟 耿琳琳 +3 位作者 卢文红 张蔚 高丽娜 李琳 《生殖医学杂志》 CAS 2019年第6期667-672,共6页
目的 探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据。方法 门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液。冷冻精液复苏后,根据优... 目的 探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据。方法 门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液。冷冻精液复苏后,根据优选处理方法不同分为4组:SW组、DGC组、SU组和MACS组,每组样本各20例。比较分析各组优选前后精子浓度、前向运动精子活率、膜完整性、正常形态率及DNA碎片率等的差异。结果 SW组,处理前后前向运动精子活率、精子膜完整性、正常形态率及DNA完整率,均无显著性差异(P>0.05);DGC和SU组中,优选后前向运动精子活率[分别为(78.19±12.13)vs.(34.17±8.61)、(82.20±7.17)vs.(42.86±16.38)]、精子膜完整率[分别为(84.62±5.84)vs.(68.17±6.74)、(81.44±4.47)vs.(65.19±6.15)]、正常形态率[(20.42±4.63)vs.(12.16±5.75)、(25.02±4.61)vs.(10.24±5.37)]及DNA完整率[(86.73±7.07)vs.(67.98±6.45)、(88.49±3.09)vs.(67.44±5.89)]均显著高于同组优选前(P<0.05);MACS组中,优选后冷冻精子的膜完整性[(84.00±5.33)vs.(69.21±7.79)]、正常形态率[(13.72±4.58)vs.(7.90±3.80)]及DNA完整率[(91.95±2.82)vs.(69.79±3.90)]亦显著高于优选前(P<0.05),但前向运动精子活率没有显著改善(P>0.05)。结论 四种方法在处理冷冻精子方面各有优缺点,临床可以根据精液标本的质量或者对于精液制备液的要求来选择不同的精子优化方法。MACS可以较好地优化DNA完整率,其在辅助生殖领域的应用具有一定前景。 展开更多
关键词 冷冻精子优选 洗涤法 非连续密度梯度法 直接上游法 磁性活性细胞分选法
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从PBMCs及CD133免疫磁珠分选获得内皮祖细胞的体外研究 被引量：8
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作者 郑伟红 万亚峰 +3 位作者 马小鹏 李兴睿 杨志芳 易继林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期368-373,共6页
目的:比较从外周血单个核细胞(PBMCs)和CD133免疫磁珠分选体外培养人外周血内皮祖细胞(EPCs)的表型、分化、扩增、功能特点,为EPCs细胞治疗提供临床参考。方法:健康成年人外周血,经Ficoll密度梯度离心法得PBMCs,经直接接种法或免疫磁珠... 目的:比较从外周血单个核细胞(PBMCs)和CD133免疫磁珠分选体外培养人外周血内皮祖细胞(EPCs)的表型、分化、扩增、功能特点,为EPCs细胞治疗提供临床参考。方法:健康成年人外周血,经Ficoll密度梯度离心法得PBMCs,经直接接种法或免疫磁珠分选CD133阳性细胞后置于M199培养基中培养,于第7、14d比较2组细胞表型变化及细胞因子分泌、扩增、体外血管形成及趋化能力。结果:相同血量标本PBMCs组早期集落数高于CD133+组(P<0.01),随着培养时间的推移,流式细胞检测2组细胞均显示造血干细胞标志的表达下调和内皮细胞标志表达上升,但CD133+组内皮标志CD144表达率低于PBMCs组(P<0.01),ELISA法检测到在PBMCs组早期EPCs分泌VEGF的水平高于CD133+组(P<0.01),MTT法显示PBMCs组有较强的增殖能力,基质胶及Tr-answell实验表明PBMCs组细胞参与血管形成的能力较强。结论:CD133+来源的EPCs分化、分泌、增殖及血管形成能力相对较低,推断PBMCs中CD133-细胞可能在形成功能性的EPCs中发挥更重要的作用。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 细胞培养 免疫磁珠分选法
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分选方式对细胞能量代谢的影响研究
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作者 邢月婷 李艳伟 +6 位作者 黄莹莹 王佳佳 郭春 沈鑫 周南 沈红英 宋兴辉 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2024年第5期964-975,共12页
Seahorse XF(extracellular flux)是从能量的角度检测代谢及调控的方法,因其实时检测的优点,具有非常好的应用前景,但该技术要求目的细胞纯度高、活性好,因此需要对原代细胞的分选条件进行优化。该文通过免疫磁珠分选技术和流式细胞分... Seahorse XF(extracellular flux)是从能量的角度检测代谢及调控的方法,因其实时检测的优点,具有非常好的应用前景,但该技术要求目的细胞纯度高、活性好,因此需要对原代细胞的分选条件进行优化。该文通过免疫磁珠分选技术和流式细胞分选技术对小鼠脾脏CD4+T细胞进行研究,结果发现两种分选方式纯化的CD4+T细胞在活性氧水平上无明显差异,相较于磁珠分选,流式分选纯化的CD4+T细胞线粒体膜电位、ATP合成相关的氧耗值和线粒体储备呼吸能力均呈现下降趋势,说明磁珠分选相较于流式分选对CD4+T细胞能量代谢的损伤更小。为了进一步了解流式分选的影响,该文对分选条件进行了研究。通过Moflo AstriosEQ分选仪中不加电分选模式(SD),加电分选模式不同偏振电压(700 V、2400 V、5000 V)以及同一偏振电压下不同液滴加电(35%、70%)对HEK 293T和Jurkat进行分选,结果发现SD组相较于加电分选模式对细胞代谢干扰较小,加电分选模式中5000 V实验组对细胞代谢有显著影响。同一偏振电压条件下,不同液滴加电实验组均未对细胞产生显著干扰。综上,磁珠法更适用于小鼠原代CD4+T细胞能量代谢实验前分选预处理。流式法用于能量代谢实验预处理时建议优先选择不加电分选模式,选择加电分选模式时建议使用小于2400 V的偏振电压。该实验结果为能量代谢检测实验提供了分选方式和分选条件的数据参考。 展开更多
关键词 磁珠分选 流式分选 活性氧 线粒体膜电位 能量代谢
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免疫磁珠分选的基质细胞抗原1(STRO-1)阳性人牙周膜细胞具有多向分化的干细胞特性 被引量：6
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作者 赵萤 屠腾 +1 位作者 丰帆 张旻 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期971-976,共6页
目的采用免疫磁珠法(MACS)分选人牙周膜细胞基质细胞抗原1阳性(STRO-1^+)细胞及STRO-1^-细胞,并对两种细胞的干细胞特性进行对比分析。方法组织消化法分离培养人牙周膜细胞,并采用STRO-1抗体结合的免疫磁珠对细胞进行分选。随后使用流... 目的采用免疫磁珠法(MACS)分选人牙周膜细胞基质细胞抗原1阳性(STRO-1^+)细胞及STRO-1^-细胞,并对两种细胞的干细胞特性进行对比分析。方法组织消化法分离培养人牙周膜细胞,并采用STRO-1抗体结合的免疫磁珠对细胞进行分选。随后使用流式细胞仪检测STRO-1^+细胞和STRO-1^-细胞中表面标志物CD90、CD105、CD29、STRO-1、CD34和CD45的表达;采用集落形成实验检测分离细胞的集落形成率;在成骨和成脂诱导分化后,分别采用茜素红染色和油红O染色鉴定其多向分化能力。结果STRO-1^+细胞可高表达干细胞表面标志物CD90和CD105,而低表达造血细胞标志物CD34和CD45;并且STRO-1^+细胞的集落形成率显著高于STRO-1^-细胞;STRO-1^+细胞具有向成骨和成脂细胞分化的潜能。结论采用免疫磁珠法分选的STRO-1^+细胞为具有干细胞特性的人牙周膜干细胞。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 牙周膜 细胞分选 免疫磁珠法
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人骨髓来源的多能成体祖细胞分离纯化的实验研究 被引量：4
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作者 唐力军 高毅 +2 位作者 姜晓丹 柳晓秋 邹雨汐 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期422-424,共3页
目的 建立获取高纯度人骨髓来源的多能成体祖细胞(MAPCs)的方法。方法 取志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,对单个核细胞行贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、Gly-A免疫做磁珠负分选,流式细胞仪鉴定分选... 目的 建立获取高纯度人骨髓来源的多能成体祖细胞(MAPCs)的方法。方法 取志愿者适量骨髓后采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,对单个核细胞行贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、Gly-A免疫做磁珠负分选,流式细胞仪鉴定分选后提高细胞纯度。结果 (1)通过MAPCs分选,半均每1×106／mL骨髓贴壁细胞可分选出约(5.1±2.8)×104／mL数量级的MAPCs,分选前后细胞活力分别为96.7％±1.7％和96.0％±2.4％,无明显差异;(2)流式细胞仪分析获取的CD45-、Gly-A-细胞纯度大于98％。结论 CD45、Gly-A免疫微磁珠负分选可从骨髓单个核细胞中中分选出高纯度的MAPCs。 展开更多
关键词 CD45 人骨髓 祖细胞 单个核细胞 贴壁细胞 实验研究 获取 成体 分离纯化 数量级
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CD133阳性/阴性肺癌细胞的分选、鉴定及差异基因的筛选 被引量：6
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作者 郑少秋 李书华 +2 位作者 王红艳 谢晓斌 张雅洁 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期123-130,共8页
背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异,而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物,因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究... 背景与目的研究表明多种实体肿瘤中存在肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs),肿瘤干细胞与非肿瘤干细胞的生物学特性存在已有的明显差异,而CD133被认为是肿瘤干细胞的标记物,因此CD133阳性细胞与CD133阴性细胞可能存在明显差异。本研究通过分选人肺腺癌A549细胞中的CD133阳性及CD133阴性细胞,鉴定两组细胞的生物学特性并在人组织标本进行验证,利用基因芯片筛选转移相关差异基因。方法采用磁式分选(magnetic activated cell sorting,MACS)的方法对人肺腺癌A549中CD133阳性细胞、CD133阴性细胞进行分选,通过无血清条件培养、平板克隆、血清诱导分化及基因芯片等实验,比较两组细胞"sphere"形成、细胞增殖、细胞分化以及差异基因,并在人组织标本进行CD133表达与临床特性的验证分析。结果 CD133阳性细胞能在无血清培养基中悬浮生长并形成"sphere";其平均克隆形成率(57.1%)明显高于CD133阴性细胞(3.3%);CD133阳性细胞能被血清诱导分化、表达腺癌标志物CK7;两组细胞中的19个转移基因表达水平相差两倍或以上,差异最高达12倍;肺癌组织中CD133阳性细胞主要分布于癌巢周边,数量稀少,其表达与肿瘤组织学分型、分级及临床分期无关。结论 CD133阳性肺腺癌A549细胞具有CSCs特性;两组细胞在转移相关基因的表达存在明显差异,其中CD82可能在CD133阳性细胞的转移机制中起重要作用。 展开更多
关键词 CD133 肺腺癌 磁式分选 基因芯片 转移相关基因
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