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mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
赵文忠
江海燕
+2 位作者
刘艳君
朱平
富宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期488-490,共3页
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母...
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。
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关键词
mtlr
-
2
基因克隆
毕赤酵母
表达
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职称材料
小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备
被引量：
1
2
作者
杨翠兰
赵文忠
+2 位作者
刘艳君
朱平
富宁
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期1609-1611,1615,共4页
目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免...
目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接ELISA检测抗体特异性及效价。结果成功构建了融合表达载体pET-N,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pGEX-N表达的融合蛋白反应,并可结合表达TLR-2的RAW264.7及转染mTLR-2全长基因的CHO细胞。结论获得了mTLR-2N末端重组融合蛋白及其可与天然mTLR-2结合的多克隆抗体。
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关键词
mtlr
-
2
重组蛋白
抗体
克隆
基因表达
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职称材料
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响
被引量：
5
3
作者
杨翠兰
赵文忠
+1 位作者
黄恩平
罗深秋
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期1521-1524,共4页
目的观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用。方法用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔...
目的观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用。方法用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔白细胞浸润的数量变化、腹腔肥大细胞脱颗粒情况以及腹腔灌洗液离心上清中PAF和TNFα水平的影响。结果与PBS处理组和正常兔IgG组相比,抗体TSP-2能促使小鼠因腹腔炎症引起的扭身次数减少,腹腔灌洗液中伊文思蓝OD值降低,腹腔灌洗液中白细胞渗透减少以及C48/80诱导的腹腔肥大细胞脱颗粒降低。结论抗体TSP-2可能通过对肥大细胞脱颗粒的抑制作用减轻酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎炎症症状。
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关键词
mtlr
2
TSP-
2
酵母多糖
腹膜炎
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职称材料
题名
mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
被引量：
4
1
作者
赵文忠
江海燕
刘艳君
朱平
富宁
机构
第一军医大学基础部免疫学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期488-490,共3页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目 (No.1 1 0 2 0 9 0 3 0 6)
文摘
目的 :克隆mTLR 2基因 ,并在毕赤酵母中的表达其融合蛋白。方法 :采用RT PCR从鼠肝脏中扩增mTLR 2全基因 ,并将其克隆到T载体中 ,测序验证。将目的基因编码序列插入毕赤酵母表达载体pPICZαC中 ,构建重组质粒 ,并转化毕赤酵母。重组酵母以PCR、RT PCR验证 ,表达的重组蛋白用SDS PAGE和Westernblot进行分析。结果 :克隆了mTLR 2全基因(AY179346 ) ,与已发表的mTLR 2基因的同源性为 99.84 %。构建了重组表达质粒pPICZ mTLR 2。SDS PAGE和Westernblot分析显示 ,在相对分子质量 (Mr)为约 970 0 0处出现 1条特异性蛋白带 ,且能与兔抗mTLR 2抗体发生反应。结论 :克隆了mTLR 2全基因 ,并在毕赤酵母中获得表达。
关键词
mtlr
-
2
基因克隆
毕赤酵母
表达
Keywords
mtlr
-
2
gene cloning
Pichia pastroris
expression
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备
被引量：
1
2
作者
杨翠兰
赵文忠
刘艳君
朱平
富宁
机构
南方医科大学免疫教研室
中山大学基础医学院
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期1609-1611,1615,共4页
基金
广东省自然科学基金(020017)~~
文摘
目的克隆mTLR-2基因氨基端序列,并表达和纯化N端融合蛋白,制备抗mTLR-2N末端的多克隆抗体。方法采用PCR技术扩增编码mTLR-2N端1～153氨基酸的基因,并将其克隆到pET32A载体中,测序验证;用大肠杆菌表达融合蛋白,并以Probond树脂柱纯化;免疫家兔制备多克隆抗体,采用免疫组化、流式细胞术及间接ELISA检测抗体特异性及效价。结果成功构建了融合表达载体pET-N,表达和纯化了相应的融合蛋白,所制备多克隆抗体可与pGEX-N表达的融合蛋白反应,并可结合表达TLR-2的RAW264.7及转染mTLR-2全长基因的CHO细胞。结论获得了mTLR-2N末端重组融合蛋白及其可与天然mTLR-2结合的多克隆抗体。
关键词
mtlr
-
2
重组蛋白
抗体
克隆
基因表达
Keywords
Toll-like receptor-
2
, murine
recombinant protein
antibodies, polyclonal
cloning
gene expression
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响
被引量：
5
3
作者
杨翠兰
赵文忠
黄恩平
罗深秋
机构
南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室
广东省计划生育科学技术研究所
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第8期1521-1524,共4页
基金
国家青年自然科学基金(30801032)
文摘
目的观察抗小鼠TLR2胞外段(mTLR2ECD)单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发的小鼠腹膜炎的主要作用。方法用腹腔灌洗、细胞计数及特异染色、免疫组化、ELISA等各种方法检测了抗体TSP-2对模型动物的扭身次数、腹腔灌洗液的伊文思兰渗出、腹腔白细胞浸润的数量变化、腹腔肥大细胞脱颗粒情况以及腹腔灌洗液离心上清中PAF和TNFα水平的影响。结果与PBS处理组和正常兔IgG组相比,抗体TSP-2能促使小鼠因腹腔炎症引起的扭身次数减少,腹腔灌洗液中伊文思蓝OD值降低,腹腔灌洗液中白细胞渗透减少以及C48/80诱导的腹腔肥大细胞脱颗粒降低。结论抗体TSP-2可能通过对肥大细胞脱颗粒的抑制作用减轻酵母多糖诱导的小鼠腹膜炎炎症症状。
关键词
mtlr
2
TSP-
2
酵母多糖
腹膜炎
Keywords
Toll-like receptor
2
TSP-
2
zymosan A
peritonitis
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
mTLR-2基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
赵文忠
江海燕
刘艳君
朱平
富宁
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
下载PDF
职称材料
2
小鼠TLR-2N末端基因的克隆表达和抗体制备
杨翠兰
赵文忠
刘艳君
朱平
富宁
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
下载PDF
职称材料
3
抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对酵母多糖诱发小鼠腹膜炎的影响
杨翠兰
赵文忠
黄恩平
罗深秋
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
5
下载PDF
职称材料
已选择
0
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