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APOBEC3G与Vif在HIV-1感染中的作用
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作者 马寅佳 杨怡姝 曾毅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期496-500,共5页
载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like,APOBEC)蛋白是一组胞嘧啶脱氨基酶,具有天然的抗病毒活性,对多种病毒具有抑制作用,特别是逆转录病毒.APOBEC3蛋白能够抑制人类免疫缺陷病毒(HI... 载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like,APOBEC)蛋白是一组胞嘧啶脱氨基酶,具有天然的抗病毒活性,对多种病毒具有抑制作用,特别是逆转录病毒.APOBEC3蛋白能够抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的感染,其中APOBEC3G和APOBEC3F的作用最强.APOBEC3G能够通过胞嘧啶脱氨基作用和非胞嘧啶脱氨基作用抑制病毒感染.HIV-1病毒感染因子(Vif)蛋白主要经泛素-蛋白酶体途径介导APOBEC3G降解,从而拮抗其抗病毒作用.APOBEC3G和Vif之间相互作用的研究对于寻求新的抗HIV治疗靶点具有重要意义. 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3g 病毒感染因子
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宫颈癌组织APOBEC3A蛋白的表达与高危型HPV感染的相关性研究 被引量:10
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作者 陈姗 狄娜 +4 位作者 秦君璞 郑婷婷 李丹 周莉 张帝开 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期845-849,共5页
目的:探讨宫颈癌组织中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变(CIN)I~III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使... 目的:探讨宫颈癌组织中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变(CIN)I~III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使用凯普分型检测试剂盒对3组样品分别进行高危HPV16/HPV18分型检测。以脂质体法转染APOBEC3A质粒进入HeLa细胞,RT-qPCR与Western blotting验证APOBEC3A对高危型HPV18 E6 mRNA以及蛋白表达的影响。结果:宫颈癌组织、CIN组织以及正常宫颈组织中APOBEC3A蛋白表达的阳性率分别为46.2%、92.6%和86.4%,宫颈癌组织中APOBEC3A蛋白表达较正常宫颈组织明显下降(P<0.01)。宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中HPV16感染阳性率分别为92.3%、77.8%和54.5%;HPV18感染阳性率分别为80.8%、51.8%和68.2%;APOBEC3A蛋白表达与HPV18感染阳性率呈负相关(P<0.05)。增加HeLa细胞中APOBEC3A的表达明显降低了HPV18 E6 mRNA以及蛋白的表达。结论:在宫颈癌组织中APOBEC3A高表达可以对抗HPV18感染,并抑制HPV18 E6的转录和表达。 展开更多
关键词 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3A 人乳头状瘤病毒 宫颈肿瘤
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载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G在不同慢性乙型肝炎患者中的表达及其细胞内定位 被引量:5
3
作者 陈辉 王鲁文 +2 位作者 褚小刚 严少南 龚作炯 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期5-8,共4页
目的观察载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G(APOBEC3G)在不同慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染类型患者的外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的表达水平及其细胞内定位。方法用Westernblot及激光扫描共聚焦显微镜,以健康人为对照,检测... 目的观察载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G(APOBEC3G)在不同慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染类型患者的外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的表达水平及其细胞内定位。方法用Westernblot及激光扫描共聚焦显微镜,以健康人为对照,检测不同慢性HBV感染类型患者(慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化、HBV相关性肝癌)的PBMC及肝组织中APOBEC3G的表达状况及其亚细胞定位。多组比较采用方差分析,两两比较采用q检验。结果Western blot结果显示,健康人PBMC中APOBEC3G表达水平极低,慢性乙型肝炎、慢性乙型重型肝炎、肝炎肝硬化和HBV相关性肝癌患者PBMC中APOBEC3G蛋白相对表达水平倍数分别为4.12±0.21、4.07±0.28、4.16±0.36、4.21±0.39,均高于健康人。但不同慢性HBV感染类型患者之间两两比较,PBMC中APOBEC3G的表达水平差异无统计学意义(g值分别为0.931、0.744、1.675、1.675、2.606、0.931,P值均〉0.05)。慢性乙型肝炎患者与HBV相关性肝癌患者比较,肝组织中APOBEC3G表达水平差异无统计学意义(4.40±0.34与4.34±0.43,q=0.588,P〉0.05)。激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示PBMC中或肝组织中APOBEC3G表达定位于胞质中,胞核中无表达。结论慢性HBV感染患者虽有APOBEC3G的表达升高,可能只是HBV慢性感染的伴随表现,APOBEC3G是否参与机体抵御HBV感染的过程尚不清楚。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 单核细胞 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3g
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APOBEC3蛋白与HPV及宫颈癌的研究进展 被引量:4
4
作者 魏智(综述) 赵洪波 +2 位作者 张涛 冯璇 杜琰(审校) 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期271-276,共6页
宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,AP... 宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,APOBEC)家族是一组能够编辑DNA或RNA序列的胞苷脱氨酶。APOBEC3成员是固有免疫系统的重要成员,在抗病毒感染防御过程中扮演重要角色。APOBEC3与多种肿瘤的发生发展密切相关,可能与HPV感染以及宫颈癌的关系尤为密切。APOBEC3B可能通过“协助”HPV病毒使抑癌蛋白失活及促进HPV病毒癌蛋白的突变,从而促进癌症的发生。本文就APOBEC3与HPV清除、突变和宫颈癌发生方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3(APOBEC3) 宫颈癌 人乳头瘤病毒(HPV)
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激光扫描共聚焦显微镜研究APOBEC3G蛋白的亚细胞定位 被引量:3
5
作者 杨怡姝 李岚 +1 位作者 李泽琳 曾毅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期16-21,共6页
采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA。APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸。将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微... 采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA。APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸。将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微镜下可观察到表达的GFP-APOBEC3G融合蛋白定位于细胞质。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3g 病毒感染因子 激光扫描共聚焦显微镜
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APOBEC3G基因多态性与HBV感染后疾病转归的关系 被引量:2
6
作者 田地 曾争 +1 位作者 田国保 崔建军 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期481-486,共6页
目的研究中国汉族人群载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因多态性与慢陆乙型肝炎和肝硬化的关系。方法应用焦磷酸测序,检测202例HBV感染自然痊愈者(对照组)、217例慢性乙型肝炎患者和216例乙型肝炎肝硬化患者APOBEC3G基因... 目的研究中国汉族人群载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因多态性与慢陆乙型肝炎和肝硬化的关系。方法应用焦磷酸测序,检测202例HBV感染自然痊愈者(对照组)、217例慢性乙型肝炎患者和216例乙型肝炎肝硬化患者APOBEC3G基因rs8177832位点多态性,确定其基因型及等位基因分布。同时通过建立DNA池技术初步对APOBEC3G基因的另外4个标签单核苷酸多态性位点(tagSNP)rs17000736、rs17496046、rs9622924和rs2899313进行疾病相关性的初步筛选;HBVDNA检测采用实时定量PCR。结果rs8177832在中国汉族人群中以A/A为主要存在形式,其基因型频率和等位基因频率在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中的分布差异无统计学意义。慢性乙型肝炎组中携带G等位基因的患者HBVDNA水平为6.25log10拷贝/ml,携带A等位基因的患者为5.54log10拷贝/ml,t=2.111,P=0.036。rs127000736和rs9622924两位点在中国汉族人群中分别只有G/G和C/C一种单-基因型存在,rs17496046和rs2899313两位点分别以G等位基因和A等位基因为主,这4个tagSNP(rs17000736、rs17496046、rs9622924和rs2899313)在对照组、慢性乙型肝炎组和乙型肝炎肝硬化组中等位基因频率差异均无统计学意义。结论汉族人群APOBEC3G基因中rs8177832位点的多态性可能与HBV的复制有关,但这5个tagSNP可能与HBV感染后疾病的进展无关。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 肝硬化 基因 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3g
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APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系 被引量:2
7
作者 游志毅 周福元 +4 位作者 王雄虎 陈楚明 周军华 赵德坚 胡贵方 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期769-771,共3页
目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因rs185983011位点在人群中的多态性分布,并研究其与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法分别收集186例HBsAg和HBeAg皆阴性的健康者、159例慢性乙型肝炎患者的血液样本。应用Sanger测序... 目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因rs185983011位点在人群中的多态性分布,并研究其与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法分别收集186例HBsAg和HBeAg皆阴性的健康者、159例慢性乙型肝炎患者的血液样本。应用Sanger测序方法检测该研究对象APOBEC3G基因rs185983011位点的多态性,确定其基因型及等位基因分布情况。并将该位点的多态性与慢性乙型肝炎的易感性之间的关系进行统计学分析。结果 SNP rs1 8598301 1位点存在于检测人群中的基因型只有C/C和C/T,其中以C/C为主(97.7%)。SNP rs185983011位点的基因型频率和等位基因频率在慢性乙型肝炎患者组和健康者组中的分布无统计学差异(P>0.05)。结论研究人群APOBEC3G基因中rs185983011位点的基因型主要是C/C,未发现该位点的多态性与慢性乙型肝炎易感性存在相关性。 展开更多
关键词 多态性分布 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3g 慢性乙型肝炎 单核苷酸多态性
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APOBEC3F的真核表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的分析 被引量:1
8
作者 胡璇 田浪 +5 位作者 王怡然 温贵兰 陈启青 陈佳琪 叶泥 龚新勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期829-836,共8页
为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构... 为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化特性。结果显示,猪源APOBEC3F基因编码区(CDS)长1257 bp,编码418个氨基酸,与其他物种该基因的同源性在60%~70%。利用扩增的APOBEC3F基因构建真核表达载体pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F经菌液PCR和测序鉴定正确后,转染Marc-145细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组APOBEC3F蛋白的表达。IFA结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的Marc-145细胞质中出现特异性红色荧光;western blot结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的细胞样品在44 ku处有特异性条带,表明猪源APOBEC3F在Marc-145细胞中获得了表达。在Marc-145细胞中转染不同剂量的pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F或不同剂量的针对APOBEC3F的siRNA,过表达或抑制APOBEC3F表达后感染PRRSV,通过RT-qPCR检测PRRSV N基因mRNA的转录水平,采用western blot检测细胞中PRRSV N蛋白的表达水平,采用TCID50测定PRRSV滴度。结果显示,在Marc-145细胞中过表达的APOBEC3F可以显著抑制PRRSV N基因mRNA转录水平(P<0.01)和N蛋白的表达水平,降低PRRSV滴度(P<0.01、P<0.001),表明APOBEC3F具有抑制PRRSV增殖的作用,且抑制效率与重组质粒的转染剂量呈正相关。在Marc-145细胞中抑制APOBEC3F的表达后,PRRSV N基因的mRNA转录水平(P<0.01)、N蛋白的表达水平与PRRSV滴度(P<0.05、P<0.001)均显著升高,表明抑制APOBEC3F的表达具有促进PRRSV增殖的作用,且该促进效率与针对APOBEC3F的siRNA转染剂量呈正相关。本研究首次证明APOBEC3F对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有抑制作用,为研究APOBEC3F功能提供实验依据,也为研究抗PRRSV相关机制的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3F MARC-145细胞
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载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G抑制乙型肝炎病毒和鸭乙型肝炎病毒复制
9
作者 雷延昌 马涛 +4 位作者 郝友华 张正茂 田拥军 王宝菊 杨东亮 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期738-741,共4页
目的了解载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)对乙型肝炎病毒(HBV)和鸭乙型肝炎炎病毒(DHBV)复制的抑制作用。方法从健康人外周血单个核细胞提取RNA,逆转录聚合酶链反应扩增APOBEC3G,将产物克隆到pXF3H载体的EcoRⅠ和HindⅢ酶... 目的了解载脂蛋白质B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)对乙型肝炎病毒(HBV)和鸭乙型肝炎炎病毒(DHBV)复制的抑制作用。方法从健康人外周血单个核细胞提取RNA,逆转录聚合酶链反应扩增APOBEC3G,将产物克隆到pXF3H载体的EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点以构建真核表达质粒;以ayw亚型HBV全长质粒构建具有复制能力的1.3倍HBV质粒(pHBV1.3)。不同剂量的APOBEC3G真核表达质粒与pHBV1.3共转染HepG2细胞;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液的乙型肝炎表面抗原和e抗原水平,Southern blot和Northem blot分析HBV核衣壳相关DNA和RNA的水平变化。不同剂量APOBEC3G真核表达质粒与头尾相接的2倍DHBV质粒共转染LMH鸡肝癌细胞,Southern blot分析DHBV核衣壳相关DNA水平变化。结果成功构建APOBEC3G真核表达质粒和具有复制能力的1.3倍HBV质粒。APOBEC3G抑制乙型肝炎表面抗原和e抗原的分泌,转染细胞内HBV核衣壳相关RNA表达水平下降,而对核心蛋白质的表达没有影响;APOBEC3G对转染细胞内HBV和DHBV核衣壳相关DNA水平具有剂量依赖的抑制效应。结论APOBEC3G对HBV和DHBV复制具有抑制作用。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 肝炎病毒 载脂蛋白质B mrna编辑催化多肽3g
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HIV和HCV合并感染对患者外周血中A3GmRNA及干扰素α表达的影响 被引量:1
10
作者 潘能浪 兰芸 +5 位作者 邓西子 李惠琴 许敏 蔡卫平 唐小平 胡凤玉 《中华临床感染病杂志》 CAS 2014年第6期494-499,共6页
目的:研究HIV和HCV(HIV/HCV)感染对患者外周血单个核细胞(PBMC)中A3G mRNA表达及外周血中内源性干扰素( IFN)-α水平的影响。方法以未经抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者( HCV单一感染组,43例)、艾滋病患者( HIV单一感染组, ... 目的:研究HIV和HCV(HIV/HCV)感染对患者外周血单个核细胞(PBMC)中A3G mRNA表达及外周血中内源性干扰素( IFN)-α水平的影响。方法以未经抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者( HCV单一感染组,43例)、艾滋病患者( HIV单一感染组, CD4+T 淋巴细胞<200个/μL,45例)和HIV/HCV合并感染组( CD4^+T淋巴细胞<200个/μL,45例)为研究对象,并以23名我院门诊健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测A3G mRNA,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测血浆中内源性IFN-α的表达量。组间比较采用秩和检验,相关性分析用Spearman秩相关分析。结果 HIV单一感染组、HIV/HCV合并感染组、HCV单一感染组和健康对照组PBMC中A3G mRNA的表达量分别为4.89(0.59),4.85(0.71),3.89(1.08)和3.69(0.81)lg拷贝/mL。其中,HIV单一感染组和HIV/HCV合并感染组PBMC中A3G mRNA的表达量均明显高于健康对照组( Z=-6.306和-6.280,P<0.01)和HCV单一感染组(Z=-7.358和-7.275,P<0.01)。 HIV单一感染组、HIV/HCV合并感染组、HCV单一感染组和健康对照组血浆中 IFN-α表达量分别为2.79(1.25),2.05(1.29),2.32(1.84)和2.16(2.19) pg/mL,其中 HIV 单一感染组血浆中 IFN-α表达量稍高于HIV/HCV合并感染组(Z=-2.332,P<0.05),其他各组血浆中IFN-α表达量比较差异均无统计学意义(P值均>0.05)。血浆中 IFN-α水平与 A3G mRNA 表达水平未见明显相关性(rs =0.04,P >0.05),A3G mRNA 及 IFN-α表达量与HIV 及 HCV RNA 载量亦无明显相关性(P 值均>0.05)。结论 HIV感染者PBMC高表达A3G,合并HCV感染对艾滋病患者的A3G表达无明显影响;A3G mRNA与IFN-α无明显相关性,且对HIV、HCV RNA载量的影响并不明显。 展开更多
关键词 HIV感染 肝炎 丙型 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3g 干扰素类
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APOBEC3G真核表达载体构建及抗HBV复制的初步研究 被引量:1
11
作者 汤仁仙 甘宜敏 +4 位作者 孔凡运 尤红娟 史震 胡丽娜 郑葵阳 《苏州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2010年第6期1210-1213,1235,共5页
目的构建人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)真核表达载体,并探讨其抗乙型肝炎病毒(HBV)复制的作用。方法采用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因编码区片段,构建pcDNA3.1-A3G真核表达载体,利用脂质体... 目的构建人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)真核表达载体,并探讨其抗乙型肝炎病毒(HBV)复制的作用。方法采用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因编码区片段,构建pcDNA3.1-A3G真核表达载体,利用脂质体转染法将pcDNA3.1-A3G转染HepG2.2.15细胞,分别于转染后第24、48、72 h收集细胞培养上清液和细胞总蛋白,Western blot检测HBx蛋白表达情况,ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg表达情况。结果测序结果显示pcDNA3.1-A3G真核表达载体中APOBEC3G编码区序列存在1处碱基同义突变;HepG2.2.15细胞经APOBEC3G蛋白干扰后,HBx、HBsAg和HBeAg表达量逐渐降低,于72h表达量显著降低。结论成功构建了APOBEC3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G;APOBEC3G在体外可以抑制HBV复制,为深入研究APOBEC3G作为抗HBV药物提供了实验基础。 展开更多
关键词 人载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3g 真核表达载体 乙型肝炎病毒 HEPg2.2.15细胞
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干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制
12
作者 王鲁文 陈辉 +2 位作者 褚小刚 严少南 龚作炯 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第3期155-159,共5页
目的探讨干扰素(IFN)-α刺激HepG2 2.2.15细胞后,对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)表达的影响,以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子... 目的探讨干扰素(IFN)-α刺激HepG2 2.2.15细胞后,对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G,APOBEC3G)表达的影响,以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT)信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2.2.15细胞给予不同剂量(0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U/mL)IFN-α刺激8h时,以及10^3 U/mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时,收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot检测HepG22.2.15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原(HBsAg与HBeAg)水平,应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α(0 U/mL)刺激时,HepGa2.2.15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高,APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高,IFN-α浓度为10^4 U/mL时,APOBEC3G表达量最高,并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高,与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长,APOBEC3G表达量明显升高,8h时达到最高,其后逐渐下降。10^4 U/mL IFN-α刺激8h时,HepG2 2.2.15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22.2.15细胞。结论WN-a能诱导HepG22.2.15细胞表达APO—BEC3G,在一定范围内,APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关;IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一;IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达,二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。 展开更多
关键词 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3g 干扰素-Α HEPg2 2.2.15细胞 STAT-1 肝炎 乙型
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病毒感染因子在APOBEC3G抗病毒中的拮抗作用
13
作者 王运华 张耀洲 《细胞生物学杂志》 CSCD 2008年第3期297-300,共4页
病毒感染因子(virion infectivity factor,Vif)是人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的6个辅助蛋白之一,是病毒进行有效复制所必需的。由于Vif功能的复杂性以及对相应复合物体系的不了解,一直以来,对Vif的研究进展缓慢... 病毒感染因子(virion infectivity factor,Vif)是人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)的6个辅助蛋白之一,是病毒进行有效复制所必需的。由于Vif功能的复杂性以及对相应复合物体系的不了解,一直以来,对Vif的研究进展缓慢。直到2002年发现载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like3G,APOBEC3G)是存在于细胞内的一种天然抗病毒因子后,Vif的功能才被逐步阐明。APOBEC3G主要通过嘧啶脱氨基活性使HIV-1的负链DNA在逆转录过程中发生致死性超突变,从而起到抗病毒作用。HIV-1基因编码Vif来拮抗APOBEC3G,二者在宿主细胞内达到动态平衡。Vif通过介导APOBEC3G降解、减少在胞内的表达、阻碍其向病毒粒子的包装以及促使其装配成无活性的高分子质量复合体等多种途径起到中和作用。对Vif/APOBEC3G相互作用及其调节机制的进一步研究,将为新型抗HIV-1病毒药物的研制与开发提供理论依据。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 病毒感染因子 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3g
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作用于mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G的HIV-1逆转录抑制剂研究进展
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作者 李俊洁 罗荣华 +3 位作者 杨柳萌 王婷 马文婕 黄宁 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期1855-1860,共6页
mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负... mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(A3G)属于固有免疫家族成员,具有胞嘧啶脱氨酶活性,能通过与核衣壳蛋白基因(Gag)或病毒RNA的核衣壳(NC)域的相互作用包装入子代病毒。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)逆转录过程中,A3G使胞嘧啶脱氨基,在DNA负链中引入尿嘧啶,导致病毒的过度突变,发挥抗病毒作用。除此之外,A3G通过包装成病毒粒子发挥抗HIV-1的作用。HIV-1的辅助调节蛋白病毒感染因子(Vif)可以通过泛素-蛋白酶体系统来拮抗A3G的抑制HIV-1的作用。因此,上调A3G的表达或是抑制Vif对A3G的拮抗作用可能成为HIV-1感染治疗的新有效方法。 展开更多
关键词 病毒HIV-1颗粒 mrna编辑催化多肽蛋白3g 逆转录 抗HIV-1药物 辅助蛋白病毒感染因子
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APOBEC3B在乳腺癌中的研究进展
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作者 董荣荣 何雪心 季佳丽 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2017年第9期696-699,共4页
载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽(APOBEC)家族中的APOBEC3B是一类具有胞嘧啶脱氨酶活性的蛋白。研究表明APOBEC3B可以通过介导体细胞突变参与乳腺癌的发生发展,促进肿瘤转移和耐药,影响乳腺癌的治疗疗效,与乳腺癌的预后关系密切,在... 载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽(APOBEC)家族中的APOBEC3B是一类具有胞嘧啶脱氨酶活性的蛋白。研究表明APOBEC3B可以通过介导体细胞突变参与乳腺癌的发生发展,促进肿瘤转移和耐药,影响乳腺癌的治疗疗效,与乳腺癌的预后关系密切,在乳腺癌的诊断和治疗中具有潜在的临床应用价值,可为乳腺癌的治疗提供新希望。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 突变 预后 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3B
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APOBEC3A-HBc融合蛋白的表达及活性鉴定
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作者 杜娟 成珊 +2 位作者 白换换 纪奇峰 郭晏海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1521-1528,共8页
目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的... 目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的PCR产物分别和含有全长HBc、四种C端截短体HBc的PCR扩增片段连接克隆入真核表达载体pc DNA3.0。将重组载体分别转染HEK293 T细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测融合蛋白在HEK293 T细胞中的定位,Western blot法检测融合蛋白的表达水平;尿素变性PAGE法分析融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性。结果构建的五种融合蛋白表达载体,可在HEK293T细胞中表达五种融合蛋白,4种含HBc截短体编码的融合蛋白表达载体比含全长HBc编码的融合蛋白载体的表达能力强;含全长HBc的融合蛋白APOBEC3A-HBc主要定位于细胞质,而含HBc截短体的融合蛋白APOBEC3AHBc144 S、APOBEC3 A-HBc144 E、APOBEC3 A-HBc144 AAA和APOBEC3 A-HBc144 A均主要定位于细胞核中;HBc截短体融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性高于全长HBc融合蛋白。结论成功构建APOBEC3A与不同长度和序列HBc的融合蛋白真核表达载体,APOBEC3A与全长HBc及截短体HBc的融合蛋白在表达能力、细胞内定位以及胞嘧啶脱氨基活性具有明显差异。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc) 载脂蛋白B mrna编辑催化多肽3A(APOBEC3A) 脱氨基活性
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稳定表达猪APOBEC3F的PK15细胞单克隆株的建立
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作者 贾俊婷 袁典 +2 位作者 汪琳 马玉媛 章金刚 《生物技术通讯》 CAS 2019年第1期31-35,72,共6页
目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系。方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F... 目的:利用慢病毒载体建立稳定表达猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(pAPOBEC3F,简称pA3F)的PK15细胞系。方法:以实验室前期构建的pBPLV-flag-pA3F质粒为模板,PCR扩增pA3F基因,克隆到pLenti-Puro-3Flag载体构建成pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒,Western印迹鉴定其在HEK293T细胞中的表达;将pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒与包装载体共转染HEK293T细胞,包装成Lenti-pA3F慢病毒并测定病毒滴度;将Lenti-pA3F慢病毒感染PK15细胞,通过嘌呤霉素压力筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达pA3F的细胞单克隆株,最终Western印迹检测细胞单克隆株中pA3F的表达。结果:菌落PCR和序列测定表明pLenti-Puro-pA3F-3Flag质粒构建正确,Western印迹显示该质粒可在HEK293T细胞中表达pA3F蛋白;包装了Lenti-pA3F慢病毒,滴度为1.32×10~8TU/mL,慢病毒感染PK15细胞后可检测到pA3F蛋白的表达;经Western印迹鉴定,筛选得到的单克隆细胞可稳定表达pA3F蛋白。结论:建立了稳定表达pA3F的PK15细胞单克隆株,为进一步深入研究猪内源性反转录病毒在pA3F作用下的免疫逃逸机制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪载脂蛋白B mrna编辑催化多肽蛋白3F 慢病毒载体 猪内源性反转录病毒
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