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川草2号老芒麦(Elymus sibiricus L.)atpA基因的克隆及其调控表达 被引量：11
1
作者 何文兴 徐莺 +3 位作者 唐琳 魏琴 李静 陈放 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第1期67-74,共8页
ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atp... ATPase与植物的耐寒性密切相关. 运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) 从耐寒植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL. cv.‘chuancao No.2’) 中获得了受冷抑制的atpA基因表达序列标签(EST) 序列,通过5'cDNA末端快速扩增(RACE) 获得了atpA基因全长cDNA为1 754 bp,开放阅读框(ORF) 长1 518 bp,编码505个氨基酸. 氨基酸序列与小麦、水稻、玉米atpA基因分别具有95%、94%、94%的相似性. 对2℃低温胁迫及解除胁迫后恢复过程中共13个时段的RNA印迹分析表明,atpA基因在低温胁迫12 h转录受到强烈抑制,在低温胁迫开始后的4～8 h及解除胁迫后的16～24 h,其转录水平明显强于对照. 实验结果为揭示CF1 α亚基对调控ATPase在植物御冷性反应的作用,以及α亚基在植物低温信号转导中的作用提供了新的线索. 展开更多
关键词 atpA基因 mrna差异显示(ddrt-pcr) 低温胁迫 川草2号老芒麦
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鸡白痢沙门氏菌活的非可培养状态相关基因ybbB和rh1B的鉴定 被引量：3
2
作者 李影 段锐 +2 位作者 孙晓媛 钱爱东 王伟利 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期689-693,共5页
为鉴定细菌活的非可培养状态(VBNC)下的转录基因,本研究采用液体LB培养基在4℃条件下诱导鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)CVCC578株进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示RT-PCR技术(DDRT-PCR)分析S.pullorum VBNC状态与正常状态所表达的差异基... 为鉴定细菌活的非可培养状态(VBNC)下的转录基因,本研究采用液体LB培养基在4℃条件下诱导鸡白痢沙门氏菌(S.pullorum)CVCC578株进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示RT-PCR技术(DDRT-PCR)分析S.pullorum VBNC状态与正常状态所表达的差异基因。结果表明,在S.pullorum的VBNC状态下克隆得到两个转录基因片段,分别为422 bp和573 bp。序列分析表明:422 bp的cDNA片段与不同沙门氏菌株的tRNA硒尿核苷合成酶(tRNA 2-selenouridine synthase)的ybbB基因的核苷酸和氨基酸同源性均为99%;573 bp的cDNA片段则与不同菌株S.pullorum的ATP依赖性的RNA解旋酶基因(rh1B)的核苷酸同源性为95%～100%,氨基酸同源性为98%以上。在VBNC状态下这两个转录基因的发现,将为S.pullorum的VBNC机理研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门氏菌 VBNC状态 mrna差异显示(ddrt-pcr) 作用机制
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鸡大肠杆菌活的非可培养状态发生相关基因克隆与分析 被引量：2
3
作者 李影 段锐 +2 位作者 王伟利 孙晓媛 钱爱东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期322-328,共7页
本研究旨在从分子水平探究细菌活的非可培养状态(VBNC)的发生机制。应用冰乙酸和4℃联合诱导条件,使鸡大肠杆菌进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)获得VBNC相关基因。结果表明,从VBNC大肠杆菌中筛选得到的3个差异片段与大... 本研究旨在从分子水平探究细菌活的非可培养状态(VBNC)的发生机制。应用冰乙酸和4℃联合诱导条件,使鸡大肠杆菌进入VBNC状态,并利用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)获得VBNC相关基因。结果表明,从VBNC大肠杆菌中筛选得到的3个差异片段与大肠杆菌23S核糖体RNA基因序列具有较高的核苷酸同源性,分别为98%、98%和99%,而氨基酸的同源性也均在97%以上,表明这3个序列是大肠杆菌23S核糖体rRNA基因的部分序列,同时也是与大肠杆菌VBNC状态发生密切相关的基因。由此推知,当正常大肠杆菌在未暴露任何压力下时,其转录水平较低,特别是23S rRNA的某一(些)基因不显示或受到强烈抑制。当进入VBNC状态后,面临生存压力时,这一(些)基因转录水平明显强于正常状态,而核糖体作为蛋白质合成的主要结构与场所,其某些基因也将积极参与新蛋白质的生物合成。 展开更多
关键词 VBNC状态 大肠杆菌 mrna差异显示(ddrt-pcr) 作用机制
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柑橘mRNA差异显示技术体系建立 被引量：1
4
作者 刘凯 曾继吾 +4 位作者 夏瑞 陈金印 易干军 黄永红 周碧容 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期339-344,共6页
明柳甜橘是从春甜桔自然芽变中选育出来的新品种,本研究以春甜橘和明柳甜橘的叶片为试验材料,首先提取春甜橘和明柳甜橘叶片的总RNA,经3种锚定引物(HT11A,HT11C,HT11G)反转录成3类cDNA,再利用相应的锚定引物和34个随机引物(HAP1-HAP34)... 明柳甜橘是从春甜桔自然芽变中选育出来的新品种,本研究以春甜橘和明柳甜橘的叶片为试验材料,首先提取春甜橘和明柳甜橘叶片的总RNA,经3种锚定引物(HT11A,HT11C,HT11G)反转录成3类cDNA,再利用相应的锚定引物和34个随机引物(HAP1-HAP34)组成引物对,反转录cDNA进行差异显示PCR扩增,将扩增产物经6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染,获得了比较清晰的差异条带,然后回收差异条带并进行克隆,初步分离获得一些春甜橘和明柳甜橘差异基因,建立了柑桔mRNA差异显示技术,为进一步分析导致柑橘芽变的分子机理奠定基础。 展开更多
关键词 柑橘 芽变 mrna差异显示(ddrt-pcr)
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检测差异表达基因技术的研究进展
5
作者 金慧英 房德兴 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第z1期111-113,共3页
随着差异表达基因检测技术的不断发展 ,建立了很多新的检测方法 ,本文对 m RNA差异显示技术 (DDRT-PCR)、c DNA示差分析技术 (c DNA- RDA )及抑制消减杂交技术 (SSH)的基本原理及工作流程作了综述 ,并介绍了它们的应用状况和特点 ,这些... 随着差异表达基因检测技术的不断发展 ,建立了很多新的检测方法 ,本文对 m RNA差异显示技术 (DDRT-PCR)、c DNA示差分析技术 (c DNA- RDA )及抑制消减杂交技术 (SSH)的基本原理及工作流程作了综述 ,并介绍了它们的应用状况和特点 ,这些方法的建立和广泛应用可望发现更多的差异表达的基因 ,并通过其与表型的关系分析加快人们对基因功能的认识。 展开更多
关键词 mrna差异显示(ddrt-pcr) cDNA示差分析(cDNA-RDA) 抑制消减杂交(SSH)
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川草2号老芒麦(Elymus sibiricusL.)UV-B辐射敏感基因rbcL的克隆及其调控表达研究
6
作者 何文兴 李洪梅 +5 位作者 徐莺 肖猛 李群 颜钫 王胜华 陈放 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期56-62,共7页
rbcL是编码光合关键酶1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)大亚基的基因。运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)并通过5′RACE(rapidamplificationofcDNAends)从高原植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL.cv.‘chuancaoNo.2’)中获得了受增强UV-... rbcL是编码光合关键酶1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)大亚基的基因。运用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)并通过5′RACE(rapidamplificationofcDNAends)从高原植物川草2号老芒麦(ElymussibiricusL.cv.‘chuancaoNo.2’)中获得了受增强UV-B辐射抑制的rbcL基因,该基因全长cDNA为1.51kb,开放阅读框(ORF)长1.434kb,编码477个氨基酸。氨基酸序列与Elymustrachycaulus中的Rubisco大亚基具有97%的同源性、与Triticumaestivum和Hordeumcomosum的Rubisco大亚基同源性均为98%。Northern杂交分析表明,增强UV-B辐射后6h,rbcL基因表达受到强烈抑制,处理后60h,其表达几乎完全被抑制,表明即使是长期生长在高原地区、强UV-B辐射条件下的高原物种,在受到较强的UV-B辐射后,其rbcL基因的转录也会受到抑制。 展开更多
关键词 RBCL基因 mrna差异显示(ddrt-pcr) UV-B辐射 川草2号老芒麦
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mRNA差异显示技术的优化及其在苏淮猪育种中的应用 被引量：1
7
作者 李开桢 曲亮 +5 位作者 黄瑞华 石放雄 邱新深 周波 刘红林 王林云 《畜牧与兽医》 北大核心 2008年第10期97-101,共5页
运用mRNA差异显示技术可以了解不同组织细胞或同类组织细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,为研究生命活动过程提供重要信息。本文对差异显示技术的基本原理、优缺点以及近年来此方法的改进进行了论述和评价,对其方法提... 运用mRNA差异显示技术可以了解不同组织细胞或同类组织细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况,为研究生命活动过程提供重要信息。本文对差异显示技术的基本原理、优缺点以及近年来此方法的改进进行了论述和评价,对其方法提出了优化方案,并初步就初步报道了其在苏淮猪的分子标记辅助选育实践中的应用效果。 展开更多
关键词 mrna差异显示技术(ddrt—pcr) 猪育种 假阳性 苏淮猪
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