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鸡白细胞介素18成熟蛋白基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达 被引量：8
1
作者 胡敬东 赵宏坤 崔治中 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期91-94,共4页
通过PCR方法自含鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)成熟蛋白(mature ChIL-18,mChIL-18)基因的克隆质粒中扩增mChIL-18基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中。阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染鸡胚成纤... 通过PCR方法自含鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,ChIL-18)成熟蛋白(mature ChIL-18,mChIL-18)基因的克隆质粒中扩增mChIL-18基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO中。阳性克隆鉴定后,在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞(CEF),通过间接免疫荧光试验(IFA)检测到了mChIL-18在CEF中的表达。 展开更多
关键词 mchil-18 转染 IFA
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鸡白介素18成熟蛋白的发酵工艺及其对新城疫疫苗的免疫增强作用 被引量：2
2
作者 张海滨 周明东 +3 位作者 周霞 苏倩倩 胡敬东 赵宏坤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1116-1120,共5页
为探讨重组鸡白介素18(mChIL-18)毕赤酵母工程菌在5L发酵罐中大规模发酵的工艺及其对新城疫疫苗的免疫增强作用,复苏工程菌GS115/pPIC9K-mChIL-18于YPD培养基,在其D600值达到5.2左右时转入发酵罐中,采用分批补料方式对毕赤酵母工程菌进... 为探讨重组鸡白介素18(mChIL-18)毕赤酵母工程菌在5L发酵罐中大规模发酵的工艺及其对新城疫疫苗的免疫增强作用,复苏工程菌GS115/pPIC9K-mChIL-18于YPD培养基,在其D600值达到5.2左右时转入发酵罐中,采用分批补料方式对毕赤酵母工程菌进行高密度发酵。控制和优化各种发酵条件,经历84h结束发酵。将发酵液离心,用6×His镍柱对上清中的表达产物进行纯化,并将纯化后的mChIL-18用脂质体包被后和新城疫疫苗一起对鸡群免疫。结果显示,毕赤酵母工程菌在5L发酵罐采用甲醇诱导补料批式发酵,在pH5.5,溶氧值20%～30%,温度28℃,诱导72h,mChIL-18的表达产量为560mg/L,发酵上清经纯化后纯度可达70%以上;用0.2mL的mChIL-18脂质体能够显著增强机体的免疫力,其中HI抗体效价和淋巴细胞亚群CD4+、CD8+含量均显著高于对照组。这表明mChIL-18毕赤酵母工程菌在5L发酵罐高密度发酵成功,并能显著增强新城疫疫苗的免疫效果,为IL-18在生产实践得到更好的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 mchil-18 毕赤酵母 发酵工艺 新城疫疫苗 免疫增强
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脂质体包被鸡IL-18可增强新城疫活疫苗的免疫效果 被引量：2
3
作者 张海滨 周明东 +2 位作者 周霞 胡敬东 赵宏坤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1287-1291,共5页
首次将重组鸡白细胞介素18(mChIL-18)用脂质体包被,将不同浓度的mChIL-18脂质体联合新城疫疫苗对鸡群进行免疫,观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。1日龄SPF鸡分为6组,分别为空白对照组、单纯疫苗组、新城疫疫苗+0.2mL mChIL-18组、新... 首次将重组鸡白细胞介素18(mChIL-18)用脂质体包被,将不同浓度的mChIL-18脂质体联合新城疫疫苗对鸡群进行免疫,观察其对新城疫疫苗的免疫增强作用。1日龄SPF鸡分为6组,分别为空白对照组、单纯疫苗组、新城疫疫苗+0.2mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.1mL mChIL-18组、新城疫疫苗+0.3mL mChIL-18组和新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡于7日龄免疫,免疫后每周抽取外周血及外周抗凝血,应用血凝抑制试验和流式细胞仪来检测免疫鸡的HI抗体水平及CD4+和CD8+T淋巴细胞的变化情况。并于最后一次采血后,对各组试验鸡应用F48E9标准强毒进行攻击(100ELD50.只-1)。结果表明mChIL-18脂质体的最佳剂量为0.2mL.只-1,其不仅能够显著增强机体的细胞免疫和体液免疫,而且还可以明显提高新城疫疫苗的保护率。 展开更多
关键词 mchil-18 脂质体 新城疫疫苗 免疫增强
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Bac-to-Bac系统双表达mChIL18基因和H5亚型AIV HA1基因及其免疫原性
4
作者 孔娜 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期712-717,共6页
为了制备禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)基因工程亚单位疫苗,将其HA1基因和鸡IL-18成熟蛋白基因(mChIL-18)分别或先后插入到双表达载体pFastBacTM Dual中,表达单表达或双表达蛋白pHA1、pIL18和pHA1-IL18。将表达蛋白和/或禽流... 为了制备禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)基因工程亚单位疫苗,将其HA1基因和鸡IL-18成熟蛋白基因(mChIL-18)分别或先后插入到双表达载体pFastBacTM Dual中,表达单表达或双表达蛋白pHA1、pIL18和pHA1-IL18。将表达蛋白和/或禽流感二价(H5+H7)灭活疫苗通过腿部肌肉多点注射免疫7日龄SPF鸡,2周后加强免疫1次。结果显示,pHA1-IL18、pHA1+pIL18、pIL18+禽流感疫苗、禽流感疫苗和pHA1免疫雏鸡后均能促进CD4+T、CD8+T细胞的增殖和抗体水平的增加,且pHA1-IL18免疫组要优于pHA1+pIL18混合免疫组及其他免疫组和对照组,差异显著(P<0.05)。结果表明,pHA1-IL18可以产生比pIL18+pHA1更强的免疫原性,为新型疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 HA1基因 mchil-18基因 pFastBacTM Dual载体 双表达 免疫原性
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鸡白细胞介素18成熟蛋白的原核表达及抗体间接ELISA方法的建立
5
作者 苏倩倩 李恩扩 +2 位作者 张海滨 周霞 胡敬东 《山东农业科学》 2012年第4期5-9,共5页
将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶... 将鸡白细胞介素18的成熟蛋白(chicken interleukin 18 mature protein,mChIL-18)基因在原核系统表达,采用Ni-NTA亲和层析方法纯化得到该重组蛋白。纯化后重组蛋白包被反应板,通过方阵滴定确定最佳抗原包被浓度、血清稀释倍数、羊抗鼠酶标二抗稀释倍数,建立检测ChIL-18成熟蛋白抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定结果确定最佳抗原包被质量浓度为4μg/ml,阳性血清稀释比例为1∶104,羊抗鼠IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释比例为1∶12 000,抗原抗体最佳结合时间是1.5 h,血清与二抗最适反应时间为1 h。阴性、阳性血清的判定标准为:被检样本的OD值是一组阴性样本OD值的2或3倍且OD450≥0.5,即为阳性,比值以P/N表示1,.5<P/N<2.0为可疑,P/N<1.5为阴性。本试验结果证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,为下一步单抗的筛选鉴定奠定了必要的基础。 展开更多
关键词 鸡白细胞介素 18成熟蛋白(mchil-18) 原核表达 蛋白纯化 间接ELISA
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