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猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用
被引量:
7
1
作者
孙盼盼
时建立
+5 位作者
彭喆
王硕
王妍
吴晓燕
徐绍建
李俊
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1419-1428,共10页
旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)检测方法。针对猪肺炎支原体(Mhp)P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)...
旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)检测方法。针对猪肺炎支原体(Mhp)P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,进行LAMP扩增反应。将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测。经优化,LAMP最佳反应条件为65℃,反应15 min,从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右,比常规PCR技术缩短近2 h。LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体(Mhp),对猪鼻支原体(Mhr)及猪圆环病毒(PCV)等常见猪病病原的检测结果为阴性。灵敏性试验表明,LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×10^0个拷贝DNA,是普通PCR的1000倍。利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性,国标PCR方法可检测到56份阳性,符合率可达90.9%。综上,本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测,而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值,有望发展成为Mhp快速检测的有效手段。
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关键词
猪肺炎支原体
环介导等温扩增技术
横向流动试纸条
诊断
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职称材料
题名
猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用
被引量:
7
1
作者
孙盼盼
时建立
彭喆
王硕
王妍
吴晓燕
徐绍建
李俊
机构
青岛农业大学
山东省农业科学院畜牧兽医研究所
山东师范大学
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期1419-1428,共10页
基金
山东省生猪产业技术体系疫病控制岗位(SDAIT-08-07)
山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY010720)
+2 种基金
“十三五”重点研发计划(2016YFD0500708)
山东省农业重大应用技术创新项目(SD2019XM003
SD2019XM006)。
文摘
旨在采用环介导等温扩增(LAMP)和横向流动试纸条(LFD)相结合的方法,建立一种快速、特异,过程可视化的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)检测方法。针对猪肺炎支原体(Mhp)P36基因设计5套特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(FITC)标记的探针,进行LAMP扩增反应。将生物素标记的LAMP产物与FITC标记的探针进行特异性杂交,并使用横向流动试纸条完成扩增产物的检测。经优化,LAMP最佳反应条件为65℃,反应15 min,从基因组DNA提取到LFD结果判断只需40 min左右,比常规PCR技术缩短近2 h。LAMP-LFD可特异性地检出猪肺炎支原体(Mhp),对猪鼻支原体(Mhr)及猪圆环病毒(PCV)等常见猪病病原的检测结果为阴性。灵敏性试验表明,LAMP-LFD对Mhp的检测灵敏度为1×10^0个拷贝DNA,是普通PCR的1000倍。利用本方法可从采集的88份临床疑似病料样品中检测到64份阳性,国标PCR方法可检测到56份阳性,符合率可达90.9%。综上,本研究建立的LAMP-LFD方法可特异、准确地应用于Mhp的检测,而且灵敏度高、操作简单、仪器设备依赖性低、检测成本低、耗时短,适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值,有望发展成为Mhp快速检测的有效手段。
关键词
猪肺炎支原体
环介导等温扩增技术
横向流动试纸条
诊断
Keywords
Mycoplasma
hyopneumoniae
loop
-
mediated
isothermal
amplification
combined
lateral
flow
dipstick
diagnosis
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪支原体肺炎LAMP-LFD快速检测方法的建立及初步应用
孙盼盼
时建立
彭喆
王硕
王妍
吴晓燕
徐绍建
李俊
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
7
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职称材料
已选择
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参考文献
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