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环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究 被引量:11
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作者 易海华 丁永健 +3 位作者 钱志娟 房超 吴萍兰 房婷 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2008年第1期7-11,17,共6页
〔目的〕寻找1种快速的,且敏感度高,特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。〔方法〕环介导等温扩增基因检测(Loop-mediated isothermal amplification LAMP)是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。本课题组根据结核分... 〔目的〕寻找1种快速的,且敏感度高,特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。〔方法〕环介导等温扩增基因检测(Loop-mediated isothermal amplification LAMP)是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。本课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分,可极大地加快LAMP反应速度,且不干扰内引物在LAMP反应中作用。〔结果〕实验结果表明:使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成,总共分析时间不超过1h。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,LAMP检测技术具有与实时PCR(Real-timePCR)技术相同的特异度。另外,由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行,不需要特别昂贵的仪器设备,检测方法简单,结果判定直接。〔结论〕该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用,在快速检测方面具有一定的开发潜力。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 环介导等温扩增 环状引物 链置换
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加环引物LAMP法快速检测沙门氏菌方法的研究 被引量:5
2
作者 李雪 唐善虎 +1 位作者 郝小倩 岑璐伽 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2012年第1期64-68,共5页
探讨了加环引物对LAMP的影响,并与普通PCR法进行了比较,建立一套快速检测沙门氏菌的新方法.以沙门氏菌的inva基因为靶基因,选择PCR的特异性引物,并基于该基因设计出LAMP反应的引物;该研究对LAMP体系的反应温度、dNTP浓度和镁离子浓度等... 探讨了加环引物对LAMP的影响,并与普通PCR法进行了比较,建立一套快速检测沙门氏菌的新方法.以沙门氏菌的inva基因为靶基因,选择PCR的特异性引物,并基于该基因设计出LAMP反应的引物;该研究对LAMP体系的反应温度、dNTP浓度和镁离子浓度等扩增条件也进行了优化,并检测了PCR和LAMP的引物特异性,比较了PCR法、LAMP法和加环引物的LAMP法的灵敏度.结果表明:普通PCR法检测的灵敏度为2.28×103cfu/ml,未加环引物的LAMP法的灵敏度为2.28×101cfu/ml,加环引物的LAMP法的灵敏度为2.28×100cfu/ml.通过三种方法的比较可知:LAMP法检测沙门氏菌比PCR法更加快速、灵敏,而加环引物可进一步提高LAMP的扩增效率.本研究为快速检测沙门氏菌方法的构建奠定了基础,并认为LAMP在检测微生物方面有着广泛的发展前景. 展开更多
关键词 环介导等温扩增 环引物 沙门氏菌
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生殖道病原菌LAMP检测的环引物设计与优化
3
作者 贾义国 徐小芳 +3 位作者 陈尚贤 王新博 余跃 孙群 《中国测试》 CAS 北大核心 2023年第11期60-67,共8页
孕期生殖道病原菌感染是威胁妇女和胎儿健康的常见疾病之一,为改进现有检测方法耗时长的缺陷,对基于环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)的生殖道病原菌快速检测方法进行优化。在Gardnerella vaginalis的LAMP... 孕期生殖道病原菌感染是威胁妇女和胎儿健康的常见疾病之一,为改进现有检测方法耗时长的缺陷,对基于环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)的生殖道病原菌快速检测方法进行优化。在Gardnerella vaginalis的LAMP检测体系中,通过对不同环引物组扩增速率(Ct值)进行统计学分析,验证了环引物在LAMP反应中提升扩增速率的能力,同时探究了环引物长度和GC含量对扩增速率的影响,并将其作为环引物筛选参数应用于3种生殖道病原菌(G.vaginalis、Streptococcus agalactiae、Enterococcus faecalis)检测的环引物设计。结果表明,不同GC含量的环引物扩增速率差异不显著,而环引物的长度是影响其扩增效果的关键因素,碱基数较少的环引物有利于提高LAMP反应速率(p<0.05),设计出的引物组GV-1、GBS-132和EF-3可以在105 CFU/mL扩增浓度下在30 min内呈现完整“S”扩增曲线,具有较好的临床病原菌筛查应用潜力。 展开更多
关键词 病原菌检测 环引物 环介导等温扩增 生殖道感染 快速检测
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Research progress and prospects of nucleic acid isothermal amplification technology
4
作者 SHUHUI WU PING XU +1 位作者 XIANGBIN XU SONG-BAI LIU 《BIOCELL》 SCIE 2023年第11期2385-2395,共11页
Nucleic acid(DNA and RNA)detection and quantification methods play vital roles in molecular biology.With the development of molecular biology,isothermal amplification of DNA/RNA,as a new molecular biology technology,c... Nucleic acid(DNA and RNA)detection and quantification methods play vital roles in molecular biology.With the development of molecular biology,isothermal amplification of DNA/RNA,as a new molecular biology technology,can be amplified under isothermal condition,it has the advantages of high sensitivity,high specificity,and high efficiency,and has been applied in various fields of biotechnology,including disease diagnosis,pathogen detection,food hygiene and safety detection and so on.This paper introduces the progress of isothermal amplification technology,including rolling circle amplification(RCA),nucleic acid sequence-dependent amplification(NASBA),strand displacement amplification(SDA),loop-mediated isothermal amplification(LAMP),helicase-dependent amplification(HDA),recombinase polymerase amplification(RPA),cross-priming amplification(CPA),and its principle,advantages and disadvantages,and application development are briefly summarized. 展开更多
关键词 Isothermal amplification Rolling circle amplification Nucleic acid sequence-based amplification Strand displacement amplification loop-mediated isothermal amplification Helicase-dependent amplification Recombinase polymerase amplification Cross-primer amplification
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环介导等温扩增方法在生物检测方面的研究进展 被引量:3
5
作者 施伟 赵凯 +2 位作者 唐雪明 韩芳婷 许燕 《江西农业学报》 CAS 2011年第12期150-154,共5页
综述了环介导等温扩增(LAMP)技术的原理、引物设计、方法创新、应用、技术特点等,并指出了LAMP技术的优点及可能存在的问题。
关键词 环介导等温扩增 环引物 原理 生物检测 应用
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快速检测HPV16的环介导等温扩增检测法的建立
6
作者 苏华 陈琛 +1 位作者 李亚偶 张玉红 《西南国防医药》 CAS 2017年第2期109-111,共3页
目的建立快速检测人乳头瘤病毒16(HPV16)的环介导等温扩增法(LAMP)法。方法针对HPV16 E7区设计LAMP引物,建立LAMP反应体系,对其检测敏感度进行了验证,并与PCR法、LAMP加环引物法、LAMP试剂盒法进行了比较结果利用LAMP方法能成功检测到HP... 目的建立快速检测人乳头瘤病毒16(HPV16)的环介导等温扩增法(LAMP)法。方法针对HPV16 E7区设计LAMP引物,建立LAMP反应体系,对其检测敏感度进行了验证,并与PCR法、LAMP加环引物法、LAMP试剂盒法进行了比较结果利用LAMP方法能成功检测到HPV16病毒E7区的基因,等温条件下反应60 min即可较好完成检测;加入环引物的LAMP法敏感度高于PCR法,与LAMP试剂盒法敏感度一致,为103稀释倍数。结论 LAMP方法具有灵敏度高,操作简便快捷,无需复杂特殊仪器的优点,适用于HPV16病毒的快速检测,具有很好的开发应用前景。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 环引物 环介导等温扩增法 检测
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淡水鱼类线粒体DNA D-loop基因的引物设计和应用 被引量:17
7
作者 黄志坚 徐晓鹏 +4 位作者 唐晶晶 张飓 郑锦卿 李桂峰 何建国 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期84-88,共5页
线粒体DNA测序已广泛应用于鉴定和区分种类以及解决系统进化关系问题。本文选取已测定的主要淡水鱼类的线粒体DNA D-loop基因序列进行同源性比较,寻找保守序列,利用简并性原则设计一对通用的简并引物。利用设计的引物对广东省珠江流域... 线粒体DNA测序已广泛应用于鉴定和区分种类以及解决系统进化关系问题。本文选取已测定的主要淡水鱼类的线粒体DNA D-loop基因序列进行同源性比较,寻找保守序列,利用简并性原则设计一对通用的简并引物。利用设计的引物对广东省珠江流域主要的淡水鱼类线粒体DNA D-loop控制区基因进行扩增,均能获得单一的目的DNA片断,特异性扩增产物大小为1 kb左右。经测序及与GenBank同源序列的比较,证实为包含线粒体控制区全序列的扩增产物。本研究所设计的引物和应用的方法可以快速地同时对多种鱼类进行大规模的遗传背景分析,鉴定某些难于鉴别的近缘物种,为我国鱼类的种类鉴定、地理种群鉴别及种质资源的评估提供重要的工具。 展开更多
关键词 淡水鱼类 线粒体DNA D-loop 引物设计 遗传分析
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利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP)快速检测霍乱弧菌 被引量:8
8
作者 燕勇 曹家穗 +3 位作者 高雯洁 高蕾 王恒辉 陈黎霞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第5期1158-1162,共5页
目的:建立基于环介导等温核酸扩增技术(LAMP)的霍乱弧菌快速检测方法,为霍乱疫情监测与预防提供及时的应急检测服务和参考结果。方法:通过Genbank检索、下载霍乱弧菌ctxA基因序列,使用BLAST、GENtle、DNAMan等相关核酸序列分析软件比对... 目的:建立基于环介导等温核酸扩增技术(LAMP)的霍乱弧菌快速检测方法,为霍乱疫情监测与预防提供及时的应急检测服务和参考结果。方法:通过Genbank检索、下载霍乱弧菌ctxA基因序列,使用BLAST、GENtle、DNAMan等相关核酸序列分析软件比对分析确定目标序列,使用PrimerExplorer v4软件设计霍乱弧菌LAMP引物。以SYBR Green I作为荧光剂在荧光定量PCR仪上实时检测LAMP反应结果,作为本研究的主要研究方式。通过优化反应温度、时间、组成浓度等实验条件对LAMP检测方法进行改进,并与PCR方法进行比较与评价。结果:从分属不同种属的20株实验菌株中分别正确地检出所有5株产霍乱毒素的霍乱弧菌菌株,对菌株纯培养物的检出限达到了5 cfu/μl(10 cfu/reaction)。结论:本研究建立的霍乱弧菌LAMP检测方法是一种灵敏、特异、快速、简便的霍乱弧菌检测方法,适于基层单位推广使用,对霍乱疾病监测与暴发后疫情应急检测具有重要意义。 展开更多
关键词 霍乱 霍乱弧菌 环介导等温核酸扩增技术(LAMP) PCR 引物设计 快速检测
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两种实时定量RT-PCR方法检测miRNAs表达的技术分析 被引量:6
9
作者 闵自信 杜小云 +5 位作者 宁启兰 钟楠楠 郑悦雯 韩燕 吕社民 张蕊 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期258-262,共5页
目的比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs(miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法。方法取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用。选取... 目的比较两种实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测microRNAs(miRNAs)表达含量的技术差异,优化不同实验目的和条件下研究miRNAs表达的技术方法。方法取21d和42d两个时间点的SD大鼠关节软骨组织,采用Trizol法提取总RNA备用。选取rno-miR-15b、rno-miR-16、rno-miR-195、rno-miR-497作为研究对象,分别用茎环引物和试剂公司提供的试剂盒方法反转录总RNA,并应用实时定量PCR方法检测这些miRNAs的表达量。提取人血浆中总RNA,用上述两种RT-qPCR方法实时定量检测has-miR-16的表达量。结果两种方法检测这些miRNAs表达量,在大鼠21d和42d这两个时间点其表达量变化趋势相同,都呈现增高的趋势,这与我们前期Solexa测序结果相同。在血浆中的结果显示,其中茎环引物反转录方法灵敏度相对较高。结论茎环引物法在少量几个重要的miRNAs检测中具有优势,而试剂盒方法适用于大量miRNAs的筛查。 展开更多
关键词 MIRNAS 茎环引物 实时定量反转录聚合酶链反应 软骨 血浆
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改进茎环引物RT-PCR法实时定量检测microRNA 被引量:3
10
作者 薛慧慧 马骁骁 +3 位作者 朱长保 晁天柱 肖君华 周宇荀 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第28期5431-5435,共5页
目的:为检测不同组织中microRNA(miRNA)的表达量,本研究建立了一种改进的qRT-PCR(Quantitative reverse transcription PCR)技术。方法:采用具有高特异性的茎环引物逆转录,结合SYBR Green实时定量PCR技术,建立了以延伸茎环引物RT-PCR为... 目的:为检测不同组织中microRNA(miRNA)的表达量,本研究建立了一种改进的qRT-PCR(Quantitative reverse transcription PCR)技术。方法:采用具有高特异性的茎环引物逆转录,结合SYBR Green实时定量PCR技术,建立了以延伸茎环引物RT-PCR为基础的实时定量检测microRNA的方法。结果:本研究建立的microRNA检测方法,特异性好,灵敏度高,线性范围宽。熔解曲线的单一峰型和电泳检测到的单一条带都证明了扩增的特异性。对标准品的检测跨越了7个数量级的浓度范围,最低拷贝数为103,效率高达98%。结论:利用该技术检测了120个组织样本,说明该方法可快速、准确、高效的获取不同组织中miRNA的表达量,为进一步探讨miRNA对性发育的影响提供了实验依据。 展开更多
关键词 MIRNA RT-PCR 茎环引物 引物延伸
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环介导恒温扩增技术及其在昆虫学领域的应用前景 被引量:4
11
作者 林瑶 朱雅君 +1 位作者 叶军 雷桥 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第5期137-141,共5页
环介导恒温扩增技术是一种新颖的核酸扩增技术。本文介绍了环介导恒温扩增(LAMP)技术的原理、引物设计、扩增机制、产物检测等方面的内容,归纳了LAMP技术与常规PCR方法的优缺点;并对LAMP技术在病毒、细菌、寄生虫检测中的应用现状进行... 环介导恒温扩增技术是一种新颖的核酸扩增技术。本文介绍了环介导恒温扩增(LAMP)技术的原理、引物设计、扩增机制、产物检测等方面的内容,归纳了LAMP技术与常规PCR方法的优缺点;并对LAMP技术在病毒、细菌、寄生虫检测中的应用现状进行了阐述,展望了LAMP技术在昆虫检测鉴定领域的应用前景。 展开更多
关键词 核酸扩增 环介导恒温扩增 引物设计 昆虫鉴定 综述
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棉花miRNA表达量检测方法Stem-loop RT-PCR的建立 被引量:2
12
作者 胡广 王乐 +4 位作者 张振楠 唐叶 周璐璐 彭清忠 吴家和 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期2121-2127,共7页
为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析... 为建立一套鉴定棉花miRNA表达丰度的分子技术,优化了Stem-loop RT-PCR方法,并通过分析棉花3个miRNA的表达谱来评价分析该技术体系的特性。首先设计3条引物(茎环特异性反转录引物、正向引物和通用反向引物),通过cDNA和RNA梯度稀释,分析引物的扩增效率和检测灵敏度。结果表明,Stem-loop RT-PCR方法中设计的引物具有较高的扩增效率和检测灵敏度,miR156和miR159扩增效率分别为102.0%和103.6%;并对不同miRNA分析其总RNA检测灵敏度,miR156和miR159的总RNA检测灵敏度差异较大,分别为20 ng和2 pg。同时,应用建立的棉花Stem-loop RT-PCR方法,成功地分析了Gh-miR156、Gh-miR159和Gh-miR5658在根茎叶中的表达量。由此可见,棉花Stem-loop RT-PCR方法具有灵敏度高、特异性强、成本较低和适用于一般实验室等优点,为棉花等植物miRNA相关研究提供了技术保证,加快了miRNA及其调控基因功能的研究步伐。 展开更多
关键词 STEM-loop RT-PCR 棉花 MIRNA 茎环引物
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基于实时荧光定量反转录PCR技术的动物miRNA表达分析策略 被引量:3
13
作者 宋嘉哲 孙福伯 +1 位作者 庄开歌 薛恺 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期109-113,共5页
在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的... 在人体内有约60%的蛋白质编码基因受到到miRNA调控。近年来,miRNA参与调控的与动物生长相关的细胞周期、发育、分化和新陈代谢等多种生物学过程也越来越受到关注。目前针对miRNA表达检测的常用方法有很多,其中基于反转录PCR(RT-PCR)的放大检测技术是应用范围最广,实施手段最灵活的一种研究策略。主要包括miRNA的全定量PCR法(miR-Q)、基于茎环引物的实时荧光定量PCR法、Poly(A)加尾性通用反转录法、miRNA表达谱的高通量RT-PCR分析和miRNA扩增谱系(mRAP)法。作者对这几种基于实时荧光定量RT-PCR技术的动物miRNA表达分析策略分别进行了介绍,对其原理、方法和应用范畴进行了概括性总结。 展开更多
关键词 动物miRNA 实时荧光定量PCR miRNA的全定量PCR 茎-环引物 miRNA扩增谱系
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茎环法RT-qPCR定量检测细胞抗猪瘟病毒siRNA的表达 被引量:3
14
作者 刘帅 李江南 +3 位作者 袁婷 杨凡力 逄大欣 涂长春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期26-36,共11页
RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高... RNAi(RNA interference)已成为特异抗病毒治疗研究的热点,但siRNA(small interfering RNA)的定量检测仍是评价RNAi抗病毒效果的瓶颈。为了检测抗CSFV特异siRNA分子(siN1和siN2)在细胞中的表达水平,设计并以交叉组合方法筛选了具有较高特异性和灵敏度的siRNA特异茎环引物(SLP-N1-6和SLP-N2-8),成功地建立了最优的siN1和siN2的茎环法RT-qPCR检测方法。该方法表现出良好的特异性和较高的灵敏度,能检测出102至108个拷贝的siRNA,至少可达7个数量级的检测范围,平行性好(Rsq=0.999),扩增效率高(Eff.=98.2%)。茎环法RT-qPCR能准确地定量检测抗CSFV的PK-15细胞克隆的siN1/siN2表达水平,可结合常规的检测病毒水平的间接免疫荧光和TCID50等技术定量评价RNAi抗CSFV的有效性,为未来抗猪瘟转基因猪的抗病毒效果评价提供了先进的检测技术。 展开更多
关键词 抗猪瘟病毒小干扰RNA 茎环引物 MGB探针 实时定量PCR
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柞蚕核型多角体病毒实时荧光LAMP检测方法的初步建立 被引量:3
15
作者 张洋 薛强 +2 位作者 金英 李凤芹 闫伟 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期957-961,共5页
柞蚕脓病是柞蚕生产上的主要病害之一,病原为柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)。建立快速而准确检测蚕体样品中Ap NPV的技术,将有助于对病害的早期诊断及流行病学调查和实施有效的防控措施。以柞蚕核型多角体病毒ORF142基因为靶基因,设计2组... 柞蚕脓病是柞蚕生产上的主要病害之一,病原为柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)。建立快速而准确检测蚕体样品中Ap NPV的技术,将有助于对病害的早期诊断及流行病学调查和实施有效的防控措施。以柞蚕核型多角体病毒ORF142基因为靶基因,设计2组特异性环介导等温扩增(LAMP)引物,利用实时荧光PCR技术进行检测分析。结果表明,设计与合成的2组引物均能对柞蚕核型多角体病毒基因组扩增出特异性产物,其中引物组2在63℃开始孵育60 min,反应起始扩增时间为12 min,当反应时间达到40 min时,扩增曲线的最大相对荧光强度(RFU)值达6 000,相对于引物组1具有更好的及时性,可缩短一半反应起始时间。初步建立的Ap NPV实时荧光LAMP检测方法相对于传统PCR方法,检测效率提高4倍左右。 展开更多
关键词 柞蚕核型多角体病毒 环介导等温扩增技术 引物 反应条件 早期诊断
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纺织品中铜绿假单胞菌快速检测方法研究 被引量:2
16
作者 李轲 禹建鹰 +2 位作者 郭华麟 张淑霞 郭会清 《棉纺织技术》 CAS 北大核心 2018年第6期30-34,共5页
探讨纺织品中铜绿假单胞菌的快速检测方法。将免疫磁珠富集技术和环介导等温扩增技术结合起来,利用免疫磁珠富集技术富集样品中铜绿假单胞菌,富集液提取DNA,进行环介导等温扩增技术特异扩增。以49株铜绿假单胞菌菌株和21株非铜绿假单胞... 探讨纺织品中铜绿假单胞菌的快速检测方法。将免疫磁珠富集技术和环介导等温扩增技术结合起来,利用免疫磁珠富集技术富集样品中铜绿假单胞菌,富集液提取DNA,进行环介导等温扩增技术特异扩增。以49株铜绿假单胞菌菌株和21株非铜绿假单胞菌菌株测定特异性,以49株铜绿假单胞菌阳性菌液稀释成不同梯度测试灵敏度。结果表明:该方法特异性、灵敏度符合要求,检测限可达4.5CFU/mL,且简化了测试流程,使检测时间显著缩短。认为:所建立的纺织品中铜绿假单胞菌快速检测方法鉴别准确、快速,尤其适用于基层检验、检疫机构。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 免疫磁珠富集技术 环介导等温扩增技术 ETA基因 引物筛选
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检测肺炎支原体新方法的建立及应用
17
作者 周丽娟 吴艳凌 +3 位作者 周林 刁叶秋 王正芳 王广洲 《实用临床医药杂志》 CAS 2022年第19期100-104,共5页
目的 建立成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-Cas12a技术结合环介导等温扩增(LAMP)单管一步法快速检测肺炎支原体(Mp),并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法 设计并优化Mp LAMP引物,根据LMAP产物靶标设计Cas12a CrRNA。分析CRISP... 目的 建立成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-Cas12a技术结合环介导等温扩增(LAMP)单管一步法快速检测肺炎支原体(Mp),并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法 设计并优化Mp LAMP引物,根据LMAP产物靶标设计Cas12a CrRNA。分析CRISPER-LAMP单管一步法检测Mp DNA的灵敏度;检测Mp、甲流病毒(FluA)、乙流病毒(FluB)、肺炎克雷伯菌(Kp)和肺炎链球菌(Sp)及50例临床样本,评估CRISPER-LAMP单管一步法的特异性。结果 CRISPER-LAMP单管一步法可在1 h内实现Mp DNA的可视化检测,检出限为10 fg/μL,聚合酶链式反应(PCR)法检出限为100 fg/μL;CRISPER-LAMP单管一步法检测FluA、FluB、Kp和Sp结果均为阴性;50例临床样本检测结果均与临床诊断结果相符,且CRISPER-LAMP与PCR法一致性较好(Kappa=1)。结论 CRISPER-LAMP单管一步法检测Mp简便、快速、灵敏度高,且特异性强,检测不需任何特殊设备,检测过程中无气溶胶污染,其有望成为快速检测Mp的新方法。 展开更多
关键词 成簇的规律间隔的短回文重复序列 环介导等温扩增 肺炎支原体 可视化检测 引物
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环介导等温扩增技术的引物设计与筛选研究 被引量:1
18
作者 王德国 王永真 王爱萍 《安徽农业科学》 CAS 2014年第11期3166-3168,共3页
[目的]研究引物设计与非特异扩增之间的关系.[方法]以单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的特异性基因hlyA与沙门氏菌(Salmonella)的特异基因invA为例设计引物,进行环介导等温扩增.[结果]就环介导等温扩增的任何2条引物... [目的]研究引物设计与非特异扩增之间的关系.[方法]以单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的特异性基因hlyA与沙门氏菌(Salmonella)的特异基因invA为例设计引物,进行环介导等温扩增.[结果]就环介导等温扩增的任何2条引物而言,如果2条引物3’端的3~4碱基在同一条引物上都有2个互补序列,在常用的LAMP反应体系与反应条件下,必然有非特异性扩增,LAMP引物设计与筛选应避免这种情况出现.[结论]按照该试验的原则设计引物,可降低非特异性扩增. 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 引物设计 非特异性扩增
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特异性逆转录microRNA-505的高效茎环引物的设计
19
作者 熊黎 仝莉 +3 位作者 王茂春 周宇荀 李凯 肖君华 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第27期5225-5229,共5页
目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的mi RNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响。方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Rev... 目的:构建一个高效且特异性的逆转录茎环引物,以准确定量检测小鼠的mi RNA-505基因,同时探讨茎环引物的结构对逆转录效率的影响。方法:规律性地改变通用茎环引物的茎部和环部的碱基结构,再进行不同的组合,利用逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)技术,探寻效率最高的茎环引物。结果:当固定茎部结构为14对碱基,规律性改变环部碱基个数(15,18,21),经RT-PCR检测的CT值无差异,均为28.5;当固定环部结构为21个碱基,CT值随茎部碱基对(8,11,14)规律性地延长而逐渐增大;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时CT值最小,为26.7。结论:环部结构对茎环引物的效率无贡献;当环部结构为21个碱基,茎部结构为8对碱基时,茎环引物的效率和特异性是最佳的,适用于准确检测小家鼠的mi RNA-505基因。 展开更多
关键词 茎环引物 MI R-505 逆转录 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)
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内引物在环媒恒温基因扩增技术中的作用研究
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作者 刘洵 程天印 王晓君 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2008年第4期255-257,共3页
目的研究内引物在环媒恒温基因扩增(LAMP)中的作用,确定利用LAMP的同一套特异性引物区别具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌基因的可行性。方法采用PCR介导定点突变法对沙门氏菌invA基因定点突变,使其T669→A669、T725→A725... 目的研究内引物在环媒恒温基因扩增(LAMP)中的作用,确定利用LAMP的同一套特异性引物区别具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌基因的可行性。方法采用PCR介导定点突变法对沙门氏菌invA基因定点突变,使其T669→A669、T725→A725,用原LAMP特异性引物扩增含单核苷酸差异序列,观察扩增结果。结果制备的点突变模板C大小与预期值(1 371 bp)一致。LAMP扩增的伤寒沙门氏菌CMCC50098标准株DNA产物的电泳条带呈梯状,而扩增模板C未扩出反应产物。结论LAMP不能利用同一套引物扩增具有单核苷酸差异的不同株型或同一株型的病原菌,即可利用同一套引物区分这些病原菌。 展开更多
关键词 环媒恒温基因扩增 内引物 基因突变
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