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猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd缺失株平衡致死载体系统的构建及生物学特性研究 被引量:14
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作者 张明亮 张春杰 +4 位作者 程相朝 赵战勤 李正 王慧 郁川 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期373-379,共7页
为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构... 为开发减毒猪霍乱沙门氏菌的活疫苗载体,通过自杀性质粒介导的细菌同源重组技术,构建了猪霍乱沙门氏菌C78-1株ΔcrpΔasd双基因缺失株,并对其生物学特性进行探讨。首先构建含有缺失1 488bp asd基因的重组自杀性质粒pREΔasd,然后与已构建完成的ΔcrpC78-1缺失株进行接合转移,采用两步法筛选无抗性的C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株。PCR鉴定结果表明,C78-1的ΔcrpΔasd双缺失株构建成功;进一步研究表明,该缺失株的生长需要外源的二氨基庚二酸(DAP),且能稳定遗传缺失的asd基因,与C78-1相比,其血清型未发生变化,但其生长速度明显减慢。ΔcrpΔasd C78-1双缺失株可接受asd+质粒作为宿主平衡致死系统高效稳定地表达外源基因,为开发以C78-1为载体的口服多价疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门氏菌C78-1株 Asd+平衡致死系统 重组自杀性质粒 活疫苗载体
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猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株的生物学特性及作为活疫苗表达载体的应用 被引量:9
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作者 赵战勤 徐引弟 +5 位作者 吴斌 程相朝 李银聚 汤细彪 张春杰 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期29-36,共8页
为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C... 为了评价猪霍乱沙门氏菌ΔasdC500株作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统的可行性,对ΔasdC500株和其亲本菌株C500的生物表型、生长特性、毒力、生物安全性、表达特性等进行比较研究。结果表明:ΔasdC500缺失株的生化特性和血清型与亲本菌株C500一致,符合猪霍乱沙门氏菌的表型特征;携带平衡表达质粒pYA3493的重组菌株ΔasdC500(pYA3493)与C500的生长速度没有明显差别;根据Reed-Muench法,测定ΔasdC500(pYA3493)腹腔感染BALB/c小鼠的LD50为1.1×107CFU,毒力稍低于C500;口服接种ΔasdC500(pYA3493)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别;携带重组质粒pYA-F1P2(含有支气管败血波氏杆菌抗原基因fhaB的TypeI区域和prn的R2区域)的重组菌株ΔasdC500(pYA-F1P2)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达外源保护性抗原。由此表明,ΔasdC500保留了亲本菌株C500的一系列生物学特征,并可高效表达外源抗原,可作为沙门氏菌Asd+平衡表达系统开发基因工程重组疫苗。 展开更多
关键词 沙门氏菌 活疫苗载体 Asd^+平衡表达系统 支气管败血波氏杆菌
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动物疫病活载体疫苗研究进展
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作者 周凯钰太 潘俊慧 +5 位作者 王素春 禹兰平 杨文静 梁晚枫 孙福亮 王楷宬 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期47-57,共11页
活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领... 活载体疫苗是以细菌或病毒作为载体表达外源抗原和治疗因子的载体系统,具有安全性高、毒力返祖风险低、成本低,可诱导免疫机体产生高水平的体液免疫、细胞免疫或黏膜免疫等优点,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一,在动物疫病防控领域应用较多。病毒载体包括DNA病毒(如腺病毒、腺相关病毒和痘病毒等)和RNA病毒(如新城疫病毒、流感病毒等);细菌载体包括减毒致病菌与非致病菌两类,主要包括乳酸菌、沙门氏菌、大肠杆菌等。活载体疫苗常用的抗原呈递策略有载体-宿主平衡致死系统、微生物表面展示系统。多种疫苗载体的开发及抗原呈递策略的选择,使得活载体疫苗的使用价值最大化。不同载体疫苗在预防疫病方面均有不同优缺点,应根据实际情况选择最优最适合的活载体疫苗。本文综述了动物疫病防控领域的病毒和细菌活载体疫苗研究进展及其抗原呈递方式,以期为活载体疫苗的进一步研究提供参考。 展开更多
关键词 活载体疫苗 病毒载体 细菌载体 疫苗开发 抗原呈递
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黏膜疫苗的研究现状与进展 被引量:5
4
作者 王志明 孟雅娟 +1 位作者 贺丞 高健 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期1-6,共6页
目的黏膜系统是引起传染性疾病的病原微生物进入人体的主要渠道,而通过黏膜途径免疫的疫苗能够在病原体入侵的最初阶段产生免疫保护作用,更加经济有效。笔者对黏膜疫苗的研究现状与进展进行综述。方法检索CNKI,Pubmed数据库文章中以&qu... 目的黏膜系统是引起传染性疾病的病原微生物进入人体的主要渠道,而通过黏膜途径免疫的疫苗能够在病原体入侵的最初阶段产生免疫保护作用,更加经济有效。笔者对黏膜疫苗的研究现状与进展进行综述。方法检索CNKI,Pubmed数据库文章中以"黏膜疫苗,黏膜佐剂,黏膜微粒递送载体"或"mucosal vaccine,mucosal adjuvant,mucosal particulate delivery vectors"为检索词进行检索。结果灭活或减毒黏膜疫苗以及一些新型疫苗如亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、病毒小体疫苗等已有批准上市的疫苗品种,相关研究工作还在不断进行。目前许多研究都在探寻黏膜疫苗中安全有效的佐剂和疫苗递送载体,它们能够以不同作用机制加强黏膜疫苗诱发产生的免疫保护作用。微粒递送载体的组成、大小、表面化学性质及其连接的功能配基对它作为递送载体都有着至关重要的影响,几种微粒递送载体目前取得了很大的研究进展。结论虽然黏膜疫苗的研究与开发还面临着众多的困难与挑战,黏膜疫苗相关研究工作的进展,将给黏膜疫苗的开发带来新的发展机遇。 展开更多
关键词 黏膜疫苗 减毒疫苗 灭活疫苗 亚单位疫苗 病毒样颗粒 病毒小体 黏膜佐剂 微粒递送载体
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人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展 被引量:1
5
作者 周红军(综述) 王金伟(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期379-384,共6页
人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)是导致婴幼儿及老年人下呼吸道感染的主要病原体之一。hRSV基因组全长为15 222 bp,包含10个基因,共编码11种蛋白质(9种结构蛋白,2种非结构蛋白),不同蛋白在hRSV致病过程中发... 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)是导致婴幼儿及老年人下呼吸道感染的主要病原体之一。hRSV基因组全长为15 222 bp,包含10个基因,共编码11种蛋白质(9种结构蛋白,2种非结构蛋白),不同蛋白在hRSV致病过程中发挥不同作用。随着对hRSV生物学和结构特性的深入研究,已研发出多种类型的hRSV疫苗,如hRSV减毒活疫苗hRSV △NS2/△1313/I1314L已进入Ⅱ期临床试验,hRSV亚单位蛋白疫苗Pre-F-GCN4t已进入Ⅲ期临床试验等。本文就hRSV的生物学特性及研制进展较快的hRSV疫苗类型作一综述,以期为我国hRSV疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 减毒活疫苗 亚单位疫苗 载体疫苗
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表达非洲猪瘟病毒p72蛋白重组猪痘病毒的构建及鉴定
6
作者 张梦雨 叶昱 +11 位作者 何后军 黄玉婷 江宁 邓佳丽 曾紫怡 应若嫣 余巧 唐玉新 宋德平 丁珍 樊惠英 黄冬艳 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期419-426,共8页
【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒p... 【目的】旨在构建能高效表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,为探索猪痘病毒(SPV)作为非洲猪瘟新型活疫苗载体的可行性。【方法】本研究优化合成非洲猪瘟病毒B646L基因,克隆至重组猪痘病毒通用转移载体pUSG11/P28,构建重组转移质粒pUSG11/P28-B646L,经脂质体介导转染预先感染猪痘病毒的PK15细胞,出现病变后通过绿色荧光标记筛选和纯化重组病毒。拯救的重组病毒经PCR和基因测序鉴定后,通过Western blotting和间接免疫荧光试验检测p72蛋白的表达情况,并测定重组病毒的增殖特性和遗传稳定性。【结果】重组转移质粒pUSG11/P28-B646L在PK15细胞内和SPV成功进行了同源重组,纯化得到的重组病毒含有B646L基因,且基因序列正确。Western blotting和间接免疫荧光试验结果表明,重组病毒rSPV-B646L在PK15细胞中能表达非洲猪瘟病毒p72蛋白,表达的蛋白大小正确,且能与p72单克隆抗体发生特异性反应。一步生长曲线显示,重组病毒与亲本病毒的增殖特性没有明显差异。重组病毒在PK15细胞上连续传15代后,插入的外源基因没有发生突变或缺失。【结论】研究以SPV为载体,成功构建了正确表达非洲猪瘟病毒p72蛋白的重组猪痘病毒,重组病毒在PK15细胞中有良好的遗传稳定性,B646L基因的插入没有影响重组病毒在PK15细胞上的增殖能力,表达的p72蛋白具有反应原性。研究成果为非洲猪瘟多基因重组猪痘病毒载体疫苗的研发提供依据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 重组猪痘病毒 活疫苗载体 p72蛋白
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表达ApxIA的血清7型胸膜肺炎放线杆菌弱毒菌株的构建及特性分析 被引量:4
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作者 刘金林 陈砚 +2 位作者 胡琳琳 贝为成 陈焕春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期305-310,共6页
猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染疾病,严重阻碍着全球养猪业的发展,疫苗接种是控制该病的有效措施。为提高胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的免疫效力,以及探索胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗作为呼吸系统病原疫苗载... 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种高度接触传染疾病,严重阻碍着全球养猪业的发展,疫苗接种是控制该病的有效措施。为提高胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗的免疫效力,以及探索胸膜肺炎放线杆菌弱毒疫苗作为呼吸系统病原疫苗载体的可行性,通过穿梭质粒pJFF224-XN将完整的apxIA基因导入apxIIC基因缺失突变株HB04C-中,构建了含有apxIA和apxIIA基因的弱毒疫苗菌株HB04C2(apxIIC-/apxIIA+/apxIA+)。通过对HB04C2的生物学特性分析发现,穿梭质粒可稳定传代,并表达ApxIA,其生长特性未受穿梭质粒的影响。将HB04C2以气管接种方式免疫仔猪,可产生针对ApxIA和ApxIIA的抗体。二免后2周以高致病性的血清1型胸膜肺炎放线杆菌攻毒,该弱毒疫苗可提供良好的免疫保护效果。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 弱毒疫苗 多价疫苗 载体
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基于融合前F蛋白呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展 被引量:1
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作者 孙宇宸(综述) 傅生芳 朱传凤(审校) 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第6期58-64,共7页
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染(lower respiratory tract infection,LRTI)的主要原因,尚无可用于预防的疫苗。目前,WHO已将研发RSV疫苗确定为其疫苗研发和生物标准化倡议的优先事... 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿和老年人下呼吸道感染(lower respiratory tract infection,LRTI)的主要原因,尚无可用于预防的疫苗。目前,WHO已将研发RSV疫苗确定为其疫苗研发和生物标准化倡议的优先事项之一。RSV融合蛋白(fusion protein,F)是病毒表面的主要保护性抗原,主要介导病毒包膜和靶细胞膜的融合。在感染过程中,F蛋白从亚稳态的融合前F蛋白(prefusion fusion protein,PreF)转变为稳定的融合后F蛋白(postfusion fusion protein,PostF)。近年来,研究发现PreF在体内诱导产生RSV中和抗体能力更强,适合作为免疫原用于RSV疫苗的研发。现就RSV PreF的结构、稳定策略及其作为疫苗候选抗原的应用作一概述。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 融合蛋白 融合前构象 减毒活疫苗 亚单位疫苗 病毒样颗粒疫苗 纳米颗粒疫苗 病毒载体疫苗
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鼠伤寒沙门菌SL1344株ΔcrpΔasd缺失株的构建及生物学特性初步研究 被引量:3
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作者 田芳华 程相朝 +6 位作者 张春杰 李银聚 李静 张明亮 李小康 李正 赵战勤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1700-1706,共7页
构建鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以χ7213(pREΔasd)为供体菌,SL1344Δcrp为受体菌进行结合转移,通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选SL1344的ΔcrpΔasd双缺失株。该缺... 构建鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd双基因缺失突变株,并对其生物学特性进行初步研究。首先以χ7213(pREΔasd)为供体菌,SL1344Δcrp为受体菌进行结合转移,通过自杀性质粒介导的等位交换技术两步法筛选SL1344的ΔcrpΔasd双缺失株。该缺失株在有外源DAP的存在下能够正常生长,且能稳定遗传缺失的asd基因;其血清型与亲本株SL1344Δcrp及强毒株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相同,但与强毒株相比变化较明显,且生长速度明显减慢;雏鸡毒力试验结果表明其毒力较SL1344降低约105倍。鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd缺失株构建成功,为进一步开发以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 asd平衡致死系统 重组自杀性质粒 活疫苗载体
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敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建 被引量:3
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作者 饶凤琴 程玉梅 +4 位作者 吴昌学 王义 崔古贞 齐晓岚 洪伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第10期1128-1133,共6页
目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLo... 目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株。方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换。结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50%;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换。结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株。 展开更多
关键词 艰难梭菌 CRISPR-Cpf1系统 PaLoc毒力岛 基因敲除 活菌疫苗 毒性基因 梭菌感染 载体 质粒
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减毒鼠伤寒沙门菌三型分泌表达系统的构建及其特性 被引量:3
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作者 郁川 翟崇凯 +6 位作者 廖成水 余祖华 何雷 贾艳艳 李静 张春杰 程相朝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1664-1675,共12页
为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌Δ... 为开发新型重组减毒鼠伤寒沙门菌口服活疫苗载体,本研究以pYA3493质粒为基础,用鼠伤寒沙门菌sopE_(Nt100)基因及其启动子替代原有的P_(trc)启动子,构建沙门菌三型分泌表达载体pYA-sopE_(Nt100);再将质粒pYA-sopE_(Nt100)电转入沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,构建减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因egfp克隆入sop E基因下游,构建重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100)-egfp),感染Vero细胞,用Western blotting分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株Δcrp SL1344及野生株SL1344保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢;重组菌株ΔcrpΔasd SL1344(p YA-sop E_(Nt100))的LD50较野生株SL1344降低了7.0×104倍;Western blotting结果发现,重组菌培养上清中能检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da);重组菌株感染Vero细胞后,可以同时检测到Sop E_(Nt100)-egfp融合蛋白(37 k Da)和EGFP蛋白(27 k Da)。以上结果证实,本研究成功构建了新型减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd(p YA-sop E_(Nt100))三型分泌表达系统,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。 展开更多
关键词 减毒鼠伤寒沙门菌 三型分泌系统 SOP E基因 平衡致死系统 活疫苗载体
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人呼吸道合胞病毒疫苗的研究进展 被引量:1
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作者 王剑 马超 李雄雄 《微生物学免疫学进展》 2020年第5期69-75,共7页
人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的主要病原体,给世界各国公共卫生安全造成了极大的威胁,迄今尚无批准上市的HRSV疫苗。福尔马林灭活HRSV疫苗(formalin-inactivated HRSV va... 人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)是导致婴幼儿和老年人下呼吸道感染的主要病原体,给世界各国公共卫生安全造成了极大的威胁,迄今尚无批准上市的HRSV疫苗。福尔马林灭活HRSV疫苗(formalin-inactivated HRSV vaccine,FI-HRSV)临床试验的失败表明HRSV疫苗研发存在多重难以克服的技术困难,此后该疫苗的研发进展极其缓慢。近年来,HRSV蛋白结构的深入解析为HRSV疫苗研发提供了新靶点,使HRSV疫苗的研发策略迅速增多,许多HRSV疫苗相继进入关键性研究阶段。目前,全球有19种HRSV疫苗正在开展临床试验,还有许多不同类型的候选疫苗也正在进行临床前的测试。现从减毒活疫苗、载体疫苗、亚单位疫苗和颗粒疫苗4个方面对HRSV疫苗的研发情况作一概述。 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 减毒活疫苗 载体疫苗 亚单位疫苗 颗粒疫苗
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减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔsseK1Δasd宿主-载体平衡致死系统的构建及其生物学特性研究 被引量:2
13
作者 杨亚东 丁轲 +3 位作者 张春杰 程相朝 贾艳艳 何雷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1521-1526,共6页
目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344Δsse K1为亲本株,运用二步法筛选... 目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体。方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344Δsse K1为亲本株,运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344Δsse K1Δasd。将携带有asd基因的无抗性p YA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344Δsse K1Δasd,构建SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)重组菌株。结果:PCR及测序结果表明SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)构建成功。进一步研究表明重组菌株SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相同,且能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344Δsse K1相比均无明显差异。小鼠毒力试验表明,SL1344Δsse K1Δasd(p YA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108CFU,毒力较强毒株SL1344约下降至0.048%;免疫保护效力试验显示,运用鼠伤寒沙门菌野生毒株对免疫后第17天的小鼠攻毒有62.5%的保护率,与亲本株SL1344Δsse K1基本一致。结论:以上结果表明,鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株宿主-载体平衡致死系统构建成功,且遗传稳定,毒力明显降低,具有较好的免疫原性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 自杀性质粒 宿主-载体平衡致死系统 活疫苗载体
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减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaSL1344株asd平衡致死系统的构建及其特性 被引量:2
14
作者 胡宁 郁川 +4 位作者 程相朝 张春杰 李银聚 赵战勤 尚珂 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1758-1763,1769,共7页
为构建能稳定携带外源基因的减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344,本研究在减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaSL1344基础上,以χ7213(pREΔasd)为供体菌,ΔcrpΔcyaSL1344为受体菌,利用自杀性质粒介导的等位交换技术成功筛选出缺失编码天... 为构建能稳定携带外源基因的减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344,本研究在减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaSL1344基础上,以χ7213(pREΔasd)为供体菌,ΔcrpΔcyaSL1344为受体菌,利用自杀性质粒介导的等位交换技术成功筛选出缺失编码天冬氨酸β-半乳糖脱氢酶基因(aspartic semialdehyde dehydrogenase,asd)的ΔcrpΔcyaΔasdSL1344菌株,进一步对其生物学特性进行初步研究。结果显示,其血清型和亲本株ΔcrpΔcyaSL1344及强毒株SL1344相同且该缺失菌株能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344相比有很大差异,与亲本株ΔcrpΔcyaSL1344基本一致,ΔcrpΔcyaΔasdSL1344失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力,其生长速度比强毒株更加缓慢。1日龄雏鸡攻毒试验表明ΔcrpΔcyaΔasdSL1344互补携带asd基因的pYA3493质粒后,ΔcrpΔcyaΔasdSL1344(pYA3493)毒力较强毒株SL1344降低了至少105倍,与亲本株ΔcrpΔcyaSL1344相比毒力仅相差10倍。结果表明,减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344菌株构建成功,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服多价疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌SL1344株 asd平衡致死系统 活疫苗载体
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李斯特菌载体结核疫苗候选株基因重组构建及蛋白表达验证 被引量:2
15
作者 任晨艳 刘思静 +3 位作者 蒲启康 蒋明娟 周梦莹 汪川 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期819-824,共6页
目的基因重组构建以单增李斯特菌、绵羊李斯特菌为载体的新型结核疫苗候选株,并进行蛋白表达验证,为结核疫苗研究和结核防控提供新思路和新方法。方法以体外基因连接、质粒转化等技术,将本实验室已有的分别编码结核抗原Ag85C、ESAT-6蛋... 目的基因重组构建以单增李斯特菌、绵羊李斯特菌为载体的新型结核疫苗候选株,并进行蛋白表达验证,为结核疫苗研究和结核防控提供新思路和新方法。方法以体外基因连接、质粒转化等技术,将本实验室已有的分别编码结核抗原Ag85C、ESAT-6蛋白的两种基因盒,插入携带单增李斯特菌、绵羊李斯特菌同源序列的打靶质粒中。将打靶质粒电转化单增李斯特菌、绵羊李斯特菌,在42℃和30℃连续传代,利用同源重组杂交原理和基因打靶技术,将打靶质粒携带的两种编码结核抗原的抗原基因盒,分别整合至致病基因(actA和plcB)被敲除的单增李斯特菌、绵羊李斯特菌减毒株及未经减毒的绵羊李斯特菌基因组中。重组菌经蓝白斑、抗生素抗性及PCR筛选,再经Western blot检测其菌体蛋白及分泌蛋白的表达情况。结果构建了携带抗原基因盒的重组菌株5株,其重组基因序列PCR验证结果均符合预期,且测序验证成功;重组菌不携带红霉素抗性基因,表型特征符合预期;其中,重组菌Li-Rv0129c、Li-ΔactAplcB-Rv0129c按预期表达了结核杆菌Ag85C抗原蛋白,Li-ΔactAplcBRv3875按预期表达了结核杆菌ESAT-6抗原蛋白,Lm重组菌未表达相应结核抗原蛋白。结论成功构建并筛选得到3株以绵羊李斯特菌为载体的、携带结核杆菌Rv0129c(编码Ag85C)抗原基因盒或Rv3875(编码ESAT-6)抗原基因盒,且表达相应抗原蛋白的新型结核疫苗候选株。 展开更多
关键词 李斯特菌 结核疫苗 活菌载体
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Analysis for Pathogenicity and Development of Transgenic Eimeria tenella Expressing both Yellow Fluorescent Protein and TgDHFR-TS Genes
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作者 YAN Wen-chao WANG Tian-qi +4 位作者 SUO Xun HAN Li-fang DING Ke DONG Fa-ming ZHANG Long-xian 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期93-96,共4页
In order to determine the effect of foreign genes on a transgenic parasite,the pathogenicity and development in chickens of transgenic E.tenella strain TE1,which expresses yellow fluorescent protein (YFP) and dihydrof... In order to determine the effect of foreign genes on a transgenic parasite,the pathogenicity and development in chickens of transgenic E.tenella strain TE1,which expresses yellow fluorescent protein (YFP) and dihydrofolate reductase thymidylate synthase derived from Toxoplasma gondii(TgDHFR-TS), were compared with that of the parental strain BJ.Results indicated that the fecundity of the transgenic parasite(TE1) was reduced at least 4 times relative to that of the BJ strain.Low dosage of the TE1 strain induced less pathogenesis in chickens than did the BJ strain,but chickens inoculated with a higher dosage of TE1 oocysts displayed severe pathogenicity and mortality as did the BJ strain.In addition,trophozoites, the first generation and the second generation meronts and merozoites,microgamonts and macrogamonts of the transgenic parasite TE1 were seen by fluorescence microscopy.More interestingly,not all four sporonts in the sporulating transgenic oocysts express YFP.These findings suggest that the expression of YFP and TgDHFR-TS genes to some extent reduced pathogenicity and reproductive potential of transgenic E.tenella.Recombination between homologous or non-homologous chromosomes occurred during zygotic meiosis in E.tenella strain TE1. 展开更多
关键词 Eimeria tenella TRANSFECTION FECUNDITY PATHOGENICITY live vaccine vector
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新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统的构建及其特性 被引量:1
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作者 翟崇凯 郁川 +6 位作者 程相朝 余祖华 何雷 廖成水 张春杰 李银聚 田文静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1829-1835,共7页
为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pcD-asd;再将互补质粒pcD-asd电转入沙门菌ΔcrpΔasdC79-13,构建ΔcrpΔasd... 为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不含抗性基因的真核互补质粒pcD-asd;再将互补质粒pcD-asd电转入沙门菌ΔcrpΔasdC79-13,构建ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因EGFP克隆入pcD-asd,构建重组菌株ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd-EGFP),感染鸡胚成纤维(CEF)细胞,Western blot分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株ΔcrpΔasdC79-13及野生株C79-13保持一致;其生化特性与亲本株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢,对氨苄抗生素敏感;重组菌株ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)的LD50较野生株C79-13降低了3.4×104倍;Western blot结果发现,重组菌株感染CEF细胞后,可表达大小约为27 000EGFP蛋白。以上结果证实,本研究成功构建了新型重组减毒鸡白痢沙门菌ΔcrpΔasdC79-13(pcD-asd)株,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 无抗性基因 平衡致死系统 活疫苗载体
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减毒鸡白痢沙门菌△aroA株的构建与致病性分析 被引量:1
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作者 程伊洛 邵华斌 +2 位作者 罗青平 刘国平 张腾飞 《湖北农业科学》 2016年第23期6195-6199,共5页
以鸡白痢沙门氏菌c79-3强毒株为亲本,通过λ-red同源重组系统构建鸡白痢沙门菌aroA基因缺失株△aroA,并进行了测序验证和毒力试验。结果表明,aroA基因缺失株的生长速度较亲本株缓慢,且该缺失株具有良好的遗传稳定性;相比野生菌株,aroA... 以鸡白痢沙门氏菌c79-3强毒株为亲本,通过λ-red同源重组系统构建鸡白痢沙门菌aroA基因缺失株△aroA,并进行了测序验证和毒力试验。结果表明,aroA基因缺失株的生长速度较亲本株缓慢,且该缺失株具有良好的遗传稳定性;相比野生菌株,aroA基因缺失株的毒力发生了下降,雏鸡攻毒死亡率较亲本株低。本研究获得的减毒鸡白痢沙门氏菌aroA基因缺失株△aroA,为进一步研究鸡白痢沙门氏菌aroA基因的功能和后续减毒活疫苗开发奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门氏菌 λ-red同源重组 aroA基因 生物学特性 活疫苗
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活载体疫苗的研究进展 被引量:8
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作者 孟庆峰 徐展 王伟利 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期28-31,共4页
随着现代科学的发展与生物技术的进步,基因工程疫苗的应用日趋广泛。活载体疫苗是基因工程疫苗中最具发展意义的疫苗之一,一般具有免疫效果好、效率高、易控制、成本低、相对稳定、诱导位点专一、免疫方式简单等诸多优点。
关键词 活载体疫苗 病毒活载体疫苗 细菌活载体疫苗
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猪瘟病毒检测和猪瘟疫苗研究进展 被引量:8
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作者 张璞 陈建凯 +5 位作者 赖月辉 林德锐 李复坤 周晓敏 侯高伟 齐冬梅 《广东农业科学》 CAS 2022年第4期106-115,共10页
猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的高度传染性、致死性疾病,是公认对养猪业危害最严重的病毒性疾病之一。自1810年首次报告CSF疫情至今,CSF给世界养猪业造成了重大经济损失,持续威... 猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的高度传染性、致死性疾病,是公认对养猪业危害最严重的病毒性疾病之一。自1810年首次报告CSF疫情至今,CSF给世界养猪业造成了重大经济损失,持续威胁着全球猪肉生产和人类的食品安全。世界动物卫生组织将CSF列为最重要的法定报告传染病之一,在我国被列为一类传染病。现阶段CSF临床表现形式复杂多变,有死亡率很高的急性型或死亡率变化不定的亚急性型、慢性型、隐性型及持续感染型等,且常与多种疫病混合感染。目前,疫苗免疫接种仍然是全球大多数国家特别是发展中国家防控CSF的主要手段,CSFV抗原/抗体试验室诊断和临床检测技术的开发和应用对于CSF防控也起到非常重要的作用。随着生物技术的快速发展,更多的CSFV抗原/抗体检测技术和新型疫苗被开发和批准使用。综述CSFV抗原和抗体检测技术、CSFV减毒活疫苗和亚单位疫苗、载体疫苗等新型疫苗开发进展等,以期为更好地防控CSF提供参考。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 抗原检测 抗体检测 猪瘟活疫苗 标记疫苗 亚单位疫苗 载体疫苗
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