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miR-146b-3p通过靶向结合LCN1抑制肺鳞癌生物学行为
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作者 丁晓霞 刘亚群 +2 位作者 于小纬 杨楠 张悦琪 《局解手术学杂志》 2023年第7期578-586,共9页
目的探讨miR-146b-3p通过靶向结合脂质运载蛋白1(LCN1)抑制肺鳞癌生物学行为的效果。方法构建稳定过表达miR-146b-3p和稳定敲低LCN1的NCI-H2170和NCI-H226细胞系,CCK-8法和克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况... 目的探讨miR-146b-3p通过靶向结合脂质运载蛋白1(LCN1)抑制肺鳞癌生物学行为的效果。方法构建稳定过表达miR-146b-3p和稳定敲低LCN1的NCI-H2170和NCI-H226细胞系,CCK-8法和克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。生物信息学分析miR-146b-3p和LCN1与肺鳞癌临床病理特征的关系,并预测两者之间的靶向关系。双荧光素酶报告实验验证miR-146b-3p和LCN1的靶向关系。RT-PCR检测miR-146b-3p在肺鳞癌细胞中的表达。裸鼠成瘤实验检测肿瘤体质量、体积和肺鳞癌组织中miR-146b-3p的表达。Western blot检测细胞蛋白表达。结果miR-146b-3p在肺鳞癌组织中低表达,肺鳞癌细胞miR-146b-3p过表达后,细胞增殖能力降低,克隆数减少,细胞周期受到阻滞,细胞凋亡率增加,裸鼠移植瘤生长受到抑制,BCL2、CCNB1和CDK2蛋白减少,BAX蛋白增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。LCN1在肺鳞癌组织中高表达,敲低LCN1表达可抑制肺鳞癌细胞增殖,影响细胞周期,促进细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析显示,LCN1是miR-146b-3p的靶基因;双荧光素酶报告实验显示miR-146b-3p mimic与LCN1-WT共转染使荧光素酶活性降低(P<0.05)。肺鳞癌细胞共转染miR-146b-3p和LCN1后,可以逆转miR-146b-3p抑制细胞增殖和克隆、促凋亡的作用。结论miR-146b-3p可能是通过下调LCN1表达抑制肺鳞癌细胞增殖,影响细胞周期,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 miR-146b-3p 肺鳞癌 增殖 脂质运载蛋白1
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马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中Ngal和Kim-1的变化及其意义 被引量：20
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作者 孙骅 刘志红 +3 位作者 王生余 秦卫松 陈朝红 黎磊石 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 2007年第4期340-344,共5页
目的:研究马兜铃酸(AA)损伤的肾小管上皮细胞中急性肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)、肾损伤因子(Kim-1)的表达、分泌特点,并对其在AA肾毒性损伤中的意义进行探讨。方法:采用20μg/mlAA作用于体外培养人近端肾小管... 目的:研究马兜铃酸(AA)损伤的肾小管上皮细胞中急性肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)、肾损伤因子(Kim-1)的表达、分泌特点,并对其在AA肾毒性损伤中的意义进行探讨。方法:采用20μg/mlAA作用于体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK2细胞),通过RT-PCR和免疫荧光法分别检测Ngal、Kim-1基因和蛋白的表达,ELISA法检测培养上清中Ngal、Kim-1的分泌,底物显色法监测培养上清中N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(NAG)的释放,流式细胞术观察细胞周期改变和凋亡情况。结果:AA处理HK2细胞6～12h内,Ngal基因呈一过性表达增加,而Kim-1基因在处理24～48h内持续高水平表达。培养上清中Ngal、Kim-1和NAG的分泌呈不同变化规律:给药12h出现Ngal的一过性分泌高峰;Kim-1的分泌高峰出现在24h并持续48h;NAG的分泌在12h后开始增加,并持续增加至48h。诱导Ngal、Kim-1表达和诱导细胞凋亡的AA有效剂量不同。诱导Ngal和Kim-1显著分泌的AA剂量仅引起少量细胞凋亡;而引起大量细胞凋亡的AA剂量不能诱导Ngal和Kim-1分泌。结论:AA诱导的肾小管上皮细胞损伤伴有Ngal和Kim-1的异常表达和分泌。Ngal是AA损伤早期一过性表达和分泌的分子,而Kim-1和NAG则在损伤过程中呈持续分泌,因此对于临床监测AA所致肾小管损伤具有重要意义。Ngal和Kim-1在AA所致肾小管上皮细胞损伤中的异常表达,为进一步阐明AA肾毒性机制以及临床上早期发现马兜铃酸肾病提供了新的指标。 展开更多
关键词 马兜铃酸 肾小管上皮细胞 凋亡 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 肾损伤因子
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