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抗辐射菌lexA基因的克隆及在大肠杆菌中表达
被引量：
1
1
作者
王明锁
杜泽吉
+1 位作者
孔向蓉
苏燎原
《辐射研究与辐射工艺学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000年第3期193-197,共5页
研究了旨在克隆抗辐射菌 Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒｕｄｉｏｄｕｒａｎｓ的 ｌｅｘＡ基因并构建其表达载体，以便进一步研究ｌｅｘＡ基因的功能及其在辐射抗性中的作用。主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基因组 ＤＮＡ，分离出 ｌ...
研究了旨在克隆抗辐射菌 Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒｕｄｉｏｄｕｒａｎｓ的 ｌｅｘＡ基因并构建其表达载体，以便进一步研究ｌｅｘＡ基因的功能及其在辐射抗性中的作用。主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基因组 ＤＮＡ，分离出 ｌｅｘＡ基因并测定其序列，克隆于质粒载体 ＰＵＣ１９，用电击穿孔法将重组的质粒导入大肠杆菌 ＪＭ１０９， ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测基因的表达。用定点突变技术，改变 ｌｅｘＡ基因核糖体结合位点（ＲＢＳ），以增强 ｌｅｘＡ基因的表达。结果表明， ｌｅｘＡ基因位于基因组 ＤＮＡ的 ＢｌｎＩ－ＡｓｃＩ片断中，由 ６３０个碱基对（ｂＰ）组成， 编码 ２１０个氨基酸（ａａ），理论上推定，分子量为 ２２．５ｋＤ，等电点为 ６．４。用 ｐＵＣ１９构建的 ｌｅｘＡ基因表达载体能在大肠杆菌 ＪＭ１０９中表达；但表达效率低，改变ｌｅｘＡ的核糖体结合位点ＲＢＳ可提高该基因表达水平；使进一步分离纯化 ｌｅｘＡ蛋白质以及深入研究该基因的作用成为可能。
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关键词
抗辐射菌
lexa
基因
基因
克隆
基因
表达
大肠杆菌
下载PDF
职称材料
抗辐射菌lexA基因对受γ射线照射和MMC作用的大肠杆菌敏感性的影响
2
作者
孙翠凤
刘芬菊
+2 位作者
陈剑
孔向蓉
宁萍
《辐射研究与辐射工艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期276-279,共4页
研究抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中的表达对其γ射线辐射抗性和丝裂霉素(MMC)敏感性的影响。应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA基因的重组质粒PZA172转入大肠杆菌JM109,其启动子为lacZ,用异丙基-硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,(十...
研究抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中的表达对其γ射线辐射抗性和丝裂霉素(MMC)敏感性的影响。应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA基因的重组质粒PZA172转入大肠杆菌JM109,其启动子为lacZ,用异丙基-硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,(十二烷基磺酸纳)聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳检测LexA蛋白的表达。经受不同剂量γ射线照射和不同浓度的MMC作用,平板菌落计数,绘制存活曲线。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中,经IPTG诱导能稳定地表达,lexA基因的显著表达降低了大肠杆菌经γ射线照射和MMC作用后的存活率。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌中的显著表达降低了大肠杆菌对γ射线和MMC的抗性,其作用机理还有待于进一步的研究。
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关键词
抗辐射菌
Γ射线照射
辐射抗性
lexa
基因
大肠杆菌
丝裂霉素
凝胶电泳检测
下载PDF
职称材料
题名
抗辐射菌lexA基因的克隆及在大肠杆菌中表达
被引量：
1
1
作者
王明锁
杜泽吉
孔向蓉
苏燎原
机构
苏州医学院放射医学系
出处
《辐射研究与辐射工艺学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000年第3期193-197,共5页
基金
卫生部优秀青年科技人才专项科研基金!(1999年度批准)
文摘
研究了旨在克隆抗辐射菌 Ｄｅｉｎｏｃｏｃｃｕｓ ｒｕｄｉｏｄｕｒａｎｓ的 ｌｅｘＡ基因并构建其表达载体，以便进一步研究ｌｅｘＡ基因的功能及其在辐射抗性中的作用。主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基因组 ＤＮＡ，分离出 ｌｅｘＡ基因并测定其序列，克隆于质粒载体 ＰＵＣ１９，用电击穿孔法将重组的质粒导入大肠杆菌 ＪＭ１０９， ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测基因的表达。用定点突变技术，改变 ｌｅｘＡ基因核糖体结合位点（ＲＢＳ），以增强 ｌｅｘＡ基因的表达。结果表明， ｌｅｘＡ基因位于基因组 ＤＮＡ的 ＢｌｎＩ－ＡｓｃＩ片断中，由 ６３０个碱基对（ｂＰ）组成， 编码 ２１０个氨基酸（ａａ），理论上推定，分子量为 ２２．５ｋＤ，等电点为 ６．４。用 ｐＵＣ１９构建的 ｌｅｘＡ基因表达载体能在大肠杆菌 ＪＭ１０９中表达；但表达效率低，改变ｌｅｘＡ的核糖体结合位点ＲＢＳ可提高该基因表达水平；使进一步分离纯化 ｌｅｘＡ蛋白质以及深入研究该基因的作用成为可能。
关键词
抗辐射菌
lexa
基因
基因
克隆
基因
表达
大肠杆菌
Keywords
Deinococcus rodiodurans,
lexa
gene, Gene cloning, Gene expression
分类号
R811.5 [医药卫生—放射医学]
下载PDF
职称材料
题名
抗辐射菌lexA基因对受γ射线照射和MMC作用的大肠杆菌敏感性的影响
2
作者
孙翠凤
刘芬菊
陈剑
孔向蓉
宁萍
机构
苏州大学放射医学与公共卫生学院
出处
《辐射研究与辐射工艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第4期276-279,共4页
基金
国家自然科学基金(39900039)资助项目
放射医学重点学科资助
文摘
研究抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中的表达对其γ射线辐射抗性和丝裂霉素(MMC)敏感性的影响。应用电穿孔技术将携带有抗辐射菌lexA基因的重组质粒PZA172转入大肠杆菌JM109,其启动子为lacZ,用异丙基-硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导,(十二烷基磺酸纳)聚炳烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)凝胶电泳检测LexA蛋白的表达。经受不同剂量γ射线照射和不同浓度的MMC作用,平板菌落计数,绘制存活曲线。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌细胞中,经IPTG诱导能稳定地表达,lexA基因的显著表达降低了大肠杆菌经γ射线照射和MMC作用后的存活率。抗辐射菌lexA基因在大肠杆菌中的显著表达降低了大肠杆菌对γ射线和MMC的抗性,其作用机理还有待于进一步的研究。
关键词
抗辐射菌
Γ射线照射
辐射抗性
lexa
基因
大肠杆菌
丝裂霉素
凝胶电泳检测
Keywords
Deinococcus radiodurans, Radioresistance,
lexa
gene, Escherichia coli, MMC
分类号
R811.5 [医药卫生—放射医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗辐射菌lexA基因的克隆及在大肠杆菌中表达
王明锁
杜泽吉
孔向蓉
苏燎原
《辐射研究与辐射工艺学报》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2000
1
下载PDF
职称材料
2
抗辐射菌lexA基因对受γ射线照射和MMC作用的大肠杆菌敏感性的影响
孙翠凤
刘芬菊
陈剑
孔向蓉
宁萍
《辐射研究与辐射工艺学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
0
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职称材料
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