Let-7a-3p靶向IGF1R抑制人肺癌A549细胞中肿瘤干细胞的活性 被引量：4

1

作者 吴源周 王秋平 +2 位作者 肖丹 朱亚如 方舜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1035-1041,共7页

目的:研究let-7a-3p对人肺癌细胞A549的肿瘤干细胞活性的影响及其相关机制。方法:RT-qPCR法比较肺癌细胞系A549、NCI-H1299、SPC-A1、H1650和HCC-827及人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B中let-7a-3p的水平。A549肺癌细胞株分别转染let-7a-3... 目的:研究let-7a-3p对人肺癌细胞A549的肿瘤干细胞活性的影响及其相关机制。方法:RT-qPCR法比较肺癌细胞系A549、NCI-H1299、SPC-A1、H1650和HCC-827及人正常支气管上皮细胞系BEAS-2B中let-7a-3p的水平。A549肺癌细胞株分别转染let-7a-3p模拟物(let-7a-3p mimics)和其阴性对照(negative control mimic),分别作为let-7a-3p组和negative control组,并设立未转染对照(non-transfected)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞let-7a-3p的水平。瘤球形成实验检测3组肿瘤干细胞瘤球形成能力。流式细胞术检测肿瘤干细胞比例。Western blot法检测3组细胞NANOG、OCT4和胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)的蛋白表达水平。运用生物信息学方法预测let-7a-3p的靶基因,双萤光素酶实验检测let-7a-3p与IGF1R的关系。Western blot法检测IGF1R过表达对let-7a-3p抑制肿瘤干细胞的拮抗作用。建立皮下移植瘤模型观察let-7a-3p的体内作用。结果:肺癌细胞系中let-7a-3p的表达水平均明显低于正常支气管上皮细胞系(P<0.01)。let-7a-3p组A549细胞中let-7a-3p的表达水平较non-transfected组明显上调(P<0.01)。瘤球形成实验发现,let-7a-3p组的瘤球数量明显低于non-transfected组。流式细胞术检测发现,let-7a-3p组的CD133^+细胞比例明显低于non-transfected组(P<0.01)。Western blot实验显示,let-7a-3p组的NANOG蛋白和OCT4蛋白表达量比non-transfected组明显降低(P<0.01)。生物信息学预测结果表明,let-7a-3p与IGF1R的3’-UTR区部分互补,IGF1R可能是let-7a-3p的靶基因。双萤光素酶实验证实,IGF1R为let-7a-3p的直接下游靶基因。Let-7a-3p组的IGF1R蛋白表达量明显降低(P<0.01)。Let-7a-3p组的皮下移植瘤明显小于non-transfected组。结论:let-7a-3p可能通过降低下游靶基因IGF1R的水平影响肺癌干细胞相关蛋白表达,抑制肺癌干细胞潜能。 展开更多

关键词 肺癌 let-7a-3p 胰岛素样生长因子1受体 肿瘤干细胞

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Let-7a-3p通过靶向AMPK对肺癌细胞系A549能量代谢及凋亡的影响 被引量：2

2

作者 张晶 舒琦瑾 项宗汉 《浙江临床医学》 2021年第5期617-620,共4页

目的探讨转染Let-7a-3p对肺癌细胞能量代谢及凋亡影响及机制。方法根据肺癌A549细胞处理不同分为A549组、Let-7a-3p组(转染Let-7a-3p mimics)、阴性对照组(negative control mimic,NC)和未转染对照(non transfected,NT)组。采用RT-qPCR... 目的探讨转染Let-7a-3p对肺癌细胞能量代谢及凋亡影响及机制。方法根据肺癌A549细胞处理不同分为A549组、Let-7a-3p组(转染Let-7a-3p mimics)、阴性对照组(negative control mimic,NC)和未转染对照(non transfected,NT)组。采用RT-qPCR法检测各组细胞Let-7a-3p的水平,CCK8法检测细胞活力,海马细胞能量代谢实时测定仪XF分析测定氧耗率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR),流失细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Let--7a-3p、Bcl-2、Caspase--3、Ras及AMPK蛋白的表达。结果Let-7a-3p组Let-7a-3p表达水平明显上调(P<0.01),而NC组Let-7a-3p表达水平与A549组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8法检测结果显示,与A549及NC组比较,Let-7a-3p组活细胞相对数明显减少(P<0.01)。能量代谢实时测定仪XF分析结果显示,与A549、NC组比较,转染Let-7a-3p后A549细胞的氧耗率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)减少(P<0.01)。流失细胞术检测结果显示,与A549组比较,Let-7a-3p组细胞凋亡率增多(P<0.01)。Western blot检测结果显示,过表达Let-7a-3p可以使A549细胞中Caspase-3与AMPK蛋白上调(P<0.01),而Bcl-2与Ras蛋白下调(P<0.01)。结论Let-7a-3p模拟物可以抑制肺癌细胞A549的活性和能量代谢并促进其凋亡。Let-7a-3p模拟物作用于癌细胞的机制可能是通过上调AMPK及Caspase-3蛋白水平,下调Bcl-2与Ras蛋白水平,从而触发能量代谢和凋亡通路,降低MMP,从而抑制ATP的产生。 展开更多

关键词 let-7a-3p AMpK 肺癌A549细胞 能量代谢

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宫颈鳞癌患者血浆miRNA let-7a-3p表达及其临床意义 被引量：2

3

作者 武燕 王福花 《中国药物与临床》 CAS 2019年第5期745-747,共3页

子宫颈鳞癌在妇科恶性肿瘤最常见,病死率也高,每年全球新发病例超45万之多,是严重威胁女性健康的恶性疾病之一,近年研究发现宫颈癌发病逐渐趋于年轻化[1],其也是我国重点防治癌症之一。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程,因... 子宫颈鳞癌在妇科恶性肿瘤最常见,病死率也高,每年全球新发病例超45万之多,是严重威胁女性健康的恶性疾病之一,近年研究发现宫颈癌发病逐渐趋于年轻化[1],其也是我国重点防治癌症之一。宫颈癌的发生是一个多因素、多阶段的发展过程,因此尽早诊断,及时采取相应治疗措施,是降低宫颈癌死亡率以及改善患者生活质量的关键。人乳头状瘤病毒(HPV)感染,尤其是高危型HPV的感染是导致宫颈癌发生的主要危险因素。 展开更多

关键词 宫颈癌患者 宫颈鳞癌 MIRNA let-7a-3p HpV

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非小细胞肺癌患者血清细胞外囊泡测let-7d-3p水平检的临床价值

4

作者 周雨潇 王成 +3 位作者 王静 张钰 张春妮 汪俊军 《临床检验杂志》 CAS 2022年第12期896-900,共5页

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者血清细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)中let-7d-3p水平的变化,评估其作为NSCLC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值。方法 选取2020年9月至2021年5... 目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma, NSCLC)患者血清细胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)中let-7d-3p水平的变化,评估其作为NSCLC患者辅助筛查液体活检分子标志物的临床应用价值。方法 选取2020年9月至2021年5月于东部战区总医院确诊的NSCLC患者102例及同期年龄、性别匹配的体检健康者70例,收集患者组及健康人对照组血清标本并分离EVs,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测各组血清EVs中let-7d-3p表达水平变化,ROC曲线分析血清EVs let-7d-3p测定对于NSCLC患者的辅助筛查价值。结果 与健康人对照组相比,NSCLC患者血清EVs中let-7d-3p水平显著降低[69.75(25.64,154.70)fmol/L vs 26.09(13.74,45.56)fmol/L],差异有统计学意义(U=1 830,P<0.001);同时,NSCLCⅠ期患者[26.07(11.15,45.30)fmol/L]血清EVs let-7d-3p水平亦显著降低(U=1 201,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血清EVs let-7d-3p水平用于筛查NSCLC患者及Ⅰ期患者的ROC曲线下面积(the area under the ROC curve, AUC^(ROC))分别为0.744(95%CI:0.667~0.821)和0.736(95%CI:0.653~0.819);当cut-off值为45.07 fmol/L时,血清EVs let-7d-3p筛查NSCLC及NSCLCⅠ期患者的敏感性和特异性分别为74.5%和60%,75.4%和60%。此外,NSCLC患者血清EVs let-7d-3p水平不受年龄、性别、吸烟史及病理类型的影响,差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 NSCLC患者尤其是早期患者血清EVs中let-7d-3p水平与健康人对照相比显著降低,具备作为NSCLC辅助筛查液体活检分子标志物的潜能。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 细胞外囊泡 微小核糖核酸 分子标志物 let-7d-3p

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特发性癫痫患者外周血差异表达miRNA分析

5

作者 仲婷 景燕 +2 位作者 陆明佳 党辉 李红燕 《实用心脑肺血管病杂志》 2023年第9期27-32,共6页

目的分析特发性癫痫患者外周血差异表达miRNA。方法选取2019年1月至2020年1月在新疆维吾尔自治区人民医院神经内科治疗的特发性癫痫患者12例为病例组,选取同期于新疆维吾尔自治区人民医院门诊进行体检的健康者12例为对照组。采集受试者... 目的分析特发性癫痫患者外周血差异表达miRNA。方法选取2019年1月至2020年1月在新疆维吾尔自治区人民医院神经内科治疗的特发性癫痫患者12例为病例组,选取同期于新疆维吾尔自治区人民医院门诊进行体检的健康者12例为对照组。采集受试者外周血,采用Illumina HiSeq 2000测序仪进行高通量测序,采用edgeR软件筛选差异表达miRNA,采用qPCR检测差异表达miRNA表达水平。结果共完成24个样本测序。各样本原始序列数据统计分析结果显示,原始序列中碱基的测序质量值>20的碱基占总碱基的百分比为92.56%~97.32%,原始序列中碱基的测序质量值>30的碱基占总碱基的百分比为88.01%~93.50%,碱基G和C的数量总和占总碱基数量的百分比为45.29%~52.09%;各样本样品待分析数据统计分析结果显示,原始序列中碱基的测序质量值>20的碱基占总碱基的百分比为95.87%~98.85%,原始序列中碱基的测序质量值>30的碱基占总碱基的百分比为95.30%~96.85%,碱基G和C的数量总和占总碱基数量的百分比为40.38%~47.58%。共检测出146个差异表达miRNA,与对照组相比,研究组共有98个miRNA表达上调,48个miRNA表达下调;其中差异倍数最大的5个差异表达miRNA分别为hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-219a-2-3p、hsa-miR-6810-3p。扩增曲线分析结果显示,样本均经历了良好的扩增过程。熔解曲线分析结果显示,大多数曲线为单峰。病例组hsa-let-7b-3p、hsa-miR-92a-1-5p表达水平低于对照组,hsa-miR-6810-3p表达水平高于对照组(P<0.05)。结论与健康人相比,特发性癫痫患者外周血共有98个miRNA表达上调,48个miRNA表达下调;其中差异倍数最大的5个差异表达miRNA分别为hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-219a-2-3p、hsa-miR-6810-3p,且可能只有hsa-let-7b-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-6810-3p参与了特发性癫痫的发生发展。 展开更多

关键词 癫痫 特发性癫痫 微RNAS hsa-let-7b-3p hsa-miR-92a-1-5p hsa-miR-6810-3p

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let-7b-3p靶向调控ANKRD49抑制鼻咽癌细胞侵袭和迁移

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作者 王意 苟小霞 +4 位作者 朱琳 黄钢 陈念 周凯 申莎莎 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2023年第22期4097-4104,共8页

目的:探究let-7b-3p调控锚蛋白重复结构域49(ANKRD49)表达影响鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞侵袭和迁移能力的潜在机制。方法:利用GEO、TCGA数据库分析鼻咽癌及头颈部肿瘤组织中let-7b表达水平及其与临床病理参数的关系。... 目的:探究let-7b-3p调控锚蛋白重复结构域49(ANKRD49)表达影响鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞侵袭和迁移能力的潜在机制。方法:利用GEO、TCGA数据库分析鼻咽癌及头颈部肿瘤组织中let-7b表达水平及其与临床病理参数的关系。免疫组化技术检测ANKRD49在NPC及鼻咽炎症组织中的表达水平。RT-PCR检测let-7b-3p在鼻咽癌细胞系中的表达。Transwell侵袭实验与划痕实验分别检测let-7b-3p在鼻咽癌细胞侵袭与迁移能力中的作用。采用双荧光素酶基因报告实验进行let-7b-3p与ANKRD49靶向关系验证。RT-PCR、Western Blot及回复实验验证let-7b-3p对ANKRD49的调控作用。结果:基于鼻咽癌miRNA芯片分析,相比正常鼻咽组织,let-7b-3p在鼻咽癌组织中表达下调,并且let-7b-3p表达水平与肿瘤浸润深度及淋巴结分期有关(P<0.05)。免疫组化示ANKRD49在鼻咽癌组织中高表达。侵袭、迁移实验结果示,let-7b-3p mimic组及inhibitor组分别抑制和促进鼻咽癌细胞的侵袭能力及迁移能力(P均<0.05)。通过双荧光素酶报告基因实验显示let-7b-3p mimic可抑制ANKRD49-wt荧光素酶活性(0.35±0.08 vs 0.61±0.05,P<0.01),而不影响ANKRD49-mut荧光素酶活性(0.64±0.13 vs 0.57±0.13,P>0.05)。RT-PCR及Western Blot结果表明,let-7b-3p inhibitor组的ANKRD49 mRNA和蛋白表达水平均高于正常组与let-7b-3p mimic组。回复实验发现,干扰ANKRD49影响let-7b-3p inhibitor组和let-7b-3p mimic组对鼻咽癌细胞侵袭及迁移的促进和抑制作用。结论:let-7b-3p靶向调控ANKRD49的表达抑制鼻咽癌细胞侵袭及迁移,let-7b-3p/ANKRD49轴可能是鼻咽癌潜在的治疗靶点。 展开更多

关键词 let-7b-3p ANKRD49 鼻咽癌 侵袭 迁移

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微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义

7

作者 罗庆元 闫军 +2 位作者 周高晋 孙国徽 代琴祺 《临床和实验医学杂志》 2023年第15期1602-1605,共4页

目的评估微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义。方法回顾性收取新疆医科大学第七附属医院34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本,通过RT-qPCR检测组织中Let-7g-3p的表达水平。再从癌症基因图谱(TCGA)数据库中检索直肠癌... 目的评估微小RNA Let-7g-3p在直肠癌中的表达水平及临床意义。方法回顾性收取新疆医科大学第七附属医院34例直肠癌患者的肿瘤及邻近非癌组织样本,通过RT-qPCR检测组织中Let-7g-3p的表达水平。再从癌症基因图谱(TCGA)数据库中检索直肠癌患者的注册数据,收集人口统计信息,例如年龄、性别和癌症特征。用Kaplan-Meier法分析总生存率,用Cox比例风险回归模型分析独立预后。结果Let-7g-3p在直肠癌组织中表达降低,且与患者的临床病理学特征相关联。此外,低Let-7g-3p表达与不良预后和直肠癌的侵袭性进展有关。单因素分析结果显示,Let-7g-3p表达水平是直肠癌患者总生存率的重要预后标志物:Let-7g-3p(HR=1.782;95%CI:1.173~2.707;P=0.007);TNM分期(HR=0.305;95%CI:0.200~0.465;P<0.001);转移(HR=0.093;95%CI:0.048~0.180;P<0.001)。多变量分析表明,低表达Let-7g-3p是直肠癌中重要的独立预后标志物:Let-7g-3p(HR=0.518;95%CI:0.339~0.792;P=0.012);TNM分期(HR=2.199;95%CI:1.323~3.656;P=0.002),转移(HR=2.886;95%CI:1.739~4.790;P<0.001)。结论下调Let-7g-3p表达与直肠癌的进展有关,可能作为直肠癌的独立预后标志物。 展开更多

关键词 直肠癌 微小RNA let-7g-3p 预后

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血浆hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病中的诊断价值及功能

8

作者 赵超 陈丹 +2 位作者 王暖 周昊 陈国芳 《医学综述》 CAS 2023年第20期4346-4352,共7页

目的探索hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病(AD)中的诊断价值和功能。方法收集2018年4月至2022年3月于徐州市第一人民医院就诊的80例AD患者作为AD组,同期招募60名健康者作为健康对照组。筛选GSE46579和GSE120584数据集中AD患者血浆中显著变... 目的探索hsa-let-7d-3p在阿尔茨海默病(AD)中的诊断价值和功能。方法收集2018年4月至2022年3月于徐州市第一人民医院就诊的80例AD患者作为AD组,同期招募60名健康者作为健康对照组。筛选GSE46579和GSE120584数据集中AD患者血浆中显著变化的微RNA(miRNA),采集两个数据集中上调及下调的miRNA进行生物标志物的筛选。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测所筛选的差异miRNA的表达水平。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)、简易智力状态检查量表(MMSE)和蒙特利尔认知评估基础量表(MoCA_B)评分评价hsa-let-7d-3p对AD的诊断价值。此外,建立Aβ25~35损伤SH-SY5Y的细胞模型,采用RT-qPCR检测hsa-let-7d-3p水平。通过转染使细胞表达hsa-let-7d-3p,使用四唑盐法验证其是否影响Aβ25~35对细胞活力的作用。结果AD组MMSE评分、MoCA_B评分低于健康对照组(P<0.01)。在GSE120584与GSE46579中均上调的miRNA为hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p、hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p,均下调的miRNA为hsa-miR-548h-5p、hsa-miR-29c-3p。AD组血浆hsa-miR-5001-3p、hsa-let-7d-3p、hsa-miR-589-5p水平明显高于健康对照组(1.43±0.37比1.00±0.32,1.60±0.35比1.00±0.30,1.34±0.38比1.00±0.26)(P<0.01),血浆hsa-miR-29c-3p水平明显低于健康对照组(0.58±0.35比1.00±0.29)(P<0.01),两组hsa-miR-4435、hsa-miR-3605-3p、hsa-miR-548h-5p比较差异无统计学意义(P>0.05)。在AD患者血浆中变化最为显著的上调miRNA为hsa-let-7d-3p,hsa-let-7d-3p的ROC曲线下面积为0.910;AD患者血浆hsa-let-7d-3p与MMSE评分呈负相关(r=-0.536,P<0.01),与MoCA_B评分呈负相关(r=-0.617,P<0.01)。与控制组相比,Aβ25~35处理可显著降低SH-SY5Y细胞的活力(P<0.01);与Aβ+mimics NC组相比,Aβ+mimics组SH-SY5Y细胞活力下降(P<0.01),与Aβ+inhibitor NC组相比,Aβ+inhibitor组SH-SY5Y细胞活力升高(P<0.01)。结论AD患者和AD细胞模型中的hsa-let-7d-3p表达均上调,hsa-let-7d-3p在AD中参与病理 展开更多

关键词 阿尔茨海默病 hsa-let-7d-3p 生物标志物

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宫颈癌细胞中ΔNp63α的MicroRNA表达谱及其对hsa-let-7b-3p的调控机制 被引量：4

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作者 宋伟国 钱莉莉 +5 位作者 吴大保 申震 朱靖 程勇 肖卫华 周颖 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2018年第3期138-143,共6页

目的在宫颈鳞癌细胞中筛选出ΔNp63α显著调控的mi RNAs,并探讨其对宫颈癌细胞功能的影响。方法通过mi RNA芯片技术筛选出ΔNp63α过表达的Si Ha细胞株(Si Ha/p63)中差异明显的mi RNAs,并进行q RT-PCR验证;通过q RT-PCR在沉默ΔNp63α的... 目的在宫颈鳞癌细胞中筛选出ΔNp63α显著调控的mi RNAs,并探讨其对宫颈癌细胞功能的影响。方法通过mi RNA芯片技术筛选出ΔNp63α过表达的Si Ha细胞株(Si Ha/p63)中差异明显的mi RNAs,并进行q RT-PCR验证;通过q RT-PCR在沉默ΔNp63α的ME-180细胞株(ME-180/Shp63)中检测差异表达的mi RNAs,并选择差异较显著的hsa-let-7b-3p作为研究对象;向Si Ha细胞中转染hsa-let-7b-3p刺激剂,通过生长曲线、Western blot以及流式细胞仪检测hsa-let-7b-3p对Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。结果 (1)在ΔNp63α过表达的Si Ha细胞株中,筛选出10个变化较显著的mi RNAs;(2)在ΔNp63α沉默的ME-180细胞中,筛选出5个与上述变化趋势一致的mi RNAs;(3)hsa-let-7b-3p过表达抑制Si Ha细胞的增殖;(4)hsa-let-7b-3p过表达促进Si Ha细胞的凋亡。结论宫颈癌细胞株中,mi RNA hsalet-7b-3p的表达与ΔNp63α的表达呈正相关,且可以有效抑制细胞增殖,其作用机制可能与诱导细胞周期阻滞和促进细胞凋亡相关。 展开更多

关键词 ΔNp63α 子宫颈癌 miRNA hsa-let-7b-3p 增殖 凋亡

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MiR-let-7g-3p靶向HMGB2调控膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和和凋亡 被引量：2

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作者 邹震海 程琪 +5 位作者 李中 高五岳 孙巍 刘贝贝 郭园园 刘建民 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1335-1343,共9页

目的探讨MiR-let-7g-3p靶向HMGB2对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法通过qRT-PCR检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中let-7g-3p的表达水平;通过转染过表达或敲低T24细胞le... 目的探讨MiR-let-7g-3p靶向HMGB2对膀胱癌细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法通过qRT-PCR检测膀胱癌组织和癌旁组织以及正常尿路上皮细胞SV-HUC-1和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中let-7g-3p的表达水平;通过转染过表达或敲低T24细胞let-7g-3p表达,检测细胞增殖、迁移和侵袭、和凋亡等变化;对过表达let-7g-3p的细胞进行转录组测序,结合生物信息学分析,通过双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western-blot分析let-7g-3p靶向负性调控HMGB2基因;qRT-PCR检测正常尿路上细胞和膀胱癌细胞(T24、5637和EJ)中HMGB2的表达水平,并且在敲低HMGB2的细胞株中,敲低let-7g-3p,检测细胞生物学行为改变。结果qRT-qPCR证实let-7g-3p在膀胱癌组织和细胞表达明显下调(P<0.01);过表达let-7g-3p可抑制细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡(P<0.01);相反,敲减let-7g-3p表达可促进细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.01)。生物信息学和转录组测序结果显示,HMGB2是let-7g-3p作用于膀胱癌细胞的关键分子;双荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western blot显示,HMGB2受let-7g-3p的负性调控;HMGB2膀胱癌细胞中表达水平均明显上调(P<0.01),敲低HMGB2可部分逆转敲低let-7g-3p对膀胱癌细胞生长的促进作用。结论MiRNA-let-7g-3p通过靶向负性调控HMGB2基因抑制膀胱癌细胞的生物行为。 展开更多

关键词 let-7g-3p HMGB2基因 膀胱肿瘤

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miR-let-7c-3p靶向Egr-1调控白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化的机制研究 被引量：1

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作者 齐福 王希娣 +4 位作者 王朝喆 孙瑞婧 都鹏超 王静 姜国胜 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期554-563,共10页

目的探讨miR-let-7 c-3 p/早期生长反应因子-1(Egr-1)信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的作用与分子机制.方法人慢性髓系白血病K562细胞分别用100μg/L佛波酯(PMA,实验组)和0μg/L PMA(对照组)溶液向单核/巨噬细胞定向诱导分... 目的探讨miR-let-7 c-3 p/早期生长反应因子-1(Egr-1)信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的作用与分子机制.方法人慢性髓系白血病K562细胞分别用100μg/L佛波酯(PMA,实验组)和0μg/L PMA(对照组)溶液向单核/巨噬细胞定向诱导分化48 h后,通过细胞形态学观察和流式细胞仪测定分化抗原,确定分化模型的成功建立;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测白血病细胞分化前后Egr-1和miR-let-7c-3p的表达变化,蛋白质印迹法检测Egr-1蛋白表达变化;siRNA干扰实验检测Egr-1对细胞分化的影响,设PMA+si-Egr-1组和PMA+si-Ctrl组;双荧光素酶结合实验检测miR-let-7 c-3 p与Egr-1的3′UTR靶向结合和活性调控关系,用Egr-1-wt野生质粒、Egr-1-mut突变质粒和miR-let-7 c-3 p mimics或NC mimics共转染细胞,设置miR-let-7 c-3 p mimics+Egr-1-wt、miR-let-7 c-3 p mimics NC+Egr-1-wt、miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-mut和miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-mut组;通过细胞转染miR-let-7c-3p mimics和inhibitor调控miRNA表达,设置阴性对照序列(miR-let-7c-3p mimics NC和miR-let-7c-3p inhibitor NC),qRT-PCR验证调控效果;蛋白质印迹法检测miR-let-7c-3p对Egr-1的表达影响;流式细胞术检测miR-let-7c-3p对PMA诱导的K562细胞分化抗原的影响.结果经过PMA体外诱导后,与对照组比较,实验组K562细胞增殖水平升高(0.85±0.03 vs 0.46±0.03;t=16.050,P<0.001),CD11b阳性表达量升高〔(49.47±3.48)%vs(3.54±0.54)%;t=24.070,P=0.002〕,CD14阳性表达量也升高〔(59.84±5.26)%vs(6.79±0.66)%;t=16.670,P=0.004〕.与对照组比较,实验组Egr-1基因和蛋白表达水平升高,miR-let-7c-3p基因表达量降低,差异有统计学意义,均P<0.001.siRNA干扰实验结果显示,PMA+si-Egr-1组CD14分化抗原表达水平低于PMA+si-Ctrl组〔(7.03±1.45)%vs(24.40±4.70)%;t=6.113,P=0.004〕.双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-wt组的荧光素酶活性低于miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-wt组(0.77±0.006 vs 展开更多

关键词 K562细胞 细胞分化 miR-let-7c-3p 早期生长反应因子-1 巨噬细胞

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急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义

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作者 张彩玲 《牡丹江医学院学报》 2021年第3期64-67,97,共5页

目的探讨急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义。方法选取2016年5月至2019年5月间平顶山市第二人民医院收治的355例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量PCR法(RT-q... 目的探讨急性缺血性脑卒中患者血浆miR let-7b-3p水平及意义。方法选取2016年5月至2019年5月间平顶山市第二人民医院收治的355例急性缺血性脑卒中患者作为研究对象,根据预后情况分为预后不良组和预后良好组。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测患者血浆miR let-7b-3p相对表达量,并分析其与预后的关系。结果355例急性缺血性脑卒中患者出院后3个月内预后不良发生率为45.07%。预后不良组血浆let-7b-3p相对表达量低于预后良好组(P<0.05);出血转化、发病-治疗时间(ONT)、同型半胱氨酸及miR let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后密切相关。出血转化、ONT、同型半胱氨酸、let-7b-3p等联合评估急性缺血性脑卒中患者预后的曲线下面积(AUC)高于miR let-7b-3p及出血转化、ONT、同型半胱氨酸的联合(P<0.05)。结论血浆let-7b-3p与急性缺血性脑卒中患者预后关系密切,检测miR let-7b-3p表达情况有助于预测患者预后。 展开更多

关键词 急性缺血性脑卒中 miR let-7b-3p 预后

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基于let-7f-2-3p/SCN1A轴探究加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响 被引量：3

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作者 朱贞敏 刘洋 +1 位作者 刘春香 陈军亮 《中药材》 CAS 北大核心 2022年第3期698-704,共7页

目的:探讨加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响,并探讨其对let-7f-2-3p/SCN1A轴的调控作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、普卢卡必利组、加味肾气丸组;采用生大黄免煎剂混悬液递增灌胃建立泻剂结肠大鼠模型... 目的:探讨加味肾气丸对泻剂结肠大鼠肠动力障碍的影响,并探讨其对let-7f-2-3p/SCN1A轴的调控作用。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、普卢卡必利组、加味肾气丸组;采用生大黄免煎剂混悬液递增灌胃建立泻剂结肠大鼠模型,造模成功后分别给予相应药物。统计大鼠治疗后1 w首粒黑便排出时间;取大鼠结肠标本,HE染色观察大鼠肠黏膜损伤情况;免疫荧光标记观察ICC数量;免疫组化染色检测结肠组织中AChE、NOS表达;采用试剂盒测定大鼠结肠组织SOD、MDA、NO、VIP、SP、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平;RT-qPCR检测大鼠结肠组织let-7f-2-3p、SCN1A的表达;通过生物信息学在线软件预测let-7f-2-3p与SCN1A互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。结果:与模型组比较,加味肾气丸组首粒黑便排出时间显著缩短(P<0.05),结肠黏膜损伤明显改善,结肠ICC数量显著增加,NO、VIP、MDA水平及NOS表达显著降低,SP、SOD、Na^(+)-K^(+)-ATPase、Ca^(2+)-ATPase水平及AChE表达显著升高,let-7f-2-3p表达显著降低,SCN1A表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。双荧光素酶报告实验证实SCN1A是let-7f-2-3p的靶向调控分子。结论:加味肾气丸可能通过let-7f-2-3p/SCN1A轴缓解肠动力障碍,进而对泻剂结肠大鼠产生保护作用。 展开更多

关键词 加味肾气丸 泻剂结肠 let-7f-2-3p/SCN1A轴 肠动力障碍 氧化应激

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