类受体激酶在植物的生长发育、抵御生物以及非生物胁迫等过程中发挥着重要作用,被认为是植物中重要的跨膜信号分子.凝集素样类受体激酶(lectin-receptor like kinases,LecRKs)属于类受体激酶中的第二大亚家族,但是目前在植物领域中研究...类受体激酶在植物的生长发育、抵御生物以及非生物胁迫等过程中发挥着重要作用,被认为是植物中重要的跨膜信号分子.凝集素样类受体激酶(lectin-receptor like kinases,LecRKs)属于类受体激酶中的第二大亚家族,但是目前在植物领域中研究较少.笔者近期的研究结果表明,LecRKⅣ.3在植物应答盐胁迫、紫外线胁迫响应中发挥着重要作用.类受体激酶胞内域(intracellular domain,ID)的激酶活性对LecRKⅣ.3的功能至关重要,为了阐明LecRKⅣ.3是否具有激酶活性,首先克隆了LecRK Ⅳ.3ID,通过一步重组法构建至pET30a载体上,获得His-LecRKⅣ.3ID原核表达载体并转化至5种不同大肠杆菌表达宿主菌株中.以不同宿主菌生长情况来探索His-LecRK Ⅳ.3ID蛋白的最佳表达宿主,最终得到表达该蛋白的最佳宿主为OverExpressC43(DE3).此宿主获得的融合蛋白主要分布在上清液;Westernblot免疫印迹技术证明该蛋白能被Anti-His-HRP抗体识别;放射性同位素法检测到其具有激酶活性.该结果不仅为研究LecRK Ⅳ.3的生物学功能奠定了基础,也为将来纯化其他蛋白激酶提供理论参考.展开更多
