自发性高血压大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道的活性及表达改变 被引量：9

1

作者 胡志 马爱群 +3 位作者 田红燕 席雨涛 范力宏 王亭忠 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期424-428,共5页

目的观察自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)与Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated po-tassiumchannel,BK... 目的观察自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rats,SHR)与Wistar-Kyoto(WKY)大鼠肠系膜动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated po-tassiumchannel,BKCa)电流及通道α亚单位表达的差异。方法实验采用16～18周龄SHR(N=20)及WKY(N=20)大鼠,尾套法测量大鼠尾动脉血压;胶原酶分离VSMCs,全细胞膜片钳技术记录全细胞总钾电流密度及BKCa电流;激光共聚焦观察BKCaα亚单位在VSMCs胞膜及胞质内的分布。结果 SHR较WKY大鼠的收缩压与舒张压均有显著升高(P<0.05);全细胞外向钾电流密度及BKCa电流密度均有显著性增加(P<0.05);SHR的BKCaα亚单位在胞膜及胞质内均有广泛分布,SHR大鼠VSMCs胞质与胞膜的荧光强度较WKY大鼠均有显著性升高(P<0.05)。结论 BKCa电流密度增加可能与BKCa通道α亚单位的表达增多有关,SHR大鼠VSMCs的BKCa电流密度增加引起血管的舒张,不能抵消平滑肌细胞的肌源性收缩可能是导致高血压的发生机制之一。 展开更多

关键词 高血压 膜片钳 大电导钙激活钾通道 血管平滑肌细胞

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二十二碳六烯酸及其代谢产物对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活作用 被引量：5

2

作者 王萌 钱玲玲 +7 位作者 王如兴 季圆 吴莹 王湘芸 汤徐 徐凤 刘晓宇 李肖蓉 《中国心脏起搏与心电生理杂志》 2014年第6期523-526,共4页

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)及其代谢产物16,17-环氧二十二碳五烯酸(16,17-Ep DPE)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK)单通道的激活作用,探讨DHA扩张冠状动脉、保护心血管的机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉... 目的研究二十二碳六烯酸(DHA)及其代谢产物16,17-环氧二十二碳五烯酸(16,17-Ep DPE)对正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK)单通道的激活作用,探讨DHA扩张冠状动脉、保护心血管的机制。方法酶消化法分离正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞,采用膜内向外型单通道膜片钳实验技术记录0,0.01,0.1,0.3,1,3,5,7.5和10 mmol/L浓度下DHA及其代谢产物16,17-Ep DPE灌流后BK单通道开放概率。结果在电极外液钙离子浓度为1 mmol/L和刺激电位60 m V条件下,DHA浓度为0,0.01,0.1,0.3和1 mmol/L时,BK通道开放概率分别为0.091 4±0.009 8,0.090 7±0.010 2,0.094 5±0.009 1,0.098 6±0.011 2和0.110 4±0.014 5(P>0.05,n=5);DHA浓度为3,5,7.5和10 mmol/L时,BK单通道开放概率分别为0.671 2±0.045 6,0.751 1±0.079 8,0.842 4±0.137 3和0.866 9±0.096 7(P<0.05,n=5),呈浓度依赖性增高。16,17-Ep DPE浓度为0,10,50和100 nmol/L时,BK单通道开放概率分别为0.102 5±0.011 4,0.100 6±0.009 1,0.112 8±0.013 2和0.108 1±0.014 3(P>0.05,n=5)。结论低浓度DHA不能激活BK单通道,高浓度DHA可能通过与BK通道结合并直接激活BK单通道,这可能是DHA扩张冠状动脉的机制之一。 展开更多

关键词 心血管病学 二十二碳六烯酸 16 17环氧二十二碳五烯酸 冠状动脉 平滑肌细胞 大电导钙离子激活 钾通道 单通道 膜片钳

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血管紧张素Ⅱ通过抑制人心房成纤维细胞BKCa通道诱导心房纤维化

3

作者 贾春森 李磊 +4 位作者 李劲平 谭宏伟 周伟 聂永梅 于风旭 《心血管病学进展》 CAS 2023年第11期1047-1052,1056,共7页

目的探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实... 目的探讨在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心房纤维化的过程中,大电导钙激活钾通道(BKCa通道)的作用机制。方法通过组织块贴壁法获取原代人心房成纤维细胞,使用免疫荧光染色进行鉴定。用浓度为500 nmol/L的AngⅡ处理人心房成纤维细胞24 h,实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法用于检测处理前后纤维化标志基因α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ),以及BKCa通道的α与β亚基的mRNA和蛋白表达水平,全细胞膜片钳技术检测AngⅡ处理前后的BKCa通道的电流变化。结果(1)人心房成纤维细胞经AngⅡ处理后,α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的mRNA和蛋白表达水平升高;(2)经过AngⅡ处理后,BKCa通道α及β亚基mRNA和蛋白表达水平降低;(3)人心房成纤维细胞存在功能正常的BKCa通道,具有电压依赖性;(4)人心房成纤维细胞BKCa通道的宏观电流幅度在经AngⅡ处理后降低;(5)在人心房成纤维细胞上过表达BKCa通道α亚基后,纤维化标志物α-SMA、collagenⅠ和collagenⅢ的表达受到了明显抑制。结论AngⅡ可能通过抑制人成纤维细胞BKCa通道的表达和功能来诱导人心房成纤维细胞的纤维化,并最终导致心房纤维化。 展开更多

关键词 心房纤维化 血管紧张素Ⅱ 人心房成纤维细胞 大电导钙激活钾通道

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重度子痫前期胎盘小动脉血管平滑肌细胞BKCa通道的改变 被引量：4

4

作者 朱艳 侯晓钰 傅晓冬 《泸州医学院学报》 2016年第5期471-475,共5页

目的:运用膜片钳技术记录重度子痫前期患者胎盘小动脉血管平滑肌细胞上的BKCa通道的活动,探讨重度子痫前期与离子通道间的关系。方法:(1)收集诊断重度子痫前期患者胎盘10例为实验组,同时收集正常晚孕无妊娠并发症和合并症产妇胎盘10例... 目的:运用膜片钳技术记录重度子痫前期患者胎盘小动脉血管平滑肌细胞上的BKCa通道的活动,探讨重度子痫前期与离子通道间的关系。方法:(1)收集诊断重度子痫前期患者胎盘10例为实验组,同时收集正常晚孕无妊娠并发症和合并症产妇胎盘10例为对照组;(2)急性酶分离获得其胎盘小动脉血管平滑肌细胞,用单通道膜片钳软件记录重度子痫前期组和对照组平滑肌细胞BKCa通道的情况。结果:重度子痫前期患者胎盘小动脉血管平滑肌细胞BKCa通道的电流幅值(Amp)为:(4.770±1.128)p A;通道的开放概率为(NPO):(0.006±0.002);通道的平均开放时间(To)为:(3.991±1.386)ms;通道的平均关闭时间(Tc)为:(791.893±270.693)ms;而正常血压组的Amp为:(7.407±0.881)p A;NPO为:0.021±0.006;To为:(5.764±0.801)ms;Tc为:(279.330±69.903)ms。两组的比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:重度子痫前期患者胎盘小动脉血管平滑肌细胞BKCa通道的功能降低,参与了子宫胎盘的缺血缺氧改变,可能与妊娠期高血压疾病的发生发展相关。 展开更多

关键词 重度子痫前期 胎盘血管平滑肌细胞 大电导钙激活钾通道

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糖尿病患者肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流的变化 被引量：4

5

作者 文静 程俊 +2 位作者 李鹏云 李畅 杨艳 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第18期2312-2315,共4页

目的探讨糖尿病患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)大电导钙激活钾通道(BKCa)的电流变化,阐明糖尿病对肠系膜动脉的损伤及其细胞电生理机制。方法将患者分为血糖正常的对照组(n=19)和糖尿病组(n=11),利用单通道膜片钳及全细胞穿孔膜... 目的探讨糖尿病患者肠系膜动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)大电导钙激活钾通道(BKCa)的电流变化,阐明糖尿病对肠系膜动脉的损伤及其细胞电生理机制。方法将患者分为血糖正常的对照组(n=19)和糖尿病组(n=11),利用单通道膜片钳及全细胞穿孔膜片钳技术记录两组患者肠系膜动脉VSMCs BKCa电流的变化,并比较增加浴液中钙离子浓度[(Ca2+)i]至10-7mol/L时两组BKCa单通道电流的变化。结果在全细胞穿孔膜片钳下,测试电压范围内,膜电位分别为+50mV和+60mV时,对照组的电流密度明显高于糖尿病组(P<0.05),前者为(20.85±2.66)pA/pF(Vm=+50mV,n=10)和(27.49±2.71)pA/pF(Vm=+60mV,n=10),后者为(12.38±1.58)pA/pF(Vm=+50mV,n=6)和14.87±1.63pA/pF(Vm=+60mV,n=6)。在内面向外式膜片下(Vm=+40mV,[Ca2+]free=0),对照组BKCa单通道活性明显强于糖尿病组(P<0.05),对照组Tc=(622.6±173.8)ms,NPo=0.021±0.006(n=8),糖尿病组Tc=(1 912.8±346.6)ms,NPo=0.005±0.001(n=8)。增加浴液中[Ca2+]i至10-7 mol/L时,对照组BKCa通道活性明显增强(P<0.05),Tc=(194.1±40.1)ms,NPo=0.058±0.014(n=7)。但糖尿病组BKCa单通道电流幅度,通道开放时间,关闭时间和通道平均开放概率均无明显变化。结论糖尿病患者人VSMCs BKCa单通道开放概率减少和电流密度降低,且对Ca2+反应性降低,这可能是糖尿病肠系膜动脉功能损伤的原因。 展开更多

关键词 糖尿病 大电导钙激活钾通道 肠系膜动脉

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大电导钙依赖的钾通道(BKca通道)与疼痛 被引量：3

6

作者 刘蔡钺 赵云富 马蓓 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期449-453,共5页

大电导钙离子依赖的钾通道(BKca通道)广泛表达于多种组织细胞的细胞膜上。它参与了细胞兴奋的电活动、神经递质的释放、激素的分泌,血管、气管、子宫、胃肠道、及膀胱等多种平滑肌组织以及其它很多重要生理活动的调节。在可兴奋细胞上,... 大电导钙离子依赖的钾通道(BKca通道)广泛表达于多种组织细胞的细胞膜上。它参与了细胞兴奋的电活动、神经递质的释放、激素的分泌,血管、气管、子宫、胃肠道、及膀胱等多种平滑肌组织以及其它很多重要生理活动的调节。在可兴奋细胞上,因其对胞内钙离子浓度以及电压具有高度敏感性,BKca通道通过降低流入胞内的钙离子浓度,使细胞动作电位复极化和超级化,从而降低动作电位的爆发频率,参与负反馈调节,在可兴奋细胞的传导通路上发挥着十分重要的作用。最近越来越多的研究表明,BKca通道可能与疼痛有着十分密切的联系,我们结合相关文献对此做一综述。 展开更多

关键词 BKCA 钙离子 疼痛 药物敏感性

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模拟失重增强大鼠脑动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道功能 被引量：2

7

作者 谢满江 张立藩 +1 位作者 马进 程宏伟 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期439-445,共7页

本工作旨在探讨短期模拟失重大鼠脑动脉血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)大电导钙激活钾通道(largeconductancecalcium-activatedpotassiumchannels,BKCachannels)功能的改变。以尾部悬吊大鼠模型模拟失重对脑血管的影... 本工作旨在探讨短期模拟失重大鼠脑动脉血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)大电导钙激活钾通道(largeconductancecalcium-activatedpotassiumchannels,BKCachannels)功能的改变。以尾部悬吊大鼠模型模拟失重对脑血管的影响。应用激光扫描共聚焦显微镜测定VSMCs胞内游离钙浓度([Ca2+]i);采用细胞贴附模式,记录BKCa通道的单通道活动。结果表明,模拟失重1周后,大鼠脑动脉VSMCs的[Ca2+]i比对照组显著升高(P<0.05);BKCa通道的开放概率(Po)与平均开放时间(To)显著增加(P<0.05),而单通道电导与平均关闭时间(Tc)则无显著变化。总之,1周模拟失重可引起脑动脉VSMCs的BKCa通道功能显著增强,且与细胞[Ca2+]i的升高同步出现。结果提示,脑动脉VSMCs的离子通道机制可能参与介导模拟失重引起的脑血管适应性变化。 展开更多

关键词 微重力 航天飞行后心血管失调 大鼠 血管平滑肌细胞 胞浆Ca^2+ 大电导钙激活钾通道

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重度子痫前期子宫小动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的改变 被引量：2

8

作者 侯晓钰 朱艳 +2 位作者 林海蕤 傅晓冬 杨艳 《中国计划生育和妇产科》 2016年第4期25-28,46,共5页

目的研究重度子痫前期患者子宫小动脉平滑肌大电导钙激活钾通道的改变。方法选取2012年6月至2013年3月在泸州医学院附属医院产科住院分娩的20例患者的临床资料,其中临床诊断为重度子痫前期(severe preeclampsia,SPE)且无其它并发症和合... 目的研究重度子痫前期患者子宫小动脉平滑肌大电导钙激活钾通道的改变。方法选取2012年6月至2013年3月在泸州医学院附属医院产科住院分娩的20例患者的临床资料,其中临床诊断为重度子痫前期(severe preeclampsia,SPE)且无其它并发症和合并症进行剖宫产手术10例为SPE组;同期无产科并发症和合并症的足月孕产妇因其他原因行剖宫产手术终止妊娠者10例为正常晚孕(normal late pregnancy,NLP)组。取行剖宫产手术患者的子宫小动脉,采用急性酶分离法分离出小动脉平滑肌细胞,按平滑肌细胞的来源分为重度子痫前期组和正常足月妊娠组,采用单通道膜片钳技术记录子宫小动脉平滑肌细胞BKCa通道电流。结果妊娠期子宫小动脉平滑肌细胞BKCa通道单通道电流能被Ib TX通道特异阻断剂阻断,具有电压和钙离子浓度依赖性;在细胞贴附式膜片下,重度子痫前期组与正常足月妊娠组相比,BKCa通道开放概率减少(P<0.01),电流幅值减小(P<0.01)、平均开放时间减少(P<0.01)、平均关闭时间无明显变化。结论重度子痫前期患者子宫小动脉平滑肌细胞BKCa通道活性降低。 展开更多

关键词 重度子痫前期 子宫小动脉 大电导钙激活钾通道

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视网膜动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道电流和钙离子浓度变化对糖尿病视网膜动脉收缩的影响 被引量：1

9

作者 邵珺 姚勇 +1 位作者 孙尉 王如兴 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期312-316,共5页

背景糖尿病视网膜病变（DR）是常见的视网膜微血管并发症，视网膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道（BK）是调节血管舒缩和血液动力的主要因素。目前关于视网膜动脉平滑肌细胞（RASMCs）上BK通道的功能变化在DR形成中的作用鲜有研... 背景糖尿病视网膜病变（DR）是常见的视网膜微血管并发症，视网膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道（BK）是调节血管舒缩和血液动力的主要因素。目前关于视网膜动脉平滑肌细胞（RASMCs）上BK通道的功能变化在DR形成中的作用鲜有研究报道。目的研究正常及糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流、钙离子浓度及不同钙离子浓度下BK通道开放概率（NP0）的变化，探讨DR早期的血管损伤机制。方法采用随机数字表法将50只SPF级8～12周龄SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组，糖尿病模型组40只大鼠腹腔内注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）法制作1型糖尿病模型，正常对照组大鼠10只同法注射枸橼酸钠溶液。采用酶消化法分离大鼠RASMCs，应用全细胞膜片钳技术记录大鼠RASMCs中BK通道电流；采用荧光探针法测定大鼠RASMCs内钙离子浓度；采用膜内向膜外型单通道膜片钳技术记录不同钙离子浓度条件下RASMCs中BK单通道NP。的变化。结果36只大鼠糖尿病造模成功，造模成功率为90％。刺激电压大于60mV时，糖尿病模型组大鼠RASMCs中BK通道电流密度明显下降，刺激电压为100mV时，正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCsBK通道电流分别为（100±23）PA／PF和（50＋7）PA／PF，差异有统计学意义（t=19．80，P〈0．05）。当加入BK通道特异性阻滞剂非洲蝎毒素100nmol后，正常对照组的BK通道电流明显减弱，而糖尿病模型组BK通道电流无明显变化；正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCs内钙离子浓度分别为（123±11）nmol／L和（255±10）nmol／L，差异有统计学意义（t=32．50，P〈0．05）。在刺激电位为60mV条件下，随着钙离子浓度增加，BK通道NP。增加，差异有统计学意义（F=15．28，P〈0．05）。结论糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流下降，细胞内钙离子浓度升高，BK单通道NP0下降。BK� 展开更多

关键词 实验性糖尿病 视网膜小动脉 血管平滑肌/代谢 大电导钙离子激活钾离子通道 钙/生 理 动物 大鼠 膜片钳

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大电导钾通道对脊髓神经元细胞内游离钙和兴奋性的影响 被引量：1

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作者 赵鸿 杨文华 白祥军 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期320-323,共4页

目的探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙(intracellular free calcium,[Ca2+]i)和兴奋性的调节作用。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态... 目的探讨大电导钾通道(large conductance calcium-activited potassium channel,BK)对脊髓神经元细胞内游离钙(intracellular free calcium,[Ca2+]i)和兴奋性的调节作用。方法体外培养大鼠脊髓神经元细胞,应用膜片钳技术,观察生理状态下和持续电流去极化条件下BK通道特异性阻断剂Iberiotoxin对神经元[Ca2+]i和动作电位频率的影响,并采用显微荧光测钙法观察Iberiotoxin对高钾条件下[Ca2+]i的影响。结果生理状态下,Iberiotoxin灌流(100nmol/L)对神经元细胞自发动作电位的频率、[Ca2+]i无显著影响。持续电刺激去极化后,Iberiotoxin灌流使动作电位频率增加,[Ca2+]i显著升高。高钾溶液(20mmol/L KCl)引起神经元[Ca2+]i升高,而Iberiotoxin灌流(100nmol/L)则使[Ca2+]i进一步显著升高。结论生理条件下,BK通道不参与脊髓神经元[Ca2+]i和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或在高钾条件下,BK对神经元[Ca2+]i和兴奋性具有显著的调节作用。 展开更多

关键词 大电导钙激活钾通道 神经元 钙 膜片钳

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13,14-环氧化二十二碳六烯酸舒张冠状动脉作用机制 被引量：1

11

作者 钱玲玲 陈恒建 +7 位作者 张桢烨 刘晓宇 党时鹏 吴莹 赵晓溪 李库林 郁志明 王如兴 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2018年第8期790-794,共5页

目的二十二碳六烯酸对心血管系统的保护机制尚未完全阐明,文中探讨其代谢产物13,14环氧化二十二碳六烯酸(13,14-EpDPE)对正常大鼠冠状动脉的舒张作用机制。方法酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术研究不同浓度(分别为... 目的二十二碳六烯酸对心血管系统的保护机制尚未完全阐明,文中探讨其代谢产物13,14环氧化二十二碳六烯酸(13,14-EpDPE)对正常大鼠冠状动脉的舒张作用机制。方法酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,采用单通道膜片钳技术研究不同浓度(分别为0、1、10、100 pmol/L)13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道开放概率的影响,采用全细胞膜片钳技术研究13,14-EpDPE对冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度的影响。采用血管张力测定检测BK通道特异性阻滞剂蝎毒素预孵育与未孵育时(即预孵育和未孵育组),不同浓度13,14-EpDPE对正常大鼠冠状动脉的舒张作用。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位60 mV条件下,在0、1、10和100 pmol/L 13,14-EpDPE灌流后,正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NPo分别为0.25±0.03、0.34±0.03、0.44±0.06和0.85±0.16,其中100pmol/L 13,14-EpDPE灌流时较0、1、10 pmol/L差异有统计学差异(P<0.05)。BK通道被13,14-EpDPE浓度依赖性激活,其半效浓度EC50为(15.94±1.21)pmol/L。在维持电位-60mV和测试电位+100mV下,10pmol/L 13,14-EpDPE灌流前、灌流后的BK通道电流密度分别为(58.27±16.35)pA/p F和(95.94±23.00)pA/p F,差异有统计学意义(P<0.05)。使用内皮素收缩血管后,10-12、10-11、10-10、10-9、10-8和10-7mol/L的13,14-EpDPE对IBTX未孵育组及预孵育组大鼠冠状动脉的舒张百分率均依次增加,且相同浓度13,14-EpDPE作用下,IBTX预孵育组较未孵育组大鼠冠状动脉舒张百分率均降低(P<0.01)。结论 13,14-EpDPE可通过激活正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道,从而舒张冠状动脉,这可能是13,14-EpDPE对心血管系统具有保护作用的机制之一。 展开更多

关键词 冠状动脉 大电导钙激活钾离子通道 13 14-EpDPE 膜片钳

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平面双分子层脂质膜上人工重建大电导钙激活钾通道 被引量：1

12

作者 程俊 曾晓荣 +4 位作者 谭晓秋 李鹏云 文静 毛亮 杨艳 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期305-310,共6页

本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜(planar lipid bilayer membranes,PLBMs)的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel,BK_(Ca))蛋白融合其上进行单通道电流研究。将... 本研究旨在探索建立一种稳定平面双分子层脂质膜(planar lipid bilayer membranes,PLBMs)的制备方法,并尝试将大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channel,BK_(Ca))蛋白融合其上进行单通道电流研究。将卵磷脂与胆固醇氯仿按3:1比例混合,用N_2吹干氯仿,制成癸烷脂质液,采用涂抹法制备PLBMs,并将BK_(Ca)重建到PLBMs上,用膜片钳研究其单通道特性。结果显示,重建到PLBMs上的BK_(Ca)的单通道的电导值为(206.8±16.9)pS,当浴液中[Ca^(2+)]=0μmol/L时,无论超极化或去极化状态下均很少见到BK_(Ca)的通道活动。膜电位为+40 m V时,当[Ca^(2+)]由1μmol/L增加到100μmol/L时,通道开放概率由0.034±0.002增加到0.961±0.013,平均开放时间由(1.1±0.2)ms延长到(151.3±10.2)ms,平均关闭时间由(32.2±2.8)ms缩短为(2.1±1.8)ms;当K+浓度为40/140 mmol/L(Cis/Trans)时,重建的BK_(Ca)反转电位在-30 mV左右。以上结果提示:(1)涂抹法可用于PLBMs的制备;(2)重建后的BK_(Ca)通道具有电导值大、电压依赖性、Ca^(2+)敏感性和K^+选择性;(3)PLBMs技术可用于BK_(Ca)通道的药理学和动力学特性的研究。 展开更多

关键词 平面双分子层脂质膜 涂抹法 大电导钙激活钾通道

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大电导钙激活钾通道KCNMB2和KCNMB4在人不同WHO级别星形细胞瘤中的表达 被引量：1

13

作者 范文 廖正步 +2 位作者 肖虹 谢宗义 谭戈 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期1800-1804,共5页

目的观察大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium,BKCa)β2亚基(KCNMB2)和β4亚基(KCNMB4)在人不同WHO级别星形细胞瘤中的表达变化,探讨星形细胞肿瘤增殖、生长的分子机制。方法收集人各个WHO级别星形细胞... 目的观察大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium,BKCa)β2亚基(KCNMB2)和β4亚基(KCNMB4)在人不同WHO级别星形细胞瘤中的表达变化,探讨星形细胞肿瘤增殖、生长的分子机制。方法收集人各个WHO级别星形细胞瘤标本69例,另以15例外伤后脑减压术患者的正常脑组织作为对照。Western blot及免疫组织化学染色S-P法检测KCNMB2和KCNMB4的表达。结果与正常脑组织相比,星形细胞瘤组织中KCNMB2和KCNMB4的表达水平明显升高(P<0.05)。KCNMB2的表达与星形细胞瘤的WHO分级有关(P<0.05),与性别、年龄及星形细胞瘤的部位无关(P>0.05),即KCNMB2的表达水平随着星形细胞瘤WHO级别的增高而升高。KCNMB4的表达与性别、年龄、星形细胞瘤的WHO分级及部位均无关(P>0.05)。结论 KCNMB2和KCNMB4在星形细胞瘤中呈高表达,且KCNMB2表达与星形细胞瘤的WHO分级有关。 展开更多

关键词 KCNMB2 KCNMB4 大电导钙激活钾通道 星形细胞瘤 WHO分级

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创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中大电导钙激活钾通道的作用

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作者 赵鸿 杨文华 白祥军 《中华创伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1140-1143,共4页

目的 探讨大电导钙激活钾通道在创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中的作用.方法 体外培养小鼠大脑皮层神经元细胞,应用膜片钳技术,分别在静息条件下和持续电流去极化条件下,采用自身对照观察大电导钾通道特异性阻断剂Iberiotoxin灌流前后... 目的 探讨大电导钙激活钾通道在创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中的作用.方法 体外培养小鼠大脑皮层神经元细胞,应用膜片钳技术,分别在静息条件下和持续电流去极化条件下,采用自身对照观察大电导钾通道特异性阻断剂Iberiotoxin灌流前后,神经元细胞内游离钙浓度和动作电位频率的变化,并按随机数字表法分成实验组（加Iberiotoxin）和对照组,采用显微荧光测钙法,观察Iberiotoxin对高钾条件下神经细胞游离钙浓度的影响.结果 静息条件下,Iberiotoxin灌流（100 nmmol/L）对神经元细胞自发动作电位的频率、游离钙浓度无显著影响.持续去极化电流刺激实验中,Iberiotoxin灌流前动作电位频率为（10.4±3.0）Hz,灌流后为（13.8±3.7）H2（P＜0.05）;Iberiotoxin灌流前游离钙浓度较静息值高（14.21±16.98）nmol/L,灌流1 min后游离钙浓度较静息值高（44.07±34.4）nmol/L,比灌流前显著增加（P＜0.05）.高钾溶液（20 mmol/L KCl）诱导神经元游离钙浓度升高,而Iberiotoxin灌流（100 nmmol/L）则使游离钙浓度进一步显著升高.结论 生理条件下,大电导钾通道不参与神经元游离钙浓度和兴奋性的调节;但在受持续去极化刺激或高钾条件时,阻断大电导钾通道对神经元游离钙浓度和兴奋性具有显著的影响,提示大电导钾通道参与神经细胞游离钙水平的调节,在创伤性脑损伤神经细胞钙超载机制中发挥作用. 展开更多

关键词 脑损伤 神经元 钙 大电导钙激活钾通道

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川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉BKCa通道的影响

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作者 农慧 盛庆寿 +2 位作者 丁胜元 闫福曼 罗荣敬 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期36-39,共4页

目的:研究川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉BKCa通道影响,从离子通道的角度探讨川芎嗪治疗糖尿病血管并发症的可能机制。方法:用链脲佐菌素大剂量单次腹腔注射法造成大鼠糖尿病模型,大鼠随机分为4组:正常组、糖尿病模型组、川芎嗪低剂量... 目的:研究川芎嗪对早期糖尿病大鼠胸主动脉BKCa通道影响,从离子通道的角度探讨川芎嗪治疗糖尿病血管并发症的可能机制。方法:用链脲佐菌素大剂量单次腹腔注射法造成大鼠糖尿病模型,大鼠随机分为4组:正常组、糖尿病模型组、川芎嗪低剂量组和川芎嗪高剂量组。采用腹腔注射给药,正常组和模型组腹腔给予射注射用水,川芎嗪低、高剂量组分别按40mg/kg、80mg/kg给药,用药8周后,处死大鼠。酶分离法获取单个胸主动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳技术记录BKCa电流,计算平均通道开放概率。结果:糖尿病模型组、川芎嗪低、高剂量组的BKCa通道平均开放概率分别是0.20±0.12、0.31±0.24、0.40±0.19高于正常组0.09±0.02(P<0.01),川芎嗪组高于模型组(P<0.01),川芎嗪高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。结论:糖尿病早期胸主动脉的BKCa通道会代偿性的增加开放概率;川芎嗪可提高早期糖尿病大鼠胸主动脉BKCa通道的活性,增加其平均开放概率,可能是其治疗糖尿病血管病变的机制之一。 展开更多

关键词 川芎嗪 糖尿病 BKCA通道

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BK_(Ca)通道的表达降低细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平

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作者 李勃兴 陈明 +2 位作者 黄潋滟 赵苗 高天明 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期454-457,467,共5页

目的探讨BKCa通道对细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的调节作用。方法观察转染 BKCa通道及共转染BKCa通道与v-Src对HEK293细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。比较BKCa通道激动剂NS1619和阻断剂paxilline对培养海马神经元蛋白酪氨酸磷酸化水平... 目的探讨BKCa通道对细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的调节作用。方法观察转染 BKCa通道及共转染BKCa通道与v-Src对HEK293细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。比较BKCa通道激动剂NS1619和阻断剂paxilline对培养海马神经元蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。结果 HEK293细胞表达BKCa通道后细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平降低,同时BKCa通道能够降低转染v-Src 后的细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。BKCa通道激动剂NS1619能够降低海马神经元蛋白酪氨酸磷酸化水平,阻断剂paxilline能增加细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。结论 BKCa通道的表达可以降低细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。 展开更多

关键词 大电导钙激活钾通道 蛋白酪氨酸磷酸化 V-SRC

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子痫前期病人脐血TRPC6和BKCa水平检测及意义

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作者 曹芳 刘福花 +2 位作者 张晓彤 赵龙晓 徐琳 《青岛大学医学院学报》 CAS 2016年第3期306-308,311,共4页

目的研究子痫前期病人新生儿脐血中瞬时受体电位通道6（TRPC6）和大电导钙激活钾离子通道（BKCa）的水平及其与新生儿出生体质量关系,探讨子痫前期病人胎儿生长受限（FGR）发生与TRPC6、BKCa的相关性。方法采用ELISA方法,检测30例轻度... 目的研究子痫前期病人新生儿脐血中瞬时受体电位通道6（TRPC6）和大电导钙激活钾离子通道（BKCa）的水平及其与新生儿出生体质量关系,探讨子痫前期病人胎儿生长受限（FGR）发生与TRPC6、BKCa的相关性。方法采用ELISA方法,检测30例轻度子痫前期、30例重度子痫前期、50例正常妊娠产妇（对照组）新生儿脐血中TRPC6和BKCa水平,并分析其与新生儿体质量关系。结果轻度、重度子痫前期组新生儿脐血TRPC6水平均高于对照组,BKCa水平低于对照组,差异有显著意义（F=6.83、13.27,t=3.05~4.02,P〈0.05）;轻度、重度子痫前期组TRPC6和BKCa水平比较差异无显著性（P〉0.05）。轻度、重度子痫前期组脐血TRPC6水平与新生儿出生体质量呈负相关（r=-0.612、-0.674,P〈0.05）,BKCa水平与新生儿出生体质量呈正相关（r=0.741、0.797,P〈0.05）;对照组脐血TRPC6、BKCa水平与新生儿出生体质量无相关性（P〉0.05）。结论子痫前期病人FGR的发生可能与TRPC6水平升高和BKCa水平降低相关。 展开更多

关键词 先兆子痫 瞬时受体电位通道 大电导钙激活钾离子通道 脐血 胎儿生长迟缓

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血管紧张素II对人肠系膜动脉血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的激活效应

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作者 文静 程俊 +4 位作者 李鹏云 毛亮 岳晓兰 李畅 杨艳 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-46,共8页

本文旨在研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)的影响,探讨AngⅡ在分子水平扩张血管的作用机制。采用单通道膜片钳及全细... 本文旨在研究血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)对人肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)的影响,探讨AngⅡ在分子水平扩张血管的作用机制。采用单通道膜片钳及全细胞穿孔膜片钳技术观察人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa对AngⅡ的反应性;采用RT-PCR技术确定人肠系膜动脉上AngⅡ受体基因的表达情况。在细胞贴附式膜片下(Vm=+40mV),直接加入AngⅡ(100nmol/L),人肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa的活性无明显变化;经AngⅡ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT1R)特异性阻断剂缬沙坦(10μmol/L)预处理后,再分别加入25、100和250nmol/L的AngⅡ,BKCa的开放概率明显增加,呈现出浓度依赖性。缬沙坦预处理后,当加入100nmol/LAngⅡ时,BKCa的开放概率由0.010±0.003增至0.039±0.015,平均关闭时间由(2729.5±808.6)ms减至(487.7±182.5)ms(n=11,P<0.05),但平均开放时间和电流幅值在给药前后无明显变化。BKCa被AngⅡ(100nmol/L)激活后,再加入AngⅡ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AT2R)特异性阻断剂PD123,319,BKCa的活性受到抑制,开放概率由0.016±0.003减至0.004±0.001(n=5,P<0.05),而通道平均开放时间、平均关闭时间和电流幅值在给药前后均无明显变化。另外,将人肠系膜动脉平滑肌细胞经缬沙坦和PD123,319共同处理后再加入AngⅡ(100nmol/L),BKCa的活性无明显变化。在全细胞穿孔膜片钳下,平滑肌细胞经缬沙坦(10μmol/L)预处理后,在测试的电压范围内,AngⅡ(100nmol/L)对膜电位从60mV到+30mV时BKCa电流密度均无明显影响,而在+40、+50和+60mV时,BKCa电流密度分别从(9.03±2.23)pA/pF、(12.88±2.55)pA/pF和(17.26±2.84)pA/pF增加到(12.47±2.22)pA/pF、(18.71±2.51)pA/pF和(27.21±3.12)pA/pF(n=6,P<0.05)。经RT-PCR证实人肠系膜动脉上有AT1R和AT2R这两种AngⅡ受体基因的表达。上述结果提示,AngⅡ对经缬沙坦预处理的人肠系膜动脉平滑肌细胞BK 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 血管紧张素Ⅱ 2型受体 大电导钙激活钾通道 人肠系膜动脉

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穿孔膜片钳记录肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道方法初探

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作者 文静 程俊 杨艳 《西南军医》 2014年第3期254-256,共3页

目的利用穿孔全细胞膜片钳技术以提高记录到稳定的大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance Ca2+-activated K+channels,BKCa)电流的成功率。方法在两性霉素B穿孔全细胞膜片钳下记录大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKC... 目的利用穿孔全细胞膜片钳技术以提高记录到稳定的大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large conductance Ca2+-activated K+channels,BKCa)电流的成功率。方法在两性霉素B穿孔全细胞膜片钳下记录大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa宏观电流和自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)。结果采用两性霉素B穿孔全细胞膜片钳技术,记录到BKCa和STOCs概率明显增加,且可以维持3小时。结论通过穿孔全细胞膜片钳可以记录到稳定的且维持时间长的大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa电流。 展开更多

关键词 穿孔全细胞膜片钳 大电导钙激活钾通道 自发性瞬时外向电流 血管平滑肌细胞

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失血性休克引起大鼠肠系膜动脉平滑肌依钙K^+通道活动改变 被引量：18

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作者 开丽 胡德耀 +2 位作者 王中峰 施玉樑 刘良明 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期291-295,共5页

在由股动脉放血制备的失血性休克大鼠模型急性分离的肠系膜动脉平滑肌细胞上 ,利用膜片箝单通道记录技术观察了血管平滑肌依钙K+通道 (BKCa)的活动。发现在对去甲肾上腺素 (NE)反应性增高的休克代偿期 ,BKCa的开放概率 (Po)和单位电导... 在由股动脉放血制备的失血性休克大鼠模型急性分离的肠系膜动脉平滑肌细胞上 ,利用膜片箝单通道记录技术观察了血管平滑肌依钙K+通道 (BKCa)的活动。发现在对去甲肾上腺素 (NE)反应性增高的休克代偿期 ,BKCa的开放概率 (Po)和单位电导都显著较正常动物的低 ,Po 的改变主要是由通道的慢关闭时间常数 (τcs)增大引起关闭时间延长所致 ;而处于对NE反应性降低的休克失代偿期 ,BKCa的Po 和单位电导都高于正常动物 ,Po的变化也主要是τcs减小所致。 展开更多

关键词 失血性休克 去甲肾上腺素 反应性 大电导钙激活钾通道 血管平滑肌细胞 肠系膜动脉

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