鲤疱疹病毒3型研究进展 被引量：21

1

作者 郑树城 王庆 +5 位作者 李莹莹 曾伟伟 王英英 刘春 梁红茹 石存斌 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期108-120,共13页

鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)是引起高度传染性锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的病原,该病毒自1997年首次报道以来,在全球多个国家传播、流行,范围覆盖亚洲、欧洲、北美及非洲多个国家,给鲤鱼及锦鲤养... 鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)是引起高度传染性锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的病原,该病毒自1997年首次报道以来,在全球多个国家传播、流行,范围覆盖亚洲、欧洲、北美及非洲多个国家,给鲤鱼及锦鲤养殖业造成无可估量的经济损失。本文就鲤疱疹病毒3型的病原学、流行病学、感染机制、诊断及防控等方面的研究进行简要综述,以期为鲤疱疹病毒3型基础研究和疾病防控策略的建立提供参考信息。 展开更多

关键词 鲤疱疹病毒3型(CyHV-3) 锦鲤疱疹病毒(khv) 锦鲤疱疹病毒病(khvD) 异疱疹病毒

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锦鲤疱疹病毒的检测与人工感染试验 被引量：14

2

作者 周永灿 袁军法 +3 位作者 任武泽 刘荭 江育林 石正丽 《武汉大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S2期249-252,共4页

基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测... 基于在美国和以色列普通鲤鱼和锦鲤中分离了一种新的疱疹病毒,命名为锦鲤疱疹病毒(KHV)或鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV).本文根据GenBank登记的KHV序列设计了两对特异性引物,在我国患病的锦鲤样品中检测到该类病毒DNA.经对PCR产物进行克隆测序,结果表明与GenBank登记序列完全一致.用组织匀浆上清人工感染健康锦鲤,并从试验感染鱼组织中检测到KHV病毒DNA.该结果表明KHV或CNGV已经传播到我国,应引起重视. 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) 鲤鱼肾炎鳃坏死病毒(CNGV) 人工感染 PCR检测

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锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白基因的PCR扩增与序列分析 被引量：12

3

作者 谭爱萍 邹为民 +6 位作者 赵飞 姜兰 陈信廉 劳海华 简清 陆小萏 罗理 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期880-884,共5页

为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段。将所得基因片段... 为了进一步研究锦鲤疱疹病毒主要囊膜蛋白(KHV-MEP)的功能及锦鲤疱疹病毒(KHV)的感染机制,根据KHV-MEP基因序列设计并合成1对引物,从自然感染KHV发病的锦鲤(Cyprinus carpio Koi)肝组织总DNA中扩增获得特异性基因片段。将所得基因片段克隆到pMD18-T Simple Vector载体中,获得重组质粒T-KMEP;酶切鉴定后进行序列测定,并采用氨基酸亲水性分析软件TMpred对其编码氨基酸序列进行分析;在对该片段所编码氨基酸可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,获得重组表达载体pBV-KMEP1和pBV-KMEP2。所获得的基因片段大小为771bp,该基因片段与GenBank中已登录的KHV-MEP基因(AB178537)的同源性为100%,是一个完整的开放阅读框,所编码的蛋白由256个氨基酸组成,分子量为28.2kD,等电点(PI)为8.65。该序列含有4个跨膜区,可构成主要抗原决定簇。结果显示所获得的目的基因片段就是锦鲤主要囊膜蛋白全基因。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒 主要囊膜蛋白基因 序列分析 原核表达载体

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锦鲤疱疹病毒潜伏感染实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：6

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作者 陈俊杰 李媛媛 +4 位作者 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期310-314,共5页

为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立... 为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的鱼中得到的15份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;30份无任何临床症状鱼中的6份被检测为阳性,阳性率为20%。本试验中建立的水生动物疱疹病毒潜伏感染快速检测方法,可为潜伏感染KHV的临床检测提供一种快速、敏感和特异的检测手段,可为KHVD的分子流行病学调查和预防提供参考。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) 潜伏感染 实时荧光定量PCR(Real—TimePCR)

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四川地区一株锦鲤疱疹病毒的分离鉴定及系统进化分析 被引量：5

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作者 陈俊杰 李媛瑗 +5 位作者 阳瑞雪 汪开毓 耿毅 黄小丽 陈德芳 欧阳萍 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期141-148,共8页

2015年5月,四川某鲤养殖场暴发一种传染性疾病,导致鲤大面积死亡,死亡率高达80%。为研究此次疾病病因和流行规律,将病料进行解剖、细菌学检查、病理组织观察、PCR鉴定、病毒分离和系统进化分析。结果显示,发病鱼眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出... 2015年5月,四川某鲤养殖场暴发一种传染性疾病,导致鲤大面积死亡,死亡率高达80%。为研究此次疾病病因和流行规律,将病料进行解剖、细菌学检查、病理组织观察、PCR鉴定、病毒分离和系统进化分析。结果显示,发病鱼眼球凹陷,胸鳍及腹鳍出现出血斑,病鱼鳃严重坏死,肾脏肿大。细菌检查为阴性。组织病理学观察,病变最明显的是鳃和肾脏。病鱼鳃丝血管扩张充血,鳃小片呼吸上皮细胞肿胀、脱落。鳃丝基部的上皮细胞大量增生,层次增多。肾小管上皮细胞组织结构紊乱,细胞肿胀,管腔变狭小,有崩裂和坏死现象。提取病鱼的肾脏和鳃组织DNA为模板,针对世界动物卫生组织(OIE)推荐的检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的Sph基因进行PCR检测,出现特异性扩增产物。将病鱼的肾脏和肝脏组织研磨过滤灭菌后,腹腔注射20尾健康鲤,实验组表现为急性死亡(累积死亡率为90%),出现与自然发病鱼相同的症状。将组织匀浆接种到普通鲤脑细胞系(CCB),盲传3代后可稳定地观察到典型的细胞病变。细胞培养物染色超薄切片电镜观察结果显示,病毒为有囊膜的球状,病毒粒子直径为180~200 nm。对分离株的TK基因全长序列进行系统发育分析,证实该毒株属于KHV亚洲1型毒株。本研究首次报道我国西南地区养殖鲤中KHV感染引起大面积死亡,为KHV起源进化、分类以及疾病诊断和防控提供重要依据。 展开更多

关键词 鲤 鲤疱疹病毒 鲤疱疹病毒III型(Cy HV-3) 分离鉴定 系统进化分析

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锦鲤疱疹病毒减毒株的筛选及免疫原性研究 被引量：1

6

作者 王好 刘丽凡 +3 位作者 于丹 王友超 周井祥 刘艳辉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期171-174,297,298,共6页

为了致弱锦鲤疱疹病毒得到减毒株,试验采用细叶桉叶的提取液与病毒在细胞中共培养来致弱病毒,并以中和抗体试验检验弱毒株的免疫原性。结果表明:利用获得的减毒株在加强免疫42天时,抗锦鲤疱疹病毒中和抗体效价达到最高水平,同时灭活病... 为了致弱锦鲤疱疹病毒得到减毒株,试验采用细叶桉叶的提取液与病毒在细胞中共培养来致弱病毒,并以中和抗体试验检验弱毒株的免疫原性。结果表明:利用获得的减毒株在加强免疫42天时,抗锦鲤疱疹病毒中和抗体效价达到最高水平,同时灭活病毒免疫组的抗锦鲤疱疹病毒中和抗体水平低于KHV-P_(52)免疫组,PBS对照组未检测出抗锦鲤疱疹病毒的中和抗体,两个免疫组与对照组比较差异显著(P<0.05);KHV-P52免疫组对鲤鱼的免疫保护效果好,免疫保护率为100%。说明细叶桉叶提取液能有效致弱锦鲤疱疹病毒,通过试验获得了一株锦鲤疱疹病毒弱毒株。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) 锦鲤疱疹病毒病(khvD) 减毒株 免疫原性 细叶桉叶 中和抗体

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鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

7

作者 张文 徐立蒲 +4 位作者 吕晓楠 王小亮 曹欢 王姝 王静波 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期889-895,共7页

为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,C... 为了建立可同时检测鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)和锦鲤疱疹病毒(Kio herpesvirus,KHV)的检测方法,本研究根据CEV P4a基因保守序列,对英国环境、渔业水产养殖研究中心(Center for Environment,Fisheries and Aquaculture Science,CEFAS)设计合成的引物序列进行优化,合成1对特异性引物和1条用FAM荧光基团标记的TaqMan探针;根据KHV ORF7基因保守序列,设计筛选1对特异性引物和1条用VIC荧光基团标记的TaqMan探针。优化反应条件,建立了CEV和KHV双重实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法特异性强,与其它水生动物病毒无交叉反应;灵敏度高,对CEV和KHV的检测限均为15拷贝数/μL;组内重复与组间重复的平均变异系数小于3%。本研究建立的方法具有快速、特异、敏感等优点,可用于CEV和KHV的快速检测。 展开更多

关键词 鲤浮肿病毒(CEV) 锦鲤疱疹病毒(khv) 双重实时荧光定量PCR

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锦鲤疱疹病毒保存方法的筛选及比较 被引量：2

8

作者 李莹莹 曾伟伟 +5 位作者 王英英 潘厚军 刘春 石存斌 吴淑勤 王庆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第11期1154-1158,共5页

目的筛选并比较锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的保存方法。方法将患锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的患病鱼组织分别采用-80℃超低温保存法、液氮超低温保存法、50%磷酸甘油缓冲液保存法、乙醇保存法及异丙醇保存... 目的筛选并比较锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的保存方法。方法将患锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease,KHVD)的患病鱼组织分别采用-80℃超低温保存法、液氮超低温保存法、50%磷酸甘油缓冲液保存法、乙醇保存法及异丙醇保存法保存90 d,进行PCR鉴定,同时检测不同方法保存的患病组织对感染健康鱼及CCB细胞的影响。用KHV感染CCB细胞后,收集病毒液,分别于4、-20、-80℃及液氮中存放90 d,检测病毒感染力(TCID50)。结果 5种方法保存的患病鱼组织经PCR检测均为KHV阳性。于50%磷酸甘油缓冲液、乙醇及异丙醇中保存的患病鱼组织失去了感染健康鱼的能力,而于-80℃及液氮中保存的患病鱼组织均可使健康锦鲤感染KHV;仅保存于50%磷酸甘油缓冲液中的患病鱼组织可感染CCB细胞。于4及-20℃保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力分别下降61%和50%,而于-80℃及液氮中保存的CCB细胞病毒液的病毒感染力仅下降7%。结论利用-80℃及液氮超低温保存法可长期保存患病组织病料和细胞病毒液,于50%磷酸甘油缓冲液保存的组织病料有利于进行病毒的细胞分离。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒 CCB细胞 保存

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鲤浮肿病毒混合感染的监测与分析 被引量：2

9

作者 王姝 徐立蒲 +4 位作者 王小亮 张文 王静波 曹欢 张利峰 《检验检疫学刊》 2018年第4期6-9,共4页

在鲤浮肿病毒(Carp Edema virus,CEV)的流行病学监测时,经常发现在CEV感染病例中混合感染了鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV)或锦鲤疱疹病毒(Koi Herpes Virus,KHV)的情况,为探讨这一现象,本研究对93份流行病学监... 在鲤浮肿病毒(Carp Edema virus,CEV)的流行病学监测时,经常发现在CEV感染病例中混合感染了鲤春病毒血症病毒(Spring Viraemia of Carp Virus,SVCV)或锦鲤疱疹病毒(Koi Herpes Virus,KHV)的情况,为探讨这一现象,本研究对93份流行病学监测样品同时进行了CEV、SVCV和KHV的检测。结果发现CEV阳性50份,其中有5份样品存在混合感染,4份是CEV和SVCV的混合感染,1份是CEV和KHV的混合感染。混合感染病例占CEV感染病例的10%,且发生混合感染鱼的死亡率明显高于CEV单独感染。为进一步分析和验证混合感染情况,在安徽混合感染发病渔场取病鱼20尾,逐条检测,发现有5尾鱼混合感染CEV和SVCV,2尾鱼单独感染CEV,无单独感染SVCV的鱼。以上结果提示感染CEV的病鱼可混合感染SVCV或KHV,SVCV或KHV在CEV的致病过程中起协同作用。 展开更多

关键词 鲤浮肿病毒 混合感染 鲤春病毒 锦鲤疱疹病毒

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鲤疱疹病毒3型T分离株主要免疫原性蛋白的鉴定 被引量：1

10

作者 郑树城 王庆 +4 位作者 李莹莹 王英英 曾伟伟 任燕 石存斌 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2018年第2期68-72,共5页

为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio ha... 为了鉴定鲤疱疹病毒3型(Cyprinid Herpesvirus 3,CyHV-3)主要免疫原性蛋白,研究采用CyHV-3-T分离株感染CCB细胞系,运用蔗糖密度梯度超速离心方法对CyHV-3进行纯化,纯化的病毒颗粒经SDSPAGE和考马斯亮蓝染色后,用锦鲤(Cyprinus carpio haematopterus)抗CyHV-3阳性血清进行Western blotting分析和液相色谱串联质谱鉴定。结果表明,透射电镜下可观察到大量完整囊膜包裹或只有裸露核衣壳的CyHV-3颗粒,Western blotting结果显示抗CyHV-3阳性血清与多种病毒蛋白具有明显特异性免疫反应,质谱鉴定表明其中4种免疫原性蛋白分别为ORF92、ORF66、ORF72和ORF81,其中ORF66和ORF72为首次鉴定的具有免疫原性衣壳蛋白。本研究将为CyHV-3血清学诊断方法的建立、亚单位疫苗或DNA疫苗的研制提供更多候选抗原。 展开更多

关键词 鲤疱疹病毒3型 锦鲤疱疹病毒 免疫原性 免疫蛋白质组学 衣壳蛋白

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锦鲤疱疹病毒-CJ株ORF136基因的克隆及生物信息学分析

11

作者 刘春杰 杨丽华 +1 位作者 王好 周井祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期172-174,290,共4页

为了了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF136蛋白的结构特征和进化关系,试验用锦鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取DNA,经PCR扩增获得ORF136基因,将其克隆到p MD18-T载体中构建重组质粒,应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF136基因的... 为了了解锦鲤疱疹病毒中国吉林株(KHV-CJ)ORF136蛋白的结构特征和进化关系,试验用锦鲤尾鳍原代细胞增殖KHV-CJ,提取DNA,经PCR扩增获得ORF136基因,将其克隆到p MD18-T载体中构建重组质粒,应用生物信息学方法初步分析KHV-CJ ORF136基因的结构和功能,并与Gen Bank上已公布的KHV进行比较。结果表明:ORF136有2个跨膜区;抗原表位预测显示,抗原性良好;结构预测显示,可能存在1个潜在的N-糖基化位点和19个潜在的O-糖基化位点;BLAST比对分析显示,KHV-CJ ORF136与KHV-U ORF136和KHV-I ORF136的亲缘关系最近,与KHV-GZ11ORF136的亲缘关系较近,与KHV-GZ10 ORF136、KHV-QY08 ORF136和KHV-J ORF136亲缘关系最远,KHV-CJ可能来源于欧美国家和以色列。说明ORF136基因可能具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 锦鲤疱疹病毒(khv) ORF136基因 生物信息学分析 克隆 免疫原性 吉林株

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鲤疱疹病毒3型焦磷酸测序检测方法的建立

12

作者 郑树城 王庆 +4 位作者 李莹莹 曾伟伟 王英英 刘春 石存斌 《生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期95-98,共4页

为了针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)建立一种基于焦磷酸测序技术的高通量、自动化、快速的检测方法,根据Cy HV-3 ORF55、ORF79和ORF92基因保守区域设计特异性PCR扩增引物和测序引物,进行PCR扩增筛选扩增效率最高的... 为了针对鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,Cy HV-3)建立一种基于焦磷酸测序技术的高通量、自动化、快速的检测方法,根据Cy HV-3 ORF55、ORF79和ORF92基因保守区域设计特异性PCR扩增引物和测序引物,进行PCR扩增筛选扩增效率最高的引物。PCR灵敏性和特异性试验结果显示,针对ORF79设计的引物扩增效率最高,最低检测量为100个拷贝数,且能特异性识别Cy HV-3;将PCR产物进行焦磷酸测序,获得的序列经BLAST比对显示与Cy HV-3-U、I、J和GZ11分离株一致性均为100%。该检测方法方便快速,适用于出入境口岸大批量样品Cy HV-3诊断检测。 展开更多

关键词 鲤疱疹病毒3型 锦鲤疱疹病毒 焦磷酸测序 检测

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