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kdm4A在斑马鱼细胞低温胁迫过程中的作用
被引量：
2
1
作者
刘玮
罗军涛
+3 位作者
谢婷婷
燕晓霞
张俊芳
韩兵社
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期4467-4474,共8页
赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(lysine demethylase 4A,kdm4A)编码的蛋白具有去甲基化酶活性,并且在基因表达调控中起重要作用。该基因在斑马鱼中有两种类型kdm4aa和kdm4ab。本实验室前期对18℃低温胁迫下斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤...
赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(lysine demethylase 4A,kdm4A)编码的蛋白具有去甲基化酶活性,并且在基因表达调控中起重要作用。该基因在斑马鱼中有两种类型kdm4aa和kdm4ab。本实验室前期对18℃低温胁迫下斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryos fibroblast like cell line,ZF4)的转录组数据分析发现kdm4aa表达量显著降低,但是该基因在鱼类低温胁迫下的作用仍不清楚。为了研究这两种基因在鱼类低温胁迫下的功能,本研究用EcoRⅠ和AgeⅠ酶切构建了pLKO.1-kdm4aa-shRNA、pLKO.1-kdm4ab-shRNA和pLKO.1-negative control(nc)三种重组质粒,并分别与慢病毒包装质粒pCMV-DR8.9.1、pCMV-VSVG共同转染至293T细胞中,经293T细胞包装的病毒,感染斑马鱼ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中kdm4aa和kdm4ab均成功被敲降。随后将细胞于28℃培养(Control)或经18℃低温处理1 d,使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内自噬相关基因beclin1和LC3的表达情况。结果显示:在18℃条件下,敲降kdm4aa的细胞与nc组细胞相比存活率显著上升(p<0.05),而敲降kdm4ab的细胞存活率与nc组相比无明显变化,证明敲降kdm4aa在低温胁迫下保护细胞。进一步的研究发现,敲降kdm4aa的细胞内自噬相关基因beclin1及LC3的表达量均显著上调,而敲降kdm4ab的细胞变化不显著,提示敲降kdm4aa在低温胁迫下对斑马鱼细胞的保护作用可能是通过上调自噬水平引起的。该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究提供新的思路。
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关键词
kdm
4
aa
和
kdm
4
ab
存活率
ZF
4
细胞
低温胁迫
自噬
原文传递
题名
kdm4A在斑马鱼细胞低温胁迫过程中的作用
被引量：
2
1
作者
刘玮
罗军涛
谢婷婷
燕晓霞
张俊芳
韩兵社
机构
上海海洋大学
上海海洋大学
上海海洋大学中国科学技术部
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第10期4467-4474,共8页
基金
国家自然科学基金项目(81770165)
上海市教育委员会"东方学者"计划支持项目(31372516)
+1 种基金
上海市自然科学基金项目(13ZR1419500)
上海市人才发展资金项目(201457)共同资助。
文摘
赖氨酸特异性去甲基化酶4A基因(lysine demethylase 4A,kdm4A)编码的蛋白具有去甲基化酶活性,并且在基因表达调控中起重要作用。该基因在斑马鱼中有两种类型kdm4aa和kdm4ab。本实验室前期对18℃低温胁迫下斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维样细胞(zebrafish embryos fibroblast like cell line,ZF4)的转录组数据分析发现kdm4aa表达量显著降低,但是该基因在鱼类低温胁迫下的作用仍不清楚。为了研究这两种基因在鱼类低温胁迫下的功能,本研究用EcoRⅠ和AgeⅠ酶切构建了pLKO.1-kdm4aa-shRNA、pLKO.1-kdm4ab-shRNA和pLKO.1-negative control(nc)三种重组质粒,并分别与慢病毒包装质粒pCMV-DR8.9.1、pCMV-VSVG共同转染至293T细胞中,经293T细胞包装的病毒,感染斑马鱼ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中kdm4aa和kdm4ab均成功被敲降。随后将细胞于28℃培养(Control)或经18℃低温处理1 d,使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内自噬相关基因beclin1和LC3的表达情况。结果显示:在18℃条件下,敲降kdm4aa的细胞与nc组细胞相比存活率显著上升(p<0.05),而敲降kdm4ab的细胞存活率与nc组相比无明显变化,证明敲降kdm4aa在低温胁迫下保护细胞。进一步的研究发现,敲降kdm4aa的细胞内自噬相关基因beclin1及LC3的表达量均显著上调,而敲降kdm4ab的细胞变化不显著,提示敲降kdm4aa在低温胁迫下对斑马鱼细胞的保护作用可能是通过上调自噬水平引起的。该研究为后期斑马鱼低温胁迫分子机制的研究提供新的思路。
关键词
kdm
4
aa
和
kdm
4
ab
存活率
ZF
4
细胞
低温胁迫
自噬
Keywords
kdm
4
aa
and
kdm
4
ab
Survival
rate
ZF
4
cells
Low
temperature
stress
Autophagy
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
kdm4A在斑马鱼细胞低温胁迫过程中的作用
刘玮
罗军涛
谢婷婷
燕晓霞
张俊芳
韩兵社
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
原文传递
已选择
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