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一种基于荧光微球标记的卡那霉素免疫层析定量方法的建立 被引量：4
1
作者 徐飞 周洁 +3 位作者 吴超 王建芬 丁双阳 李秀波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第21期4358-4365,共8页
[目的]卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药... [目的]卡那霉素是一种在奶牛兽医临床常用药物,其在牛奶中的残留不容忽视。荧光微球作为一种新型的荧光示踪物,近年来在小分子快速检测方面呈现出独特的优势,试验开展了卡那霉素荧光微球免疫层析定量方法的研究,旨在为牛奶中卡那霉素药物的快速筛选提供新型有效的检测手段。[方法]采用戊二醛法和过碘酸钠法制备了两种卡那霉素的包被抗原(KANA-GA-OVA1、KANA-I2-OVA2),抗卡那霉素的单克隆抗体通过蛋白G免疫亲和柱进行纯化后,采用碳二亚胺法与荧光微球进行了共价偶联,成功制备了抗体-荧光微球标记物。免疫层析试纸条方法采用微孔测定法。包被卡那霉素包被抗原的NC膜作为固相载体,荧光微球标记的单克隆抗体与样品混合,在微孔膜的毛细管作用下,包被抗原和待测样本中的药物来共同竞争有限的单克隆抗体,通过荧光测定包被抗原结合的抗体量来评价待测样本中卡那霉素药物的含量。[结果]灵敏度试验表明,微孔中加入0、6.25、12.5、25、50、100、200μg·L-17个浓度梯度的标准品溶液,卡那霉素药物浓度的增加,试纸条T线的荧光强度逐渐减弱,呈现抑制状态,以无标准品抑制的荧光峰高值为F0值,相应浓度标准品抑制时的荧光峰高值为F值,以F/F0为纵坐标,以标准品浓度为横坐标,绘制标准曲线。利用Originpro 8.0软件拟合,曲线符合四参数方程,R2为0.9998,IC50值为24.8μg·L-1,线性范围(以20%—80%抑制率对应的浓度计算)为9.5—100μg·L-1,最低检出限(以10%抑制率对应的浓度计算)为5μg·L-1。准确度和精密度试验表明,以25、50和100μg·L-13个浓度添加水平,平均添加回收率为78.4%—92.7%,批内变异系数为10.8%—12.4%,符合残留检测的需求。特异性试验表明,试验建立的卡那霉素荧光微球免疫层析方法对其他常见的氨基糖苷类药物的交叉反应率均<1%,说明方法特异性良好。[结论]� 展开更多
关键词 荧光微球 免疫层析 卡那霉素 残留 牛奶
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HPLC法测定人用皮卡狂犬病疫苗和皮卡佐剂中硫酸卡那霉素的含量 被引量：4
2
作者 薛晶 崔学文 胡昌勤 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1911-1913,共3页
目的:建立测定人用皮卡狂犬病疫苗和皮卡佐剂中硫酸卡那霉素含量的HPLC方法。方法:色谱柱为CAPCELL PAKC8 DD(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为磷酸二氢钾缓冲液(0.02 mol.L-1,pH 7.5)-甲醇-乙腈(23∶7∶40);流速为1.0mL.min-1;柱温... 目的:建立测定人用皮卡狂犬病疫苗和皮卡佐剂中硫酸卡那霉素含量的HPLC方法。方法:色谱柱为CAPCELL PAKC8 DD(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为磷酸二氢钾缓冲液(0.02 mol.L-1,pH 7.5)-甲醇-乙腈(23∶7∶40);流速为1.0mL.min-1;柱温为45℃;采用柱前衍生化法,衍生化试剂为2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS);检测波长为350 nm。结果:在0.01～1.0 mg.mL-1范围内,硫酸卡那霉素的浓度与峰面积呈现良好的线性关系(A=3×106C-3313.9,r=1.000,n=7);在80%,100%,120%3个浓度下的平均回收率(n=3)分别为82.5%(RSD=1.6%),90.3%(RSD=2.0%),81.6%(RSD=1.8%);方法的最低检测限为0.41μg.mL-1;最低定量限为1.39μg.mL-1;供试品溶液在8 h内稳定(RSD=1.1%)。结论:本方法准确、快速,通用性良好。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗 皮卡佐剂 硫酸卡那霉素 生物制品 抗生素残留 高效液相色谱法
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结核DNA疫苗中卡那霉素残留的半定量检测法的建立及验证 被引量：3
3
作者 李婷 谭奇凤 +7 位作者 杨丽菲 孔雯雯 倪世明 黄明 梁艳 吴雪琼 伊君梅 田园 《今日药学》 CAS 2021年第9期678-681,共4页
目的用半定量法检测结核DNA疫苗中卡那霉素残留量。方法优化酶联免疫吸附法,验证该方法的准确度、中间精密度、专属性和耐用性。结果该方法能通过吸光度值的比较,判断供试品的含量,平均加样回收率为117%,准确度符合要求,其中间精密度符... 目的用半定量法检测结核DNA疫苗中卡那霉素残留量。方法优化酶联免疫吸附法,验证该方法的准确度、中间精密度、专属性和耐用性。结果该方法能通过吸光度值的比较,判断供试品的含量,平均加样回收率为117%,准确度符合要求,其中间精密度符合要求。卡那霉素和其他3种相同浓度的抗生素(氨苄西林、庆大霉素、四环素)吸光度值相比,阳性率<1%,无交叉反应。当孵育温度和时间改变时,结果的RSD值均<20%。结论建立的方法有较好的准确性、中间精密度、专属性和耐用性,可用于结核DNA疫苗中卡那霉素残留量的检测。 展开更多
关键词 抗生素残留 半定量法 酶联免疫吸附法 验证
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应用ELISA检测注射用重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白中卡那霉素残留量 被引量：2
4
作者 常翠云 崔颖 +1 位作者 李晓然 齐连权 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期328-332,共5页
目的:建立灵敏度更高的ELISA方法检测卡那霉素残留量并进行方法学验证,用于重组生物制品的质量控制。方法:采用直接竞争ELISA方法,样品中残留的卡那霉素将和酶标抗原竞争酶标板上预包被的卡那霉素抗体,用3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)底物... 目的:建立灵敏度更高的ELISA方法检测卡那霉素残留量并进行方法学验证,用于重组生物制品的质量控制。方法:采用直接竞争ELISA方法,样品中残留的卡那霉素将和酶标抗原竞争酶标板上预包被的卡那霉素抗体,用3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)底物显色,样品吸光值与残留卡那霉素的含量成负相关,用酶标仪进行检测并用Ridasoft Win分析软件进行分析。结果:此方法灵敏度高,在0.2～3.0 ng·mL^(-1)范围内spline拟合良好,且平行复孔RSD小于10%;方法精密度良好,加标回收率在80%～120%之间。应用该方法对1批注射用重组人促血小板生成素模拟肽-Fc融合蛋白(简称TMP-Fc)成品的卡那霉素残留量进行测定,结果表明,每瓶TMP-Fc(250μg)卡那霉素残留量小于0.2 ng。结论:该方法具有灵敏度高、操作便捷、检测迅速等特点,可以用于重组生物制品中卡那霉素残留量的质量控制。 展开更多
关键词 ELISA 卡那霉素 残留量 重组生物制品 质量控制 TMP-Fc
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一种新的卡那霉素残留检测方法 被引量：5
5
作者 周勤华 张毅 杨胜利 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期84-90,共7页
氨基糖苷 3′- O磷酰基转移酶Ⅱa (APH( 3′) -Ⅱa)具有磷酸化卡那霉素的功能 ,通过突变使APH( 3′) Ⅱa的催化活性丧失 ,同时保留与底物卡那霉素结合的功能 ,由此获得的突变型APH( 3′) - Ⅱa具有类似于抗体的特异性结合与识别卡那... 氨基糖苷 3′- O磷酰基转移酶Ⅱa (APH( 3′) -Ⅱa)具有磷酸化卡那霉素的功能 ,通过突变使APH( 3′) Ⅱa的催化活性丧失 ,同时保留与底物卡那霉素结合的功能 ,由此获得的突变型APH( 3′) - Ⅱa具有类似于抗体的特异性结合与识别卡那霉素分子的作用。采用戊二醛交联二步法制备了卡那霉素 辣根过氧化物酶结合物 (Kan HRP) ,把纯化后的APH( 3′) - Ⅱa蛋白包被到 96孔聚苯乙烯板上 ,通过竞争性ELISA的方法建立了一种新的卡那霉素残留检测方法。通过该方法可以检测到卡那霉素的最低残留量为 1 μg ml。 展开更多
关键词 卡那霉素 突变型 转移酶 ELISA 抗体 HRP 糖苷 残留检测 特异性结合 氨基糖
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