等温扩增技术概述及其在动物病原检测中的应用 被引量：10

1

作者 禹兰平 王楷宬 +6 位作者 潘俊慧 张富友 杨文静 周凯钰太 崔成都 孙福亮 王素春 《中国动物检疫》 CAS 2022年第12期96-103,共8页

等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行体外核酸扩增的技术,近几年其研究热度很高。本文从技术原理、优缺点及在动物病原检测应用等方面,对环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶等温扩增技术、依赖核酸序列扩增技术(NASBA)、交叉引物等... 等温扩增技术是一种可以在恒定温度下进行体外核酸扩增的技术,近几年其研究热度很高。本文从技术原理、优缺点及在动物病原检测应用等方面,对环介导等温扩增技术(LAMP)、重组酶等温扩增技术、依赖核酸序列扩增技术(NASBA)、交叉引物等温扩增技术(CPA)和赖解旋酶等温扩增技术(HDA)等5种常见等温扩增技术进行了综述。LAMP技术操作简单,不依赖特殊设备,但引物设计较为复杂,研发多重LAMP检测方法有很大困难。重组酶等温扩增技术不受场地条件约束,扩增时间短,但容易造成气溶胶污染,因此一般用于实验研究。NASBA技术扩增效率高,不易产生污染,但成本偏高,操作相对复杂,在目前疫病检测研究中的应用逐渐减少。CPA技术操作相对简单,灵敏度高,特异性好,但结果判断受主观因素影响易造成假阳性或假阴性。HDA技术引物设计相对简单,但反应体系较为复杂,因此不适合扩增长序列。不同的等温扩增技术需要根据实际需求和场景条件来选择。等温扩增技术作为一种新兴技术具备许多优点,但仍需要不断改进,未来与微流体芯片、纳米金、CRISPR等技术联合应用,将会实现更加快捷、准确、简便的检测,从而为动物疫病检测提供更好的服务。 展开更多

关键词 等温扩增技术 动物病原检测 研究进展

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重组酶聚合酶扩增技术的研究进展 被引量：2

2

作者 沈方园 葛萧 +3 位作者 张晓宇 张郁勃 周慧姿 李恒 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1495-1511,共17页

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术是一种利用重组酶(T4 UvsX)、单链DNA结合蛋白(T4 Gp32)和链置换DNA聚合酶(Bsu)等蛋白在恒温条件下扩增核酸的技术。由于其可以恒温、高效地扩增靶核酸片段,近几年在细... 重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术是一种利用重组酶(T4 UvsX)、单链DNA结合蛋白(T4 Gp32)和链置换DNA聚合酶(Bsu)等蛋白在恒温条件下扩增核酸的技术。由于其可以恒温、高效地扩增靶核酸片段,近几年在细菌、病毒、寄生虫、支原体、衣原体检测方面发挥着独特的作用,逐渐成为床旁检测(point-of-care testing,POCT)的重要技术。本文以RPA技术的原理为起点,对其临床应用、不足之处及改进方法进行阐述,以期为临床疾病的快速检测和诊断方面提供新思路。 展开更多

关键词 重组酶聚合酶扩增技术 等温扩增技术 核酸检测

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分子即时检测研究进展 被引量：5

3

作者 费悦 李建新 +3 位作者 王迪 王志栋 吴枭 高运华 《计量科学与技术》 2023年第5期3-8,共6页

分子即时检测(Point-of-care Test,POCT)是一种快速发展的核酸检验方法,主要基于等温扩增和微流控等技术,具有检验时间短、设备小、操作简单的优点,为“样本进,结果出”的检验需求提供了实现的可能,为新型冠状病毒肺炎等疫情防控和快速... 分子即时检测(Point-of-care Test,POCT)是一种快速发展的核酸检验方法,主要基于等温扩增和微流控等技术,具有检验时间短、设备小、操作简单的优点,为“样本进,结果出”的检验需求提供了实现的可能,为新型冠状病毒肺炎等疫情防控和快速筛查提供了有力支撑。分子POCT诊断产品现可用于检测人乳头瘤病毒、人体免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、淋球菌等病原微生物,具有检测时间短和便携化程度强等特点。但目前该技术还处于产业发展初级阶段,还需要进一步提高分子POCT产品的准确性和一致性,并完善相关质量管理办法和标准,建立标准化验证评价体系。本文综述了基于等温扩增、微流控等原理的分子POCT技术、设备和应用的最新研究进展,并对该技术未来的发展趋势进行了展望。 展开更多

关键词 计量学 分子即时检测 核酸 微流控技术 等温扩增技术 标准物质

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RPA技术在金葡菌检测中的研究进展

4

作者 周宇萱 吴雪梅 宋绍征 《食品安全导刊》 2024年第13期172-174,共3页

金黄色葡萄球菌可以在人体内外寄生或污染食物,导致皮肤溃烂、免疫力下降和食物中毒等一系列症状,对人体健康构成危害。重组酶聚合酶扩增技术具有反应温度低、反应速率快和特异性高的特点,在不需要精密仪器的情况下能够更准确、高效、... 金黄色葡萄球菌可以在人体内外寄生或污染食物,导致皮肤溃烂、免疫力下降和食物中毒等一系列症状,对人体健康构成危害。重组酶聚合酶扩增技术具有反应温度低、反应速率快和特异性高的特点,在不需要精密仪器的情况下能够更准确、高效、快速地检测出金黄色葡萄球菌。本文主要通过综述重组酶聚合酶扩增技术在金葡菌检测中的国内外现状以及其反应机理、引物设计方法等内容,探讨了其中的意义和存在的问题,并展望了该领域未来的发展前景,旨在为公共卫生和食品安全领域提供可行的解决方案。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 重组酶聚合酶扩增技术 等温扩增技术 引物

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新冠病毒实验室常见检测方法 被引量：4

5

作者 余静怡 余方友 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期635-640,共6页

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的呼吸系统疾病,已对全球健康构成重大威胁。鉴于目前无症状感染的出现,且近期出现的Delta新冠变异株传播力强、感染潜伏期短、致病性强、发病进程... 新型冠状病毒肺炎(COVID-19)是由新型严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)引起的呼吸系统疾病,已对全球健康构成重大威胁。鉴于目前无症状感染的出现,且近期出现的Delta新冠变异株传播力强、感染潜伏期短、致病性强、发病进程快等特点,实验室高效诊断技术与方法的重要性日益突出,快速、简便、大规模的检测对控制新冠病毒的传播、患者的管理等方面起到关键作用。本文就SARS-CoV-2的相关实验室检测技术与方法进行综述,为临床医生、公共卫生与感染预防和控制提供诊断支持。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 等温扩增技术 CRISPR-Cas系统 下一代测序 实时荧光定量聚合酶链式反应

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新型等温扩增技术应用于疟原虫等寄生虫快速诊断的研究进展 被引量：2

6

作者 杨俊杰 邬添 +2 位作者 柳成龙 连孟泽 张逸龙 《中国热带医学》 CAS 2022年第9期884-889,共6页

当前常用基于PCR原理的核酸检测技术来检测疟原虫,疟原虫检测方法主要包括镜检法、抗原免疫检测法和核酸检测法等。但由于存在检测时间长、人员和设备要求高等缺点,限制了其在基层的推广应用。特别是基层普遍缺乏经验丰富的专业技术人... 当前常用基于PCR原理的核酸检测技术来检测疟原虫,疟原虫检测方法主要包括镜检法、抗原免疫检测法和核酸检测法等。但由于存在检测时间长、人员和设备要求高等缺点,限制了其在基层的推广应用。特别是基层普遍缺乏经验丰富的专业技术人员和高端仪器设备,此外在极端环境下快速检测大规模样品的需求等对现存疟原虫检测方法造成了挑战。近年来发展起来的等温扩增技术由于具有简便、快速、灵敏性和特异性高等优点,具有潜在的应用前景。本综述介绍了试对各类等温扩增技术的原理、特点和前景等,并在此基础上重点综述重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA)与重组酶介导的等温扩增技术(recombinase-aided isothermal amplification assay, RAA),并提出利用这类重组酶扩增技术,实现常见疟原虫种快速、精确诊断的可能。 展开更多

关键词 疟原虫 核酸检测 等温扩增技术 重组酶扩增

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牛流行热检测方法及疫苗研究现状

7

作者 石亚楠 李小龙 +2 位作者 鲍显伟 王雪妍 许立华 《现代畜牧兽医》 2023年第1期79-83,共5页

牛流行热(BEF)是由牛流行热病毒(BEFV)引起的一种急性、热性、非接触性疾病。BEF发病率高,在世界范围内流行,严重阻碍了各国养牛业的快速发展。迄今为止尚无针对BEF的有效治疗方法,检测和疫苗接种成为防控该病的关键环节。文章对近年来... 牛流行热(BEF)是由牛流行热病毒(BEFV)引起的一种急性、热性、非接触性疾病。BEF发病率高,在世界范围内流行,严重阻碍了各国养牛业的快速发展。迄今为止尚无针对BEF的有效治疗方法,检测和疫苗接种成为防控该病的关键环节。文章对近年来国内外在BEF血清学、分子生物学诊断方法以及灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗等方面的研究成果进行综述,并对不同检测方法和疫苗进行比较,旨在为快速诊断和有效防控BEF提供参考。 展开更多

关键词 牛流行热 牛流行热病毒 聚合酶链式反应 等温扩增技术 基因工程疫苗

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等温扩增技术在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用

8

作者 兰莹 《现代食品》 2015年第19期57-59,共3页

为确定等温扩增技术(LAMP)检测食品金葡球菌效果,试验以PCR方法为对照,重点分析了二者对于金葡菌检测的灵敏度以及人工污染检出限。根据试验结果可得:LAMP方法灵敏度高、特异性强,同时检测速度快、成本较低,可作为常规检测手段应用。

关键词 等温扩增技术 金黄色葡萄球菌 PCR方法

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实时荧光技术在鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法中的应用 被引量：12

9

作者 董嘉文 孙敏华 +3 位作者 李林林 袁建丰 胡奇林 张建峰 《广东农业科学》 CAS 2015年第1期109-112,F0003,共5页

由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies... 由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增DTMUV的RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增。该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 逆转录环介导等温扩增 实时荧光技术

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化妆品中耐热大肠菌群快速检测方法的研究 被引量：11

10

作者 文霞 李彩玲 +3 位作者 刘静霞 杨秀茳 张淑瑶 谢小保 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期410-414,共5页

研究化妆品中耐热大肠菌群快速检测方法。分别采用3M Petrifilm^TM大肠菌群测试片法和环介导等温扩增(Loopmediated isothermal amplification,LAMP)技术检测人工污染化妆品中耐热大肠菌群,并与传统平板检测法进行了比较。结果表明,3M P... 研究化妆品中耐热大肠菌群快速检测方法。分别采用3M Petrifilm^TM大肠菌群测试片法和环介导等温扩增(Loopmediated isothermal amplification,LAMP)技术检测人工污染化妆品中耐热大肠菌群,并与传统平板检测法进行了比较。结果表明,3M Petrifilm^TM大肠菌群测试片法与传统平板检测法比较结果无统计学差异,且操作步骤简便;LAMP技术特异性强,灵敏度可达到2.03 μg/L,且耗时短。3M Petrifilm^TM大肠菌群测试片法和LAMP技术均可用于化妆品中耐热大肠菌群的快速检测。 展开更多

关键词 化妆品 大肠菌群 测试片 环介导等温扩增技术

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利用环介导等温扩增方法快速检测瓜类细菌性果斑病菌和番茄细菌性溃疡病菌 被引量：8

11

作者 吴秀芹 杨樱子 +3 位作者 罗金燕 邱文 安千里 李斌 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1235-1241,共7页

为建立简单、快速和灵敏地检测瓜类细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp. citrulli(Aac)和番茄细菌性溃疡病菌Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis(Cmm)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)... 为建立简单、快速和灵敏地检测瓜类细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp. citrulli(Aac)和番茄细菌性溃疡病菌Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis(Cmm)的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,以Aac的ugpB基因和Cmm的micA基因为靶标,分别设计、合成和筛选特异性引物,摸索和优化各项反应条件和反应体系,成功建立了以钙黄绿素颜色为指示且只需要金属浴恒温反应30～60 min的LAMP扩增体系。特异性分析表明该LAMP方法可以快速检出5株不同的Aac菌株和2株不同的Cmm菌株,其它对照菌株如燕麦嗜酸菌燕麦亚种A. avenae subsp. avenae、丁香假单胞菌Pseudomonas syringae、水稻黄单胞菌水稻致病变种Xanthomonas oryzae pv. oryzae和茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum则呈现阴性反应;引物比目前报道的LAMP引物有更高的DNA样品检测灵敏度,Aac和Cmm的灵敏度分别为1.72×10~2fg/μL和1.26×10~2fg/μL。研究结果表明,所设计的Aac和Cmm引物特异性好、灵敏度高,更有利于从源头上控制这2种检疫性细菌病害的流行和传播。 展开更多

关键词 瓜类细菌性果斑病菌 番茄细菌性溃疡病菌 环介导等温扩增方法 快速检测

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环介导等温扩增技术在快速病原菌检测中的价值 被引量：7

12

作者 陈艳玲 《实用检验医师杂志》 2019年第3期131-133,共3页

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在临床快速检测病原菌中的价值。方法收集德州市夏津县人民医院366例下呼吸道感染患者的痰液标本,进行呼吸道病原菌核酸检测和痰培养,其中呼吸道病原菌核酸检测应用LAMP。比较两种检测方法的病原菌检... 目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP)在临床快速检测病原菌中的价值。方法收集德州市夏津县人民医院366例下呼吸道感染患者的痰液标本,进行呼吸道病原菌核酸检测和痰培养,其中呼吸道病原菌核酸检测应用LAMP。比较两种检测方法的病原菌检测结果和阳性检出率。结果共纳入366份痰液标本。痰培养检出阳性标本72份,阳性率为19.7%;LAMP检出阳性标本175份,阳性率47.8%;LAMP阳性率较痰培养明显升高(χ^2=64.826,P<0.01)。痰培养方法共检出108株致病菌株,其中革兰阴性(G^-)杆菌为86株(占79.6%),革兰阳性(G^+)球菌22株(占20.4%);LAMP共检出236株致病菌株,其中G^-杆菌168株(占71.2%),G^+球菌68株(占28.8%);两种检测方法均未检出嗜麦芽窄食单胞菌和肺炎支原体。结论LAMP采用等温扩增微阵列基因芯片技术,操作简便快速,可同时对痰液中13种临床常见呼吸道病原菌进行定性检测具有较高检出率,有一定的临床应用价值。 展开更多

关键词 下呼吸道感染 病原菌 痰培养 环介导等温扩增技术

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重组酶介导的多重核酸等温扩增法鉴别细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫技术的建立与应用 被引量：6

13

作者 周鸿让 茅光耀 +5 位作者 王晓玲 陈木新 余晴 王莹 艾琳 肖宁 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期310-316,共7页

目的建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA)。方法以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法。分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00... 目的建立一种快速检测细粒棘球绦虫G1(EgG1)与多房棘球绦虫(Em)DNA的重组酶介导的多重核酸等温扩增方法(mRAA)。方法以EgG1和Em线粒体基因作为靶序列,设计特异性引物,建立快速检测棘球绦虫的mRAA方法。分别扩增浓度为10.00、5.00、1.00、0.50、0.10、0.05、0.01 ng/μl棘球绦虫基因组DNA及10^5、10^4、10^3、10^2、10个拷贝/μl的pMD19-T(Simple)克隆质粒,评价mRAA方法的敏感性;分别以牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA为模板,评价mRAA方法的特异性。采用优化后的m RAA方法,分别对3份EgG1和Em混合模拟犬粪样、19份现场采集的棘球绦虫感染动物肝脏组织(10份EgG1感染、9份Em感染)、7份现场采集的棘球绦虫阳性犬粪(5份EgG1感染、2份Em感染)进行检测,验证m RAA方法的可靠性和实用性。结果建立的mRAA方法可特异性扩增EgG1和Em线粒体基因片段,长度分别约为250 bp、500 bp。mRAA方法对EgG1和Em基因组DNA的最低检测限为2 pg/μl,对EgG1和Em重组质粒的最低检测限为200个拷贝/μl。mRAA方法对牛带绦虫、亚洲带绦虫、多头带绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫、毛首鞭形线虫、蓝氏贾第鞭毛虫、肝片形吸虫、卫氏并殖吸虫、大片形吸虫以及华支睾吸虫基因组DNA的扩增结果均为阴性。mRAA方法成功检出所有EgG1和Em混合模拟犬粪样、棘球绦虫感染动物肝脏组织、棘球绦虫阳性犬粪样,且检测结果与mPCR一致。结论建立的mRAA方法可用于EgG1和Em DNA的快速检测,敏感性、特异性和可靠性均较好。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫G1 多房棘球绦虫 重组酶介导的核酸等温扩增 多重扩增

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环介导等温扩增技术作为基因快速诊断方法的研究与展望 被引量：6

14

作者 袁向芬 吕继洲 +2 位作者 吴绍强 王巧黎 赵宏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期64-70,共7页

环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型分子诊断技术,具有灵敏度高、反应快速等优点,且仅利用简单的恒温水浴设备即可实现对特异性靶基因的高效扩增,在分子诊断领域具有巨大潜力。近几年来LAMP技术在分子诊断领域的研究非常广泛,涉及细菌... 环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新型分子诊断技术,具有灵敏度高、反应快速等优点,且仅利用简单的恒温水浴设备即可实现对特异性靶基因的高效扩增,在分子诊断领域具有巨大潜力。近几年来LAMP技术在分子诊断领域的研究非常广泛,涉及细菌、病毒、寄生虫的检测及食品转基因成分检验等诸多方面,受到越来越多学者认可,有研究者认为其可作为PCR的替补技术应用于临床基因诊断工作中。然而由于目前该技术缺乏规范化且成熟配套的上下游技术措施,如快速简单的核酸抽提技术、完善的应用体系和方案、防止交叉污染的有效措施及小型便携的检测设备等,因此在现场即时诊断领域的推广应用较为缓慢。为发挥利用LAMP技术在快速基因诊断方面的优越性,科研人员针对LAMP技术开发应用存在的问题开展了大量研究工作。立足于临床基因快速诊断的技术需求,对影响LAMP技术应用的核酸物质的快速抽提、LAMP检测体系的优化完善、结果判定、假阳性结果的规避、结果确诊及现场诊断一体化平台设计应用等领域的发展现状、需要攻克的难点及未来的应用展望进行综述,以期为未来的研究和开发指明方向,促进LAMP技术的不断完善及临床推广应用。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 初筛技术 现场即时诊断

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环介导恒温扩增技术快速检测幽门螺杆菌方法的建立及评价 被引量：6

15

作者 齐诗蕊 陈俊 +5 位作者 李环 栾哲 李丛勇 王聪 袁静 孙刚 《解放军医学院学报》 CAS 2018年第3期223-227,共5页

目的建立基于DNA环介导恒温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)的快速检测幽门螺杆菌的方法,并对该方法的灵敏度及特异度加以验证。方法以幽门螺杆菌尿素酶B基因(Ure B基因)为靶序列设计5套特异性引物,... 目的建立基于DNA环介导恒温核酸扩增技术(loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)的快速检测幽门螺杆菌的方法,并对该方法的灵敏度及特异度加以验证。方法以幽门螺杆菌尿素酶B基因(Ure B基因)为靶序列设计5套特异性引物,通过比较各引物的扩增效率筛选出最佳引物组合用以快速检测幽门螺杆菌;收集临床标本,以13C呼气试验为金标准验证LAMP法检测胃液中幽门螺杆菌的灵敏度及特异度。结果幽门螺杆菌反应最佳引物组合为HPUB3,反应均在60 min内完成;应用LAMP法对80例胃液样本中幽门螺杆菌进行检测,其准确率为98.75%,灵敏度为97.06%,特异度为100%,与13C呼气试验结果无统计学差异(P>0.05)。结论 LAMP法检测幽门螺杆菌用时少且灵敏度、特异度均较高。本研究为实现胃镜下同步、无创、快速检测幽门螺杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 环介导恒温核酸扩增法 幽门螺杆菌 实验室技术

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猪圆环病毒1型LAMP检测方法的建立及初步应用 被引量：6

16

作者 田瑶 李佳昕 +9 位作者 杨莹 王硕 时建立 彭喆 李琛 徐绍建 吴晓燕 刘畅 韩红 李俊 《山东农业科学》 北大核心 2021年第3期127-131,共5页

为建立猪圆环病毒1型(PCV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为现场诊断提供技术支持,本试验根据GenBank公布的PCV1全基因组序列,在其保守区设计了4条特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,首次建... 为建立猪圆环病毒1型(PCV1)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为现场诊断提供技术支持,本试验根据GenBank公布的PCV1全基因组序列,在其保守区设计了4条特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,首次建立了PCV1的LAMP检测方法。结果表明,62℃水浴60min为最佳反应条件;LAMP的检出限为1×10^(1)copies/μL,普通PCR最低检测限为1×10^(3)copies/μL;对猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)进行扩增,结果显示为阴性;应用该方法对103个临床疑似病料进行检测,阳性率为34.0%(35例),普通PCR阳性率为29.1%(30例),两种检测方法符合率为89.5%。本试验为PCV1临床检测提供了一种特异、快速、成本低廉的方法。 展开更多

关键词 猪圆环病毒1型 环介导等温扩增技术 特异性 敏感性

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环介导等温扩增技术在病原微生物临床检测中的应用 被引量：1

17

作者 廖川 梁丽娜 +3 位作者 黄少宇 马梦霞 李雪斌(综述) 韦贵将(审校) 《检验医学与临床》 CAS 2024年第7期1003-1007,1024,共6页

病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染... 病原微生物是威胁人类健康的重要因素之一,快速、准确的检测方法对于感染性疾病的诊断具有重要意义。环介导等温扩增(LAMP)是一种恒温扩增方法,具有反应时间短、操作简便、灵敏度高、特异度高、检测成本低等优点,因此被广泛应用于感染性疾病的快速诊断。基于这种情况,该文主要阐述了LAMP的原理、特点及其在临床常见病原微生物检测方面的应用与研究进展。LAMP技术现在已经被应用于病原微生物的检测,且具有较高的灵敏度及特异度,但该技术仍有易产生假阳性、引物设计复杂等不足之处。该文综述了近年来LAMP技术在病原微生物感染中的应用与进展,并对其未来的发展前景进行了展望,以期在资源有限的环境中为病原微生物感染的快速诊断提供合理的研究方向。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 核酸检测 病原微生物 核酸扩增 结核分枝杆菌

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利用环介导等温扩增技术快速检测沙眼衣原体方法的建立 被引量：5

18

作者 李若琳 曹月 +7 位作者 梁宇晨 李梦雪 朱婷 鞠丹 张彪 谢轶 许文明 孙群 《中国测试》 CAS 北大核心 2020年第4期65-69,共5页

建立一种利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测沙眼衣原体的方法。针对沙眼衣原体gyrA基因设计LAMP特异引物,并加入一条环引物LB提高反应效率,对反应的特异性、灵敏度和重复性进行评价,同时用... 建立一种利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测沙眼衣原体的方法。针对沙眼衣原体gyrA基因设计LAMP特异引物,并加入一条环引物LB提高反应效率,对反应的特异性、灵敏度和重复性进行评价,同时用沙眼衣原体阳性的临床样本进行LAMP检测验证。实时荧光LAMP结果表明,建立的LAMP方法特异性好,不与10种常见的病原微生物以及生殖道感染相关细菌发生非特异反应,灵敏度可以达到4.13×101 copies/μL;20次重复试验的Cq值变异系数为7.23%,反应稳定性良好;用LAMP方法对6份临床阳性样本进行检测,阳性符合率为100%。因此,该研究建立的沙眼衣原体LAMP检测方法快速、灵敏、稳定性好,能为感染筛查和早期诊断提供参考。 展开更多

关键词 环介导等温扩增技术 沙眼衣原体 GYRA基因 快速检测

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荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的对比研究

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作者 徐成伟 徐丽娜 《中国处方药》 2024年第6期168-171,共4页

目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(P... 目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(PCR)检测技术与环介导等温扩增技术(LAMP)检测呼吸道病原体,并对检测结果进行比较分析。结果120例患者中使用LAMP检出细菌感染85例(阳性率为70.83%)。荧光定量PCR检出细菌感染72例(阳性率60.00%),差异无统计学意义(P>0.05);其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);采用荧光定量PCR与LAMP法对呼吸道感染10种病原体进行检测,结果表明,除LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、流感嗜血杆菌的检测一致性极好,荧光定量PCR对耐甲氧西林葡萄球菌的检测一致性极好(Kappa≥0.75),其余病原体采用荧光定量PCR与LAMP法检测一致性均中等(0.4≤Kappa<0.75)。结论荧光定量PCR与LAMP两种检测方法对呼吸道感染病原体检出率均较高,其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法。 展开更多

关键词 荧光定量核酸扩增检测技术 环介导等温扩增技术 呼吸道感染 病原体

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向日葵核盘菌环介导等温扩增检测技术

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作者 常海城 李虎 +2 位作者 郑立秋 李海燕 孟庆林 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1412-1420,共9页

应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色变化、反应灵敏的向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)检测方法。筛选出检测核盘菌的LAMP特异性引物,建立了LAMP反应体系与优化条件,并进行灵... 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)建立了基于颜色变化、反应灵敏的向日葵核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)检测方法。筛选出检测核盘菌的LAMP特异性引物,建立了LAMP反应体系与优化条件,并进行灵敏度和特异性试验。结果表明,以F3-1(ATGCCTGTTCGAGCGTCA)、B3-1(AGTTCAGC-GGGTATCCCTA)、FIP-1(GCCGCCACTGATTTTAGAGCCTTTTCAACCCTCAAGCTCAGC)、BIP-1(TCGTTACAG-GTTCTCGGTGTGCCCTGATCCGAGGTCAACCAT)为引物,反应体系中10×Bst Reaction Buffer 2.4μL、dNTP Mixture1.28 mmol·L^(-1)、F3/B3 0.15μmol·L^(-1)、FIP/BIP 0.8μmol·L^(-1)、HNB 150μmol·L^(-1)、MgSO_(4) 1.2 mmol·L^(-1)、Bst DNA聚合酶0.19 U·L^(-1)、ddH_(2)O 13.4μL等温条件下(64℃)进行核酸扩增反应1 h,即可通过肉眼直接目测试验结果,且琼脂糖凝胶电泳验证显示清晰的梯形扩增结果。灰葡萄孢、疫霉、腐霉等其他供试菌株中均没有观察到这些现象,对核盘菌的特异性较强;LAMP技术最低检测限为1×10^(-3) ng·μL^(-1)。该方法的建立为向日葵核盘菌的检疫及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。 展开更多

关键词 向日葵核盘菌 环介导等温扩增技术 羟基萘酚蓝(HNB)

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