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整合素α9在人脂肪源性间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化过程中的表达变化 被引量：3
1
作者 蒋娟 薛斌 李晶 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期674-678,共5页
目的:从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),诱导其向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)分化,同时探讨分化过程中整合素α9(integrinα9)表达的变化,旨在寻找淋巴水肿分... 目的:从人体脂肪组织中分离培养出脂肪源性间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),诱导其向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)分化,同时探讨分化过程中整合素α9(integrinα9)表达的变化,旨在寻找淋巴水肿分子治疗靶点,为ADSCs应用于淋巴水肿的分子治疗奠定实验基础。方法:①从吸脂术后废弃的人体脂肪组织中分离培养出ADSCs,倒置相差显微镜观察原代及传代细胞的形态特征。②流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测第3代ADSCs表面特征性抗原CD90、CD29、CD34及CD45的表达;MTT法绘制生长曲线。③用人血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)C、人VEGF-A、血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导其向LECs方向分化,同时以人LECs作为阳性对照组。④Western blot检测各组细胞LECs表面特征性抗原淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)、血管内皮细胞特征性抗原CD34及integrinα9的表达。⑤FCM检测各组细胞周期,使用SPSS17.0对实验数据进行统计分析。结果:①ADSCs贴壁生长,呈长梭形,第1、3、5代ADSCs的生长曲线均呈S形;细胞表面抗原为CD90+、CD29+、CD34-、CD45-。②实验组及阳性对照组LYVE-1表达阳性、CD34表达均阴性,integrinα9的表达趋势与LYVE-1一致,且二者在实验组的表达水平低于阳性对照组;三者在阴性对照组中的表达均为阴性。③各组G0/G1期细胞比例有明显统计学差异(P<0.01),实验组与阳性对照组G0/G1期细胞比例显著小于阴性对照组(P<0.01),实验组与阳性对照组之间无明显统计学差异(P=0.083)。结论:ADSCs离体培养,具有向LECs分化的潜能。使用VEGF-C、VEGF-A、PDGF-BB可诱导部分人ADSCs向LECs分化。在人ADSCs向LECs分化过程中integrinα9的表达增强,分化前后细胞的周期发生了改变。该分子在LECs的形成过程中可能发挥着极为重要的 展开更多
关键词 脂肪源性间充质干细胞 淋巴管内皮细胞 血管内皮细胞生长因子C 淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1 整合素α9
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抑制整合素α9基因的表达对黑色素瘤细胞B16F1的生长和肺转移的影响 被引量：1
2
作者 孙思文 王海明 +1 位作者 康世钧 罗荣城 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期363-365,共3页
目的观察shRNA干扰整合素α9(ITGA9)的表达对黑色素瘤细胞B16F1的生长和肺转移的影响。方法用RNA干扰技术下调B16F1中ITGA9的表达,建立小鼠皮下成瘤和肺转移模型,观察肿瘤生长情况,计数肺转移灶数量。结果 ITGA9-shRNA转染组的肿瘤生长... 目的观察shRNA干扰整合素α9(ITGA9)的表达对黑色素瘤细胞B16F1的生长和肺转移的影响。方法用RNA干扰技术下调B16F1中ITGA9的表达,建立小鼠皮下成瘤和肺转移模型,观察肿瘤生长情况,计数肺转移灶数量。结果 ITGA9-shRNA转染组的肿瘤生长速度减慢(P<0.05),实验终点,该组肿瘤平均体积与scramble-shRNA组相比下降36%;肺转移灶数量显著减少(P<0.05)。结论下调ITGA9的表达可抑制黑色素瘤细胞B16F1在小鼠体内的生长和肺转移。ITGA9可能成为黑色素瘤的治疗靶点。 展开更多
关键词 整合素α9 SHRNA 黑色素瘤 B16F1细胞 肺转移
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脂肪干细胞诱导分化为淋巴管内皮细胞信号通路的探究
3
作者 豆倩影 薛斌 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期108-113,共6页
目的:探讨血管内皮细胞生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C156s)诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)早期分化的调控通路。方法:取人脂肪... 目的:探讨血管内皮细胞生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C156s)诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)早期分化的调控通路。方法:取人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived stem cells,HADSCs)随机分为5组:空白对照组(常规DMEM/F12)、VEGF-C诱导组(含100ng/m L VEGF-C)、VEGF-C联合抑制剂a组(含100 ng/m L VEGF-C+5μmol/L的VEGFR3磷酸化酶抑制剂MAZ51)、VEGF-C联合抑制剂b组(含100 ng/m L VEGF-C+10μg/m L的Anti-Integrinα9功能封闭性抗体Y9A2)、VEGF-C联合抑制剂a+b组,连续培养10 d后,Western blot和细胞免疫荧光(IF)检测LECs标志性分子VEGFR3、Integrinα9、LYVE-1的相对表达量;VEGF-C诱导分化后的细胞用Anti-Integrinα9封闭性抗体和MAZ51作用后,Transwell小室检测各组细胞迁移数量的变化。结果:与诱导组相比,分别阻断VEGFR3和Integrinα9通路都会相应减弱LYVE-1的表达(PWestern=0.000,PIF=0.000),且在上述溶度下两抑制剂对LYVE-1的减弱作用无统计学差异(PWestern=0.164,PIF=0.927);而分别阻断任一通路对另一通路的表达量都没有影响(PWestern VEGFR3(BVSD)=0.804,PIF VEGFR3(BVSD)=0.528,PWestern Integrinα9(BVSC)=0.914,PIF Integrinα9(BVSC)=0.593)。与抑制剂作用之前相比,分别阻断Integrinα9和VEGFR3会使迁移细胞数量相应减少(P=0.000),而同时阻断Integrinα9和VEGFR3会使迁移细胞数量进一步减少(P=0.000)。结论:VEGF-C诱导HADSCs向LECs分化过程中有VEGF-C/VEGFR3和VEGF-C/Integrinα9两条独立信号通路,且Integrinα9和VEGFR3在诱导后的细胞的迁移中均发挥重要作用。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 淋巴管内皮细胞 血管内皮生长因子C 人整合素α9 血管内皮生长因子受体3
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整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管形成及血管内皮生长因子A表达的影响 被引量：1
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作者 吴静 赵敏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1704-1707,共4页
目的研究整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管(CNV)形成及血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响并探讨其意义。方法 39只SD大鼠,随机分为正常组(3只),对照组、α9β1组、α9β1抑制组各12只。角膜行缝线术后,对照组予以左氧氟沙星... 目的研究整合素α9β1对大鼠角膜缝线术后新生血管(CNV)形成及血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达的影响并探讨其意义。方法 39只SD大鼠,随机分为正常组(3只),对照组、α9β1组、α9β1抑制组各12只。角膜行缝线术后,对照组予以左氧氟沙星点双眼;α9β1组予以左氧氟沙星+α9β1点双眼;α9β1抑制组予以左氧氟沙星+α9β1单抗Y9A2点双眼。术后每天在裂隙灯下观察CNV生长情况,并于3、5、7、14 d分别随机取3个实验组中各3只大鼠,在裂隙灯显微镜下行角膜照相,计算CNV面积;RT-PCR、Western blotting法检测不同时间点角膜中VEGF-A的表达。结果 3组大鼠缝线后均有CNV形成,在第7天CNV面积达最大,对照组CNV面积为3.21±0.19;和对照组比较,α9β1组CNV明显增多为4.57±0.31(P<0.05);而α9β1抑制组CNV明显降低,面积为2.03±0.26(P<0.05);第14天时CNV出现部分消退。RT-PCR和Western blotting检测结果示:正常角膜仅有少量VEGF-A表达,角膜缝线术后,VEGF-A表达明显增加。在术后第7天CNV生长达峰值;与对照组比较,α9β1组VEGF-A表达明显增高(P<0.05),而α9β1抑制组VEGF-A表达显著降低(P<0.05)。结论在角膜缝线术后,整合素α9β1可通过上调VEGF-A的表达促进CNV生成;给予整合素α9β1抑制剂可下调VEGF-A的表达和显著减少CNV生成。 展开更多
关键词 整合素α9β1 新生血管 角膜 缝线 血管内皮生长因子A
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