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猪繁殖与呼吸综合征病毒HH08株NSP2蛋白多克隆抗体的制备及其生物学功能的研究 被引量：4
1
作者 马玲 李广兴 +2 位作者 洪琴 任玉东 任晓峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期377-383,共7页
利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导... 利用RT-PCR和SOE PCR技术扩增得到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HH08株NSP2全长基因,经抗原性和亲水性分析,将NSP2部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-NSP2转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达获得107ku的重组NSP2蛋白。Western-blot检测表明,重组蛋白能够与PRRSV参考阳性血清反应。以纯化的重组NSP2蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1∶1015以上;Western-blot试验表明,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验显示,用抗NSP2多克隆抗体可以检测到PVAX-NSP2转染BHK-21细胞所表达的NSP2蛋白,且与经典型和高致病型PRRSV毒株均有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对PRRSV经典和高致病性毒株的抑制率可达到68%和53%。上述研究结果为PRRSV检测及NSP2蛋白功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 多克隆抗体 间接免疫荧光试验 病毒感染抑制试验
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鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究 被引量：4
2
作者 李广兴 杜威威 +7 位作者 韩溪 潘龙 王新 白妍 洪琴 马玲 任晓峰 杨贵君 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期57-63,共7页
文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒(IBV)HH06株M全长基因,经抗原性和亲水性分析,将M部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Wes... 文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒(IBV)HH06株M全长基因,经抗原性和亲水性分析,将M部分序列成功亚克隆于pET-30a(+)和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明,重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,其ELISA效价达到1:218;Western blot结果证实,其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明,抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白,与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明,多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。 展开更多
关键词 传染性支气管病毒 膜蛋白 多克隆抗体 间接免疫荧光试验 免疫印迹试验
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鸡传染性支气管炎病毒HH06株囊膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能检测 被引量：3
3
作者 白妍 赵蕾 +4 位作者 杜威威 潘龙 黄小丹 杨贵君 李广兴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期1967-1974,共8页
采用RT-PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）HH06株E基因全长,经抗原性和亲水性分析,将E基因部分序列（193~327bp）亚克隆于pET-32a（＋）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET-32a-E1转化E.coli Rosetta... 采用RT-PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus,IBV）HH06株E基因全长,经抗原性和亲水性分析,将E基因部分序列（193~327bp）亚克隆于pET-32a（＋）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET-32a-E1转化E.coli Rosetta（DE3）感受态细胞,诱导表达获得大小约为23ku的重组截短E1蛋白,Western blotting检测重组蛋白与IBV全病毒多克隆抗体能特异性反应。以纯化后的E1蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗体效价达到220;Western blotting分析表明,E1多克隆抗体与重组表达蛋白具有良好的反应性;间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到PVAX-E1转染Hela细胞表达的E1蛋白和感染鸡胚肾细胞（CEK）中的HH06株IBV,抗E蛋白多克隆抗体的制备为E蛋白功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性支气管病毒 囊膜蛋白 多克隆抗体 免疫印迹试验 间接免疫荧光试验
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鸡氨肽酶N蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究
4
作者 李广兴 李兰兰 +7 位作者 潘龙 洪琴 张恒 杨巍 黄小丹 马德星 张瑞莉 杨贵君 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期24-31,共8页
试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p... 试验参考Gen Bank上鸡氨肽酶N(g APN)基因序列(登录号为NM_204861.1)设计多对特异性引物,利用RT-PCR分段克隆g APN基因各段克隆产物并利用SOE-PCR将其进行连接,得到大小为2 906 bp的全长基因。利用原核表达载体p ET-30a(+)构建重组质粒p ET-g APN并转化E.coli Rosetta,经诱导表达得到大小为113 ku目的条带。以纯化g APN重组蛋白为免疫原制备兔抗g APN多克隆抗体,间接Elisa方法检测多抗血清效价为215。Western Blot试验证明,此多克隆抗体可以与原核表达的蛋白产生特异性条带,同时与18日龄鸡肾组织中获得的天然g APN蛋白样品有良好的反应性。间接免疫荧光试验显示,多克隆抗体可检测到pc DNA-g APN转染HELA细胞所表达的g APN蛋白。上述结果可为g APN蛋白的深入研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸡氨肽酶N 多克隆抗体 免疫印迹 间接免疫荧光
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