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检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立 被引量:15
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作者 刘茂军 靳岷 +2 位作者 杜改梅 邵国青 张映 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期437-441,共5页
选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间... 选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法。结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min。对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 检测方法 间接elisa
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苦马豆素人工抗原接种和田羊的免疫学研究 被引量:2
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作者 王帅 胡建军 +3 位作者 陈根元 贾琦珍 马春晖 张玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第3期21-24,28,共5页
为了探索苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA免疫接种后对和田羊的保护作用,试验通过间接血凝试验(IHA)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分析SW-BSA免疫和田羊后血清抗体效价的变化,并检测试验羊血清E-玫瑰花环率的变化,以及血清谷草转氨酶(AST)... 为了探索苦马豆素(SW)人工抗原SW-BSA免疫接种后对和田羊的保护作用,试验通过间接血凝试验(IHA)和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分析SW-BSA免疫和田羊后血清抗体效价的变化,并检测试验羊血清E-玫瑰花环率的变化,以及血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(AKP)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-甘露糖苷酶(AMA)、肌酐(CRE)活性的变化,同时检测试验组尿液和血液中有无SW。结果表明:SW-BSA可以诱导和田羊产生高效价的抗SW抗体,而且这种高效价保持的时间较长,机体E-玫瑰花环率显著上升;试验组与对照组比较,血清中AST、ALT、AKP、LDH、AMA、CRE水平均差异不显著(P>0.05),尿液和血液中均未检查出SW。说明合成的人工抗原SW-BSA具有较好的免疫原性和安全性。 展开更多
关键词 苦马豆素(SW) 人工抗原 免疫 和田羊 间接血凝试验(IHA) 间接酶联免疫吸附试验(elisa) 疯草中毒 生化指标
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大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
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作者 李强 严立恒 +5 位作者 兰景超 邓英 孙珊珊 罗娌 史纪强 颜其贵 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第5期795-802,共8页
【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因... 【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。 展开更多
关键词 大熊猫 犬细小病毒 VP2蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附剂测定(elisa)
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基于兔出血症病毒衣壳蛋白优势抗原区的间接ELISA方法建立 被引量:1
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作者 李宁 孟春春 +8 位作者 梁瑞英 李传峰 陈宗艳 缪秋红 毕庄莉 朱英奇 郭慧敏 刘光清 王桂军 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期1-7,共7页
为建立一种检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A(31~250 aa)和B(470~579 aa)两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a(+),转染... 为建立一种检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗体的间接ELISA方法,首先扩增了VP60的优势抗原区A(31~250 aa)和B(470~579 aa)两个片段,然后应用融合PCR方法将A、B片段连接起来,克隆至pET-30a(+),转染BL21感受态细胞,进行原核表达。用Western blot方法对表达产物(AB)的免疫原性进行鉴定,再以纯化的AB为诊断抗原,通过对抗原-抗体反应条件的多重优化,建立检测RHDV抗体的间接ELISA方法。试验结果表明,本研究成功表达了RHDV VP60的优势抗原区(AB),重组蛋白的分子量约为36 kDa,该蛋白能与RHDV抗体发生特异性反应。以纯化的AB为包被抗原,成功建立了检测RHDV抗体的间接ELISA方法。经过对部分田间样品的检测和应用,证明该方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。本研究为将来开展RHDV的流行病学调查和疫苗研究等提供了良好的技术手段。 展开更多
关键词 兔出血症病毒 VP60 优势抗原区 间接elisa
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评价3种免疫学检测方法在儿童腺病毒感染诊断中的应用价值 被引量:1
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作者 王铁山 王珍子 《标记免疫分析与临床》 CAS 2022年第5期757-761,共5页
目的2评价直接免疫荧光法、间接免疫荧光法与酶联免疫吸附法3种检测方法对儿童腺病毒感染诊断的应用价值。方法回顾性分析2019年1月至2021年1月间我院检验科接收的221例同时进行上述3种检测的病例,计算每种方法的灵敏度、特异性、阳性... 目的2评价直接免疫荧光法、间接免疫荧光法与酶联免疫吸附法3种检测方法对儿童腺病毒感染诊断的应用价值。方法回顾性分析2019年1月至2021年1月间我院检验科接收的221例同时进行上述3种检测的病例,计算每种方法的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值等,对3种检测方法进行配对χ^(2)检验,同时按年龄分组进行统计学分析。结果直接免疫荧光法灵敏度为58.49%、特异性为100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为88.42%、Kappa值为0.682,间接免疫荧光法灵敏度为84.91%、特异性为100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为95.45%、Kappa值为0.895,酶联免疫吸附法灵敏度为92.45%、特异性为80.36%、阳性预测值为59.76%、阴性预测值为97.12%、Kappa值为0.613,3种方法两两间比较差异均有统计学意义。按照年龄分组显示每组间接免疫荧光法的统计学指标具有优势。结论间接免疫荧光法特异性和阳性预测值较好,检测结果与临床诊断一致性较好,对于儿童腺病毒感染具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 腺病毒 直接免疫荧光法 间接免疫荧光法 酶联免疫吸附法
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阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法 被引量:7
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作者 翟绪昭 曾海娟 +7 位作者 王广彬 董庆利 谢曼曼 丁承超 刘武康 王淑娟 李杰 刘箐 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第20期268-272,共5页
以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC 29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256 000,6E3的... 以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC 29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256 000,6E3的效价为1∶128 000,5B10的效价为1∶64 000,1E9的效价为1∶32 000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为Ig G1,6E3的亚型为Ig G2b,其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7株抗体进行特异性检测结果显示,2A7能与3株阪崎克罗诺杆菌(ATCC 29004、ATCC 29544、ATCC 12868)都结合,1E9能与其中两株(ATCC 29004、ATCC 12868)结合,且与其他11株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到10~6 CFU/m L。 展开更多
关键词 阪崎克罗诺杆菌 单克隆抗体 间接竞争elisa
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糖皮质激素广谱特异性单克隆抗体的制备及其ic-ELISA方法的建立 被引量:4
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作者 姚添淇 劳翠瑜 +2 位作者 王士峰 胡桂平 张世伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第14期186-191,共6页
将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,... 将氢化可的松半抗原HYD通过活化脂法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得氢化可的松完整抗原KLH-HYD,并对小鼠肌肉注射此抗原,使小鼠免疫;通过杂交瘤技术获得1株能够稳定分泌氢化可的松的单克隆抗体细胞株HYD-C1,并通过腹水制备大量抗体。将氢化可的松半抗原HYD和地塞米松半抗原DEX通过活化脂法分别与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)偶联作为包被原,建立糖皮质激素的间接竞争酶联免疫吸附检测(indirect competitive-enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)方法。结果:在同源包被情况下氢化可的松灵敏度为1.63 ng/mL,异源包被情况下灵敏度为0.24 ng/mL;在交叉抑制实验中,异源策略中的各糖皮质激素灵敏度均高于同源策略中的结果,异源策略条件下很好地覆盖了本研究中所检测的糖皮质激素,使该抗体具备良好的广谱特异性。在异源策略添加回收实验中平均添加回收率在77.5%~111.3%之间,落在合理范围内,满足检测需求。结论:成功制备出氢化可的松单克隆抗体,建立了同源和异源策略糖皮质激素检测方法,结果发现异源策略中糖皮质激素的灵敏度高于同源策略,并使该方法具有更好的广谱特异性。 展开更多
关键词 糖皮质激素 同源策略 异源策略 广谱特异性 间接竞争酶联免疫吸附(ic-elisa)法
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玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA方法的建立 被引量:4
8
作者 唐颂 李岩松 +5 位作者 尚翠玲 胡盼 卢士英 任洪林 柳增善 周玉 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2022年第4期300-304,共5页
本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(8... 本研究以玉米面为例,建立了玉米赤霉烯酮间接竞争ELISA(ic-ELISA)方法。采用棋盘滴定法确定抗原和单抗的最佳工作浓度,并确定了抗原37℃包被1 h、不封闭、酶催化底物作用时间15 min的反应条件进行检测。该方法的检测范围(IC_(20)~IC_(80))为11~292 pg/mL,检测限(IC_(10))为6 pg/mL。玉米赤霉烯酮在玉米面中的加标回收率为81.29%~105.80%。本研究建立的ic-ELISA方法与赭曲霉素A、黄曲霉素B_(1)、呕吐毒素、伏马毒素B_(1)、T-2毒素无交叉反应,可用于玉米面中玉米赤霉烯酮的初筛检测。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 真菌毒素 检测 间接竞争酶联免疫分析(ic-elisa)
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基于异源包被的曲安奈德竞争酶联免疫检测方法 被引量:4
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作者 王英姿 闫剑勇 张世伟 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第8期263-267,共5页
为监控曲安奈德的滥用情况,本研究建立了曲安奈德竞争酶联免疫检测方法。将曲安奈德(Triamcinolone acetonide,TCA)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得曲安奈德完整抗原TCA-KLH;通过免疫小鼠... 为监控曲安奈德的滥用情况,本研究建立了曲安奈德竞争酶联免疫检测方法。将曲安奈德(Triamcinolone acetonide,TCA)半抗原通过活泼酯法与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联获得曲安奈德完整抗原TCA-KLH;通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得一株能够稳定分泌抗曲安奈德的单克隆抗体细胞株,制备并纯化了腹水抗体。将TCA和地塞米松(Dexamethasone,DEX)半抗原通过活泼酯法分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)偶联作为包被原,建立曲安奈德同源及异源的间接竞争酶联免疫分析方法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。在同源包被情况下,曲安奈德灵敏度为5.4 ng/mL,而DEX异源包下灵敏度为0.53 ng/mL。未观察该方法到对哈西奈德、布地奈德、安西奈德以外的其他糖皮质激素的交叉反应。在添加回收实验中,使用20%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率在75%~95%之间。该方法能有效应用于动物组织中曲安奈德的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 曲安奈德 异源包被 间接竞争酶联免疫法(ic-elisa)
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莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法
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作者 谢桂勉 黄莹星 +1 位作者 林俊虹 张世伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期126-131,共6页
莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫... 莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。 展开更多
关键词 糖皮质激素 莫米松糠酸酯 单克隆抗体 异源包被 间接竞争酶联免疫检测法(ic-elisa)
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基于单克隆抗体的玉米赤霉烯酮检测方法研究 被引量:3
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作者 刘琦 生威 +3 位作者 李志 李诗洁 张燕 王硕 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2017年第21期111-115,共5页
建立一种检测谷物样品中玉米赤霉烯酮的酶联免疫分析方法。将玉米赤霉烯酮修饰羧基制得半抗原,再与钥孔嘁血蓝蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合与筛选,得到3株具有高亲和力和特异性的杂交瘤细胞,分别为2E8、2C7、6E11,重链类型均为... 建立一种检测谷物样品中玉米赤霉烯酮的酶联免疫分析方法。将玉米赤霉烯酮修饰羧基制得半抗原,再与钥孔嘁血蓝蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合与筛选,得到3株具有高亲和力和特异性的杂交瘤细胞,分别为2E8、2C7、6E11,重链类型均为IgG_1,轻链类型均为Kappa。细胞株2E8分泌的抗体特异性较好,制备腹水得到单克隆抗体用于后续实验。建立检测玉米赤霉烯酮的间接竞争酶联免疫吸附(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法,方法的灵敏度(IC_(50))为(0.13±0.02)ng/mL,检测限(IC_(15))为(0.02±0.01)ng/m L,在玉米和燕麦中的检出限分别为2.4μg/kg,4.0μg/kg。加标回收率为82.80%~109.20%,变异系数为3.27%~15.38%。经高效液相色谱串联质谱仪验证(R^2=0.996 3)二者具有良好的相关性。 展开更多
关键词 玉米赤霉烯酮 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附法 高效液相色谱-串联质谱法
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猪肉中2-(三氟甲基)吩噻嗪的Ic-ELISA检测
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作者 刘广兴 韩晓利 +1 位作者 李昳晴 王庭欣 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期638-645,共8页
为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉... 为了快速检测猪肉中的镇静剂2-(三氟甲基)吩噻嗪(2-(trifluoromethyl)phenothiazine,TFPTZ),分别用偶氮苯甲酸法、混合酸酐法合成了半抗原、完全抗原,通过免疫新西兰大耳白兔获得了多克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫方法(Ic-ELISA)对猪肉中TFPTZ进行了定量分析,实验条件:包被抗原浓度1.25μg/mL,多克隆抗体稀释16000倍,37℃包被3 h,封闭液为质量分数1%的牛血清白蛋白(BSA),TFPTZ稀释液为含体积分数10%的DMSO的PBS,竞争反应60 min.该方法相关系数R^(2)为0.9991,IC_(50)为1.5002μg/L,最低检测限IC_(10)为0.2841μg/L,线性(IC_(20)~IC_(80))为0.4307~5.2252μg/L,与5种TFPTZ结构类似物的交叉反应率小于1.2%,样品添加回收率为93.26%~109.13%,变异系数小于6%,实际样品检测结果与高效液相色谱法测定结果高度一致,表明建立的快速检测猪肉中TFPTZ的Ic-ELISA方法具有良好的准确度,适用于快速检测猪肉中TFPTZ的残留量. 展开更多
关键词 2-(三氟甲基)吩噻嗪 抗原合成 间接竞争酶联免疫方法(Ic-elisa)
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凡纳滨对虾红体病病原菌间接ELISA快速检测方法的研究 被引量:26
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作者 樊景凤 梁玉波 +3 位作者 宋立超 王斌 臧红梅 李文哲 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期113-117,共5页
以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每... 以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达75.88%;交叉反应和阻断实验结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了30份人工感染后的凡纳滨对虾和健康凡纳滨对虾,阳性检测率分别为93.3%和13.3%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 红体病 副溶血弧菌 间接elisa技术
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间接和直接竞争酶联免疫吸附法快速检测中药材中黄曲霉毒素B1的对比研究 被引量:15
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作者 王长健 骆骄阳 +3 位作者 秦家安 张磊 杨世海 杨美华 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第22期5861-5866,共6页
该研究基于自制的抗原和抗体,对比研究了间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)和直接竞争酶联免疫吸附法(dc-ELISA)快速检测中药材黄芪、生姜、大枣和莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)残留,通过考察不同样品提取方法来降低不同药用部位中药的基质... 该研究基于自制的抗原和抗体,对比研究了间接竞争酶联免疫吸附法(ic-ELISA)和直接竞争酶联免疫吸附法(dc-ELISA)快速检测中药材黄芪、生姜、大枣和莲子中黄曲霉毒素B1(AFB1)残留,通过考察不同样品提取方法来降低不同药用部位中药的基质效应。通过优化AFB1与HRP的摩尔比例提高dc-ELISA方法灵敏度。该研究中,ic-ELISA和dc-ELISA的灵敏度(IC_(50))分别为0.046、0.023 ng·mL^(-1),检出限(LOD)分别为0.007、0.004 ng·mL^(-1),检测时间分别为3 h、50 min,样品回收率为62.96%~104.4%,RSD<10%。53份样品中检测到3份莲子阳性样品,检测结果采用LC-MS/MS进行确证。该研究建立的2种方法准确、快速、灵敏,可用于黄芪、生姜、大枣、莲子及其他中药中AFB1的快速筛查。通过对比分析2种检测方法的优势与不足,可为检测机构和企业应用提供参考,结合实际情况选择相应的检测方法。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫吸附法 直接竞争酶联免疫吸附法 中药材 黄曲霉毒素B1 快速检测
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间接EL ISA与HI检测鸡新城疫抗体相关性 被引量:8
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作者 陈福勇 吴玉苹 +4 位作者 曹红 白江 陈晨 白如念 庞平 《动物医学进展》 CSCD 2004年第3期88-90,共3页
应用间接 EL ISA和微量红细胞凝集抑制试验 ,同时对来自两个鸡场的 1 71份血样进行常规鸡新城疫抗体检测。结果表明 ,二种方法的抗体效价检测结果呈显著相关 ,其相关系数为 0 .92 49(r2= 0 .8560 ) ,设置 t检验 ,差异显著 t<0 .0 0 0... 应用间接 EL ISA和微量红细胞凝集抑制试验 ,同时对来自两个鸡场的 1 71份血样进行常规鸡新城疫抗体检测。结果表明 ,二种方法的抗体效价检测结果呈显著相关 ,其相关系数为 0 .92 49(r2= 0 .8560 ) ,设置 t检验 ,差异显著 t<0 .0 0 0 1 ,(n= 1 71 ) ,并测得总体和各鸡群的回归方程 ,其中总体的回归方程式为 EL ISA =0 .2 80 5× HI-0 .450 9。 EL ISA方法具有敏感 ,特异 ,快速 ,简便的优点 。 展开更多
关键词 间接elisa 新城疫 抗体检测 相关性 HI试验
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河南山东部分地区家猫汉赛巴尔通体感染情况调查 被引量:10
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作者 杨小冉 刘起勇 +5 位作者 崔步云 王晓梅 李世华 宋秀萍 孙继民 王艳 《疾病监测》 CAS 2007年第8期544-546,共3页
目的调查河南、山东部分地区家猫汉赛巴尔通体血清抗体及菌血症情况。方法间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法调查314份家猫血清抗体情况,通过聚合酶链反应(PCR)和测序对血培养产物进行病原学鉴定。结果用ELISA法共检测314份标本,总的抗... 目的调查河南、山东部分地区家猫汉赛巴尔通体血清抗体及菌血症情况。方法间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法调查314份家猫血清抗体情况,通过聚合酶链反应(PCR)和测序对血培养产物进行病原学鉴定。结果用ELISA法共检测314份标本,总的抗体阳性率为29.6%,<6月龄的幼猫阳性率较低(19.3%),>2岁的老猫抗体阳性率最高(37.5%),雌性和雄性之间没有明显差别,血培养共培养出42份可疑阳性,PCR及序列分析证实为汉赛巴尔通体。结论河南、山东部分地区家猫均存在汉赛巴尔通体感染情况,汉赛巴尔通体是家猫感染的主要菌种。 展开更多
关键词 汉赛巴尔通体 家猫 间接elisa PCR 序列分析
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牛奶中替米考星间接竞争酶联免疫吸附检测法的建立 被引量:9
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作者 韩青 王静 +1 位作者 徐豪 杨娟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第10期2625-2630,共6页
本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑... 本研究通过棋盘法优化替米考星抗体、包被原浓度,并考察了最佳包被条件,最佳反应温度、时间和酶标二抗最佳反应时间等,建立了替米考星残留的间接竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)并应用到牛奶样本的检测。建立的间接竞争ELISA方法半数抑制浓度(IC50)为2.1ng/mL,牛奶中替米考星的最低检测限(LOD)为2μg/L。在5、10和20μg/L添加浓度下,回收率为79.2%-90.1%,变异系数不高于9.0%。与其他常见的大环内酯类药物无交叉反应。本研究建立的替米考星间接竞争ELISA方法灵敏度达到了残留限量标准要求,为开发可用于牛奶中替米考星的快速检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 间接竞争酶联免疫吸附试验 替米考星 牛奶 残留
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DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立 被引量:6
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作者 吕丽兰 张娅 +7 位作者 陆覃昱 邹承武 甘志勇 李冬桂 吴静娜 王艺霖 李鑫生 何丽珊 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第11期2659-2666,共8页
【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全... 【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。 展开更多
关键词 二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs) 单克隆抗体 间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-elisa) 气相色谱法(GC) 农药残留检测
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Development of ELISA and immunochromatographic assay for ofloxacin 被引量:3
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作者 Wu Yong Sun Wen Ying Liu Ling Bo Qu 《Chinese Chemical Letters》 SCIE CAS CSCD 2007年第9期1107-1110,共4页
Two rapid, sensitive and reliable immunoassay methods, namely competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA) and colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA), were developed to detect ofl... Two rapid, sensitive and reliable immunoassay methods, namely competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-ELISA) and colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA), were developed to detect ofloxacin (OFL). The linear range of the CI-ELISA was from 0.5 to 128 ng/mL with a limit of detection (LOD) of 0.35 ng/mL. Good recoveries were obtained in analyzing simulated swine urine samples. The CGIA could accurately estimate OFL at concentrations as low as 10 ng/mL in less than 10 min, and test results were read visually without any instrument. 展开更多
关键词 Ofloxacin (OFL) Polyclonal antibody (pAb) Competitive indirect enzyme-linked immunosorbent assay (CI-elisa) Colloidal gold-based immunochromatographic assay (CGIA)
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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用
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作者 刘广阔 邹敏 +5 位作者 吴发兴 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期1-6,共6页
为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。 展开更多
关键词 牛轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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