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体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究 被引量：2
1
作者 蔡林奕 孔祥丽 谢静 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期248-254,共7页
目的研究体外持续传代对透明软骨细胞形态表型、分化特性及细胞外基质(ECM)平衡状态的影响。方法酶消化法分离培养小鼠透明软骨细胞,连续传代至第5代。采用苏木精-伊红染色观察软骨细胞的形态改变,采用半定量聚合酶链式反应分析软骨细... 目的研究体外持续传代对透明软骨细胞形态表型、分化特性及细胞外基质(ECM)平衡状态的影响。方法酶消化法分离培养小鼠透明软骨细胞,连续传代至第5代。采用苏木精-伊红染色观察软骨细胞的形态改变,采用半定量聚合酶链式反应分析软骨细胞特异性基因、常规基因、基质金属蛋白酶家族(MMPs)和基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(TIMPs)m RNA水平的变化,采用明胶酶谱分析鉴定软骨细胞明胶酶活性的改变。结果随着传代次数增加,软骨细胞形态由圆形或多边形变为长梭形,其特异性基因的表达量明显下降(P<0.05),至第5代已基本丧失。相比而言,常规基因的下调并不明显。MMPs和TIMPs均有下调(P<0.05),仅MMP-1和TIMP-1改变的差异无统计学意义(P>0.05);MMPs/TIMPs比值随传代发生紊乱。在蛋白质水平,随传代次数增加,明胶酶的活性下降,P4和P5代细胞下调显著(P<0.05)。结论软骨细胞在体外培养过程中,其特异性表型特征会随传代次数增加而逐渐丧失,软骨细胞发生反分化而表现出纤维化趋势。同时,ECM的平衡状态被打破,合成与分解代谢紊乱。在利用软骨细胞进行相关疾病的研究或软骨组织工程学实验时,应选用前3代的软骨细胞。 展开更多
关键词 体外传代 透明软骨细胞 细胞表型 细胞外基质 组织工程
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体外传代对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响 被引量：1
2
作者 苏晓霞 廖立 +1 位作者 金岩 周洪 《口腔生物医学》 2015年第3期143-149,共7页
目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法:分别以双酶消化及组织块法分离培养h UCMSCs;细胞传至18代(P18),观察细胞形态... 目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UCMSCs)体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法:分别以双酶消化及组织块法分离培养h UCMSCs;细胞传至18代(P18),观察细胞形态、生长曲线、克隆形成、细胞周期、干细胞表型、多向分化能力的变化,全面评测连续传代对h UCMSCs生物学特性的影响。结果:双酶消化结合组织块法可高效分离获得大量h UCMSCs,细胞稳定传代并保持间充质干细胞特性;早期细胞多呈长梭形或纺锤形,至P18时呈多角不定型且细胞体积变大,胞浆增加明显。传代至P18后,h UCMSCs的群体倍增时间增加至60 h以上,绝大多数细胞处于G0/G1期,且成纤维细胞集落形成单位(colony-forming unit-fibroblast,CFU-F)形成降低,克隆集落减小。h UCMSCs可表达且不因持续传代丢失间充质干细胞标记,但仅早期传代细胞表达多能干细胞标记Oct-4及SSEA-4。特异性染色及相关基因表达检测提示P18 h UCMSCs的成脂肪、成软骨及成骨诱导分化能力较早期传代细胞减弱。结论:h UCMSCs是具备高增殖活性和多向分化特性的间充质干细胞群,体外长期传代扩增的h UCMSCs呈现一定的复制性衰老趋势,但不会丢失干性,可稳定表达间充质干细胞特异性表面标记并保持分化活性。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 体外传代 增殖 分化
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