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免疫磁珠法分离和提纯雪旺细胞的实验研究 被引量:11
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作者 黄明 罗卓荆 +1 位作者 肖伟 张强 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期599-601,612,共4页
[目的]探讨利用免疫磁珠从SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量、高纯度雪旺细胞的方法。[方法]选用4—7d SD大鼠,无菌条件下取双侧坐骨神经,解剖镜下剥离去除神经外膜,获得神经束,将神经束剪碎至1mm^3大小。采用双酶2次消化法消化,胎... [目的]探讨利用免疫磁珠从SD大鼠坐骨神经分离培养获得大量、高纯度雪旺细胞的方法。[方法]选用4—7d SD大鼠,无菌条件下取双侧坐骨神经,解剖镜下剥离去除神经外膜,获得神经束,将神经束剪碎至1mm^3大小。采用双酶2次消化法消化,胎牛血清中止消化后,离心并加入DF12培养液培养。7d后应用免疫磁珠法对细胞进行纯化培养,培养2d后进行传代接种。培养过程中对细胞进行形态学观察、计数及活力测定;MTT法绘制细胞生长曲线,采用免疫细胞化学荧光染色对细胞进行鉴定并且计算所得细胞纯度。[结果]分离培养所得细胞即为雪旺细胞;采用免疫磁珠法能对培养所得雪旺细胞进行纯化。纯化后雪旺细胞活力为96%±0.5%,纯度98%±1.1%,培养2d后就可以传代。[结论]免疫磁珠法可以用于雪旺细胞的纯化培养,所得雪旺细胞纯度高,活力强,能满足组织工程人工神经的需要。 展开更多
关键词 雪旺细胞 免疫磁珠 坐骨神经
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简便高效分离细胞新型免疫磁珠制备 被引量:6
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作者 刘辉荣 徐宏 +3 位作者 古宏晨 卢瑛 王玲 侯盛 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1349-1351,共3页
目的采用碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶联抗体,制备可高效分离细胞的免疫磁珠。方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再与抗体上氨基进行反应,从而将抗体偶联于磁珠表面,获得免疫磁珠。使用高性能纳米... 目的采用碳二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)方法在羧基磁珠表面偶联抗体,制备可高效分离细胞的免疫磁珠。方法用EDC和NHS活化磁珠表面羧基,活化的羧基再与抗体上氨基进行反应,从而将抗体偶联于磁珠表面,获得免疫磁珠。使用高性能纳米粒度分析仪(HPPS)、二辛可酸(BCA)蛋白定量试剂盒、流式细胞仪、透射电镜(TEM)表征磁珠的粒径、磁珠表面联接的抗体量及其免疫活性。结果HPPS检测磁珠平均水力学粒径为110nm;磁珠表面偶联52.4μg抗CD11a+抗体/mg磁珠。经磁分离后细胞的流式分析结果表明,CD11a+免疫磁珠可以有效分离髓系白血病细胞系(KG-1a)细胞,免疫磁珠均匀结合于细胞表面,且不影响细胞的活性。结论成功制备可用于细胞分离且不影响分离后细胞活性的新型免疫磁珠。 展开更多
关键词 免疫磁珠 免疫活性 分离细胞
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免疫磁珠技术检测癌症患者胸腹水 被引量:2
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作者 王文秀 杨艳丽 +1 位作者 于泽 徐玉清 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第9期685-688,共4页
背景与目的:目前常规的脱落细胞病理学检查为临床诊断恶性胸腹水的金标准,但其漏诊率较高。其他方法,如免疫学检查、端粒酶活性检测、染色体分析结合细胞学检查、RT-PCR检测等或因所需的费用较昂贵,或因检出的假阳性率较高而未被推广。... 背景与目的:目前常规的脱落细胞病理学检查为临床诊断恶性胸腹水的金标准,但其漏诊率较高。其他方法,如免疫学检查、端粒酶活性检测、染色体分析结合细胞学检查、RT-PCR检测等或因所需的费用较昂贵,或因检出的假阳性率较高而未被推广。免疫磁珠技术主要应用于细胞的分离、纯化。目前国内外尚少见应用此技术检测癌症患者胸腹水的研究。本实验旨在研究用免疫磁珠技术检测癌症患者胸腹水中的肿瘤细胞,以提高恶性胸腹水的诊断率。方法:分别用免疫磁珠技术、常规脱落细胞学方法检测30例癌症患者和30例非癌症患者的胸腹水,比较两种方法的检出率及假阳性率。结果:在癌症患者,免疫磁珠法的肿瘤细胞检出率为63.3%(19/30),显著高于常规脱落细胞学法(23.3%,7/30)(P<0.01);在非癌症患者,免疫磁珠技术检出的的假阳性率(3.3%,1/30)与常规脱落细胞学的假阳性率(0.0%,0/30)相比差异无显著性(P>0.05)。结论:免疫磁珠技术是一种准确﹑快速﹑灵敏度高的检测癌症患者胸腹水的方法。如在常规脱落细胞病理学检测阴性结果后应用此方法,将大大提高临床合并有胸腹水的癌症患者的诊断率。 展开更多
关键词 免疫磁珠 肿瘤细胞 胸水 腹水
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脑胶质瘤干细胞和U251人胶质瘤细胞系X线辐射敏感性研究 被引量:3
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作者 樊锐太 刘俊启 +4 位作者 张洪志 葛辰蕾 胡勇 关方霞 杨波 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期391-393,共3页
目的:研究脑胶质瘤干细胞(Brain glioma stem cell)和U251胶质瘤细胞系对不同剂量X线的射线敏感性。方法:从脑胶质瘤组织中分离培养脑胶质瘤肿瘤球,用CD133免疫磁珠技术分离得到脑胶质瘤干细胞;经不同剂量X线照射脑胶质瘤干细胞和U251... 目的:研究脑胶质瘤干细胞(Brain glioma stem cell)和U251胶质瘤细胞系对不同剂量X线的射线敏感性。方法:从脑胶质瘤组织中分离培养脑胶质瘤肿瘤球,用CD133免疫磁珠技术分离得到脑胶质瘤干细胞;经不同剂量X线照射脑胶质瘤干细胞和U251细胞后,用软琼脂克隆形成实验检测两者的放射敏感性。结果:1)从脑胶质瘤组织中分离胶质瘤干细胞。2)随着照射剂量的增加,两种细胞的存活率均出现下降,但肿瘤干细胞的存活率明显高于U251细胞(t=-3.71,P<0.01)。3)根据公式SF=exp(-αD-βD2)对实验数据进行拟合,得到干细胞和U251细胞的α/β值分别为3.57、7.15。结论:脑胶质瘤干细胞与U251胶质瘤细胞系相比具有较强的辐射抗拒性。 展开更多
关键词 脑胶质瘤干细胞 U251胶质瘤细胞系 CD133免疫磁珠法 放射敏感性
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