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中国人肠道产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因的分离、克隆和鉴定
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作者 孔德波 叶章群 +5 位作者 陈志强 杨为民 姚林方 郭辉 刘冠琳 曾令启 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期314-317,共4页
目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重... 目的克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0～72h培养液中草酸浓度的变化。结果frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24～72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12～72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P<0.05)。结论中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。 展开更多
关键词 高草酸尿 基因治疗 产甲酸草酸杆菌 甲酰辅酶A转移酶
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