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包虫抗原B通过抑制TAZ促进RANKL/NF-κB/TAK1介导的破骨细胞发生
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作者 吾路汗·马汗 谢增如 《医学分子生物学杂志》 CAS 2025年第1期8-15,共8页
目的探讨包虫抗原B(hydatid antigen-B,Hyd-B)促进破骨细胞发生的分子机制。方法细胞实验分组-1:BMSCs细胞分为Control组、MCSF+RANKL组和MCSF+RANKL+Hyd-B组;使用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,MCSF)联... 目的探讨包虫抗原B(hydatid antigen-B,Hyd-B)促进破骨细胞发生的分子机制。方法细胞实验分组-1:BMSCs细胞分为Control组、MCSF+RANKL组和MCSF+RANKL+Hyd-B组;使用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,MCSF)联合可溶性核因子κB受体激活配体(receptor activator of nuclear factor-κb ligand,RANKL),外加/不加Hyd-B联合诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向破骨细胞分化。细胞实验分组-2:BMSCs细胞分为Ctrl组和Hyd-B处理组(Treat组)。免疫共沉淀(co-IP)法测定Hyd-B对TAZ(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)和TAK1(transforming growth factorβ-activated kinase 1)的直接相互作用的影响,使用抗TAK1抗体进行IP、IB检测TAZ的表达。细胞实验分组-3:BMSCs细胞分为Control组、MCSF+RANKL组、MCSF+RANKL+Hyd-B组、MCSF+RANKL+Hyd-B+TAZ-OE组和MCSF+RANKL+Hyd-B+OE-vector组。BMSCs转染腺病毒-TAZ OE或腺病毒-OE vector介导过表达TAZ。qPCR法检测破骨细胞分化标志物TRAP和Cathepsin K mRNA相对表达水平。蛋白质印迹检测细胞核p-P65、细胞质P65、细胞核NFATc1、p-AKT、AKT、p-ERK 1/2、ERK 1/2、p-TAZ、TAZ和TAK1的表达水平。结果与Control组比较,MCSF+RANKL组和MCSF+RANKL+Hyd-B组细胞TRAP和Cathepsin K mRNA水平升高(P<0.05);p-P65、p-AKT、p-ERK 1/2水平升高(P<0.05);细胞核内p-P65和NFATc1的水平升高(P<0.05)。与MCSF+RANKL组相比较,MCSF+RANKL+Hyd-B组细胞上述指标表达水平进一步升高(P<0.05)。与MCSF+RANKL+Hyd-B组相比较,MCSF+RANKL+Hyd-B+TAZ OE组细胞上述指标表达水平降低(P<0.05)。Co-IP结果,与Ctrl组相比较,Treat组中TAZ与TAK1的相互作用增加(P<0.05)。与Ctrl组相比较,Treat组中细胞质p-TAZ磷酸化水平增加(P<0.05),TAZ表达水平降低(P<0.05)。结论Hyd-B通过抑制TAZ上调RANKL/NF-κB/TAK1介导的破骨细胞发生。 展开更多
关键词 骨包虫病 包虫抗原b RANKL/NF-κb/TAK1 TAZ 破骨细胞分化
细粒棘球蚴重组抗原B的制备、纯化及鉴定 被引量:4
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作者 陈新华 温浩 +3 位作者 卢晓梅 张金辉 林仁勇 郑树森 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期296-299,共4页
目的制备细粒棘球蚴人工重组抗原B。方法构建pMalc2x-AgB质粒,在原核系统大肠埃希菌JM109中诱导表达,将所得融合蛋白rAgB-MBP用蛋白水解酶Xa(FactorXaProtease)进行消化,酶切产物用两步亲和层析进行分离纯化。经过直链淀粉树脂柱、羟基... 目的制备细粒棘球蚴人工重组抗原B。方法构建pMalc2x-AgB质粒,在原核系统大肠埃希菌JM109中诱导表达,将所得融合蛋白rAgB-MBP用蛋白水解酶Xa(FactorXaProtease)进行消化,酶切产物用两步亲和层析进行分离纯化。经过直链淀粉树脂柱、羟基磷灰石柱,获得了纯化的细粒棘球蚴人工重组抗原B,并用Westernblotting对抗原B的特异性进行了鉴定。结果制备的抗原B(rAgB)相对分子量(Mr)为12000,rAgB经过原核表达、酶切、层析柱分离后依然保持抗原活性。结论用分子生物学手段制备并纯化了人工重组抗原B,为批量生产诊断抗原、制备单克隆抗体及筛选噬菌体抗体库奠定了基础。 展开更多
关键词 棘球蚴病 重组抗原b 亲和层析
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包虫抗原B通过肿瘤坏死因子受体2调控巨噬细胞极化对小鼠免疫性血小板减少症的改善作用
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作者 宋传龙 焦红杰 +2 位作者 海力其古丽·努日丁 岳迎宾 严媚 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期858-866,共9页
目的:探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法:将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^(-/-))的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^(-/-)对照... 目的:探讨包虫抗原B (HA-B)对小鼠免疫性血小板减少症(ITP)的改善作用,阐明其相关作用机制。方法:将野生型(WT)和肿瘤坏死因子受体2 (TNFR2)基因敲除(TNFR2^(-/-))的C57/B6小鼠分为WT对照组、WT-ITP模型组、WT-HA-B组、TNFR2^(-/-)对照组、TNFR2^(-/-)ITP模型组和TNFR2^(-/-)HA-B组,检测各组小鼠体质量、脏器指数和血常规指标,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血中M2巨噬细胞百分率,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠血清中精氨酸酶1(Arg1)、白细胞介素10 (IL-10)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和白细胞介素6 (IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Arg1、IL-10、iNOS和IL-6表达水平。分别将WT对照组和TNFR2^(-/-)对照组小鼠BMDM诱导为M2巨噬细胞(WT M2组和TNFR2^(-/-)M2组),加入HA-B (WT M2+HA-B组和TNFR2^(-/-)M2+HA-B组),采用RT-qPCR法检测各组细胞中Arg1和IL-10mRNA表达水平。结果:分别与WT对照组和TNFR2^(-/-)对照组比较,WT-ITP模型组和TNFR2^(-/-)ITP模型组小鼠体质量降低(P<0.05),脾脏和胸腺指数升高(P<0.05),血小板和红细胞数量减少(P<0.05),血红蛋白水平降低(P<0.05),白细胞数量增加(P<0.05),凝血时间延长(P<0.05);外周血中M2巨噬细胞百分率降低(P<0.05),血清中Arg1和IL-10水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6水平升高(P<0.05);BMDM中Arg1和IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05),iNOS和IL-6 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与WT-ITP模型组比较,WT-HA-B组小鼠体质量增加(P<0.05),脾脏和胸腺指数降低(P<0.05),血小板和红细胞数量增加(P<0.05),血红蛋白水平升高(P<0.05),白细胞数量减少(P<0.05),凝血时间缩短(P<0.05);外周血中M2巨噬细胞百分率升高(P<0.05),血清中Arg1和IL-10水平升高(P<0.05),iNOS和IL-6水平降低(P<0.05);BMDM中Arg1和IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05),iNOS和IL-6 mRNA表达水平降低(P<0.05)。与WT-HA-B组比较,TNFR2^(-/-)HA-B组小鼠体质量降低(P<0.05), 展开更多
关键词 包虫抗原b 巨噬细胞M2极化 免疫性血小板减少症 肿瘤坏死因子受体2
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细粒棘球蚴重组抗原B的表达提取及其血清学检测初探 被引量:9
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作者 卢晓梅 温浩 +2 位作者 Alison FS 付玉才 Craig PS 《地方病通报》 2001年第3期14-16,共3页
用基因工程技术制备出的细粒棘球绦虫重组抗原 B( r Ag B)表达载体 ,经诱导表达、亲和层析纯化获得具生物活性的重组蛋白质 r Ag B,用 Western- Blot法检测病人血清。结果显示 r Ag B敏感性为 91.6% ( 4 4/48) ,特异性为 93 .8% ( 3 0 /... 用基因工程技术制备出的细粒棘球绦虫重组抗原 B( r Ag B)表达载体 ,经诱导表达、亲和层析纯化获得具生物活性的重组蛋白质 r Ag B,用 Western- Blot法检测病人血清。结果显示 r Ag B敏感性为 91.6% ( 4 4/48) ,特异性为 93 .8% ( 3 0 /3 2 ) ,其中 10例泡球蚴 ( AE)病人及 10例肿瘤病人血清均无交叉反应。说明 r Ag B具有较高的敏感性及特异性 ,可用于包虫病的常规血清学诊断 ,r Ag B在宿主菌 JM10 9内稳定表达 ,因此可在实验室内大量制备用于血清学诊断的 r Ag B。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 棘球蚴病 包虫病 重组抗原b WESTERN-bLOT 血清学试验
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检测包虫病患者血清特异IgG4诊断价值的研究 被引量:6
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作者 黄炳成 贾凤菊 +4 位作者 傅婷霞 刘玉冰 刘波 寇景轩 程义亮 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2001年第4期283-284,共2页
目的 探讨检测患者血清特异 Ig G4诊断包虫病的效果。 方法 采用两种抗原 (棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过 EL ISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异 Ig G4。 结果 粗抗原和抗原 B检测棘球蚴患者血清特异 Ig... 目的 探讨检测患者血清特异 Ig G4诊断包虫病的效果。 方法 采用两种抗原 (棘球蚴囊液粗抗原及其抗原B)通过 EL ISA法检测棘球蚴病病人、非棘球蚴病病人和健康对照血清特异 Ig G4。 结果 粗抗原和抗原 B检测棘球蚴患者血清特异 Ig G4的阳性率分别为 94.4%和 89.8% ;与部分猪囊尾蚴病患者血清出现交叉反应外 ,与肺吸虫病、旋毛虫病、血吸虫病、肝囊肿等患者的血清以及健康对照血清均未出现交叉反应。 结论 检测棘球蚴患者血清特异 Ig G4敏感性高 ,特异性强 ,具有较好的诊断价值。 展开更多
关键词 棘球蚴病 棘球蚴囊液抗原 抗原b IGG4 血清 诊断 包虫病
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细粒棘球蚴重组抗原B 8-kDa亚单位1对囊型包虫病的血清学诊断价值 被引量:5
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作者 马秀敏 吾拉木.马木提 +5 位作者 马海梅 丁剑冰 卢晓梅 林仁勇 伊藤亮 温浩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期741-744,共4页
目的通过基因工程技术获得细粒棘球蚴抗原B8-kDa亚单位1重组蛋白(rEgAgB8/1),探讨其对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值。方法将构建的rEgAgB8/1原核表达质粒(pET32b-rEgAgB8/1)转化至E.coli BL-21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经亲和层析纯... 目的通过基因工程技术获得细粒棘球蚴抗原B8-kDa亚单位1重组蛋白(rEgAgB8/1),探讨其对囊型包虫病(CE)的血清学诊断价值。方法将构建的rEgAgB8/1原核表达质粒(pET32b-rEgAgB8/1)转化至E.coli BL-21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经亲和层析纯化获得高纯度rEgAgB8/1,以rEgAgB8/1为抗原,应用ELISA和Immuno blotting方法对31例手术确诊的囊型包虫病病人血清进行了回顾性检测与分析。结果ELISA和Immuno blotting方法检测CE病人血清阳性率均为90.3%(28/31),3例血清学检测阴性的CE病人均为初次诊断为CE及单纯性肝脏单发感染的病人;血清抗体水平随着病人棘球蚴囊数目增加而有所增加,棘球蚴囊的数目与血清抗体水平的比较用单因素方差分析有显著性差异(F=5.06,P=0.0142),1个囊与2个囊/3个囊组间血清抗体水平有显著差异,2个囊与3个囊组间差异无统计学意义。结论rEgAgB8/1重组蛋白抗原对囊型包虫病有较高的血清学诊断价值,多囊型包虫病人血清抗体水平高于单囊型包虫病人。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 重组抗原b 8-kDa亚单位1(rAgb8/1) 囊型包虫病 血清学诊断
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