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抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建 被引量：4
1
作者 高利利 刘元嫄 +2 位作者 程金平 王茜 王文华 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2010年第3期233-238,共6页
为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量... 为了获得稳定、高效分泌抗软骨藻酸(DA)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用活泼酯法制备软骨藻酸免疫抗原(DA-KLH)和包被抗原(DA-BSA),以DA-KLH免疫BALB/c小鼠,用细胞融合技术筛选抗软骨藻酸单克隆抗体杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备大量单抗,捕获EL ISA法测定小鼠免疫球蛋白亚型,间接ELISA法测定腹水效价;用G蛋白亲和层析法来纯化腹水。结果显示,成功构建2株能稳定分泌DA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2B1和4C2,抗体亚类分别为IgG1和IgG2a,间接EL ISA检测小鼠腹水的抗体效价达1∶64 000,腹水纯化后蛋白浓度为1.27和0.675 mg/mL。研究结果表明,成功制备的抗DA单克隆抗体杂交瘤细胞株稳定、高效,为利用该单抗研制快速检测软骨藻酸的胶体金免疫层析试纸条打下基础。 展开更多
关键词 软骨藻酸 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 被引量：2
2
作者 张光辉 刘占通 李祥瑞 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第5期349-352,共4页
在MDBK细胞上增殖牛病毒性腹泻病毒(BVDV)HN 1 株,用蔗糖密度梯度离心法纯化后免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞并与NS0 骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,3次有限稀释法克隆,得到4株能稳定分泌抗BVDV单克隆抗体(McAb)的... 在MDBK细胞上增殖牛病毒性腹泻病毒(BVDV)HN 1 株,用蔗糖密度梯度离心法纯化后免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,取脾细胞并与NS0 骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选,3次有限稀释法克隆,得到4株能稳定分泌抗BVDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株:3A8、3C7、3C11和3E9。经鉴定,3A8、3C7、3E9株为IgG1亚类,3C11株为IgG2a亚类;杂交瘤细胞的平均染色体数目为99 条。3A8、3C7、3E9、3C11 与BCV、BRV均无交叉反应,但3A8、3C7、3E9与HCV、BDV存在交叉反应,而3C11与HCV、BDV无交叉反应,3C11显示出较好的特异性;杂交瘤细胞培养上清液及小鼠腹水McAb的ELISA效价分别为1∶1 000 和1∶200 000,该杂交瘤细胞连续培养20代后仍能稳定分泌抗体。这些McAb的获得为BVDV的研究及快速诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 牛 病毒性腹泻病毒 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 快速诊断
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亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白的表达及其杂交瘤细胞株的筛选与鉴定 被引量：1
3
作者 王立群 梁盼红 +4 位作者 张少华 侯俊玲 王莉杰 毛立 骆学农 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期70-74,共5页
目的筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(Ta EP45)的杂交瘤细胞株。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板, RT-PCR扩增Ta EP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a (+),转化至大肠埃希菌B... 目的筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(Ta EP45)的杂交瘤细胞株。方法设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板, RT-PCR扩增Ta EP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a (+),转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达带组氨酸(His)标签的TaEP4蛋白,用亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清蛋白质印迹(Western blotting)分析Ta EP45的反应原性。以纯化的Ta EP45免疫BALB/c小鼠(100μg/鼠,首次免疫用等量弗氏完全佐剂,第2、第3次免疫用等量弗氏不完全佐剂),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的Ta EP45和His标签蛋白ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,用亚洲带绦虫全虫抗原Western blotting鉴定杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。结果 RT-PCR扩增获得的Ta EP45基因ORF长1 362 bp,编码453个氨基酸。重组融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为60 000,可被亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清识别。筛选获得5株稳定分泌Ta EP45抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价均≥1∶2 430,亚型分别为IgG2b或IgG1。Western blotting分析结果显示, 5株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。结论表达纯化了Ta EP45,筛选出5株能稳定分泌高滴度Ta EP45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应。 展开更多
关键词 亚洲带绦虫 45 kDa雌激素调节蛋白 杂交瘤细胞株
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建立分泌抗人精液抑制素杂交瘤细胞株及其单克隆抗体的研究
4
作者 徐桂珍 龚守良 +4 位作者 刘淑春 张迎春 吕 刘树铮 夏风琴 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1996年第3期310-312,共3页
用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ—１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。其分泌抗元体均为ＩｇＧ１型，均不与大鼠ＬＨ，ＦＳ... 用人精液抑制素免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与ＮＳ—１小鼠骨髓瘤细胞融合，获得４株分泌抗人精液抑制素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为ＩＢ１０，ＩＧ５，ＩＡ４和ＩＡ６。其分泌抗元体均为ＩｇＧ１型，均不与大鼠ＬＨ，ＦＳＨ和ＰＲＬ产生交叉反应，杂交瘤细胞染色体平均为８６～１０３条。细胞经反复冻存、复苏和传代，仍稳定的分泌特异性抗体。 展开更多
关键词 精液抑制素 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 男性不育
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抗人IgM单克隆抗体的研究—脾内免疫建立抗人IgM单克隆抗体杂交瘤细胞株 被引量：1
5
作者 姚彩霞 李沪霞 《微生物学免疫学进展》 1998年第1期66-68,共3页
用多发性骨髓瘤病人血清中提纯的ＩｇＭ抗原，用脾内免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后与Ｓｐ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合，获得了７株分泌人ＩｇＭ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２５Ｇ１、２５Ｇ３、２５Ｇ４、２５Ｇ５、２５Ｄ２、２５Ｄ３和... 用多发性骨髓瘤病人血清中提纯的ＩｇＭ抗原，用脾内免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠后与Ｓｐ２／Ｏ骨髓瘤细胞融合，获得了７株分泌人ＩｇＭ单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为２５Ｇ１、２５Ｇ３、２５Ｇ４、２５Ｇ５、２５Ｄ２、２５Ｄ３和２５Ｄ５。注射同系小鼠后可诱生含较高效价抗人ＩｇＭ腹水（ＰＨＡ＝１２１２）。该杂交瘤细胞经组织培养传代半年，冻存１４个月后复苏，其分泌ＩｇＭ性能稳定。用ＰＨＡ、ＥＬＩＳＡ做人ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ阻断试验，仅ＩｇＭ可阻断。 展开更多
关键词 IGM 单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤
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抗兔出血症病毒单克隆抗体的制备
6
作者 宋光昌 何锦芳 +5 位作者 李德荣 李钟铎 房省立 曹洪敬 王文志 徐学孟 《中国兽医科技》 CSCD 1992年第1期43-44,共2页
用1∶10稀释的兔出血症病毒(RHDV)加等量佐剂乳化后接种BALB/C小鼠3次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过用间接ELISA试验筛选、克隆出分泌抗RHDV单克隆抗体的杂交瘤细胞林E_3E_6。
关键词 兔 出血症 病毒 单克隆抗体 制备
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