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牛乳铁蛋白素-马盖宁杂合抗菌肽的设计、合成及抑菌活性 被引量:8
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作者 冯兴军 李静 +2 位作者 赵晓宇 宋雪莹 许文杉 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期105-109,共5页
根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12。微量肉汤稀释法测得LFB15-M... 根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12。微量肉汤稀释法测得LFB15-MA12对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、鼠伤寒沙门氏菌C77-31四种细菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibition concentration,MIC)分别为16、64、64和32μg·mL-1,在抑菌浓度范围内未表现出溶血活性。获得了一种具有较高抗菌活性且安全无毒的新型抗菌肽,为研究开发理想的新型抗菌肽分子提供了新思路。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 牛乳铁蛋白素 马盖宁
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杂合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其活性测定 被引量:5
2
作者 刘晓明 姜宁 +1 位作者 张爱忠 蔡鹏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期81-89,共9页
为获得溶血活性低、抗菌活性高的杂合抗菌肽,以家蝇抗菌肽Cec Md和中国林蛙抗菌肽Chensirin为母体肽,并结合毕赤酵母偏爱密码子的原则,设计出6条具有抗菌潜力的新型杂合抗菌肽,将其命名为CC22、CC28、CC29、CC30和CC34(1),CC34,利用SOE-... 为获得溶血活性低、抗菌活性高的杂合抗菌肽,以家蝇抗菌肽Cec Md和中国林蛙抗菌肽Chensirin为母体肽,并结合毕赤酵母偏爱密码子的原则,设计出6条具有抗菌潜力的新型杂合抗菌肽,将其命名为CC22、CC28、CC29、CC30和CC34(1),CC34,利用SOE-PCR技术合成所需的目的基因,并将其克隆至毕赤酵母表达载体p GAPZαA,通过电击转化技术,将其转化至毕赤酵母SMD1168中,经含有Zeocin的抗性平板筛选阳性转化子,YPD液体培养72h后,经Tricine-SDSPAGE检测出目的蛋白,然后采用高效液相色谱法对其进行纯化。检测结果显示,表达产物CC29对大肠杆菌、鸡沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)均为25μg/ml;CC34(1)对大肠杆菌表现相对较弱的抑制作用,最小抑菌浓度为100μg/ml;CC34对鸡沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为50μg/ml;且杂合抗菌肽对有益菌均没有表现出抑制作用。6条杂合肽的溶血活性均呈现较低水平,其中表现出抗菌活性的3条抗菌肽中,以CC29的溶血活性最低,CC34(1)和CC34相对次之。结合抑菌活性,CC29和CC34的抑菌效果较为明显,从而确定溶血活性低且抗菌活性较高的CC29和CC34为新型杂合抗菌肽。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 表达 抑菌活性 溶血活性 毕赤酵母
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新型抗肿瘤杂合抗菌肽的设计、合成及抗肿瘤活性研究 被引量:2
3
作者 陈香君 刘二强 +2 位作者 回丽媛 朱明星 王秀青 《宁夏医科大学学报》 2016年第6期615-619,封4,共6页
目的探讨新型抗肿瘤杂合抗菌肽的设计、合成及抗肿瘤活性。方法利用抗菌肽数据库(http://aps.unmc.edu/AP/main.php)进行抗肿瘤抗菌肽的数据参数分析,筛选出与人类密切相关的抗肿瘤抗菌肽即人中性粒细胞防御素-1(HNP-1)、LL-37和Maximi... 目的探讨新型抗肿瘤杂合抗菌肽的设计、合成及抗肿瘤活性。方法利用抗菌肽数据库(http://aps.unmc.edu/AP/main.php)进行抗肿瘤抗菌肽的数据参数分析,筛选出与人类密切相关的抗肿瘤抗菌肽即人中性粒细胞防御素-1(HNP-1)、LL-37和Maximin 1、Dermaseptin-B2,经Genbank、DNASTAR、Prot Param、Antheprot生物信息学软件分析序列,截取其活性片段,把其中色氨酸(Trp,W)替换为亮氨酸(Leu,L)、增加两个甘氨酸(Gly,G),其主要目的是增加其净电荷数和亲水性,合成新型杂合肽;采用实时阻抗细胞分析技术(RTCA)和噻唑蓝(MTT)法测试合成的新型杂合肽对肿瘤细胞活力及毒性作用。结果经生物信息学软件分析所得5条杂合肽均属于稳定的阳离子抗菌肽,且具有较好的物理活性;同时杂合肽使肿瘤细胞活力降低并表现出抑制活性。结论成功设计合成了5条具有抗肿瘤活性的新型杂合抗菌肽。 展开更多
关键词 杂合肽 抗肿瘤活性 抗菌肽 合成
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杀菌/中和内毒素的双功能杂合抗菌肽LLH的设计及特性研究 被引量:2
4
作者 王瑞琪 刘辰鹏 +3 位作者 姚宏纪 熊婧妍 李国玉 张勇 《海南医学院学报》 CAS 2022年第7期516-521,共6页
目的:设计杀菌/中和内毒素的双功能抗菌肽,并探究其杀菌特性。方法:采用GGGS柔性4肽Linker偶联LBP(86-99)多肽和HLF(1-11)多肽形成新的杂合肽,命名为LLH。EMBOSS软件分析杂合肽LLH二级结构特征;通过微量肉汤2倍稀释法测定LLH杂合肽对大... 目的:设计杀菌/中和内毒素的双功能抗菌肽,并探究其杀菌特性。方法:采用GGGS柔性4肽Linker偶联LBP(86-99)多肽和HLF(1-11)多肽形成新的杂合肽,命名为LLH。EMBOSS软件分析杂合肽LLH二级结构特征;通过微量肉汤2倍稀释法测定LLH杂合肽对大肠杆菌ATCC 25922和大肠杆菌DH5α的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);测定杀菌动力学曲线;测定LLH对内毒素的中和作用;评价LLH对红细胞溶血性。结果:LLH携带+9正电荷,呈现β-折叠和β-转角结构特征,具有较强的疏水性;LLH杂合肽对大肠杆菌ATCC 25922和大肠杆菌DH5α的MIC均为4.0μmol/L,MBC分别为8.0和4.0μmol/L,均强于母体肽;LLH表现出快速杀菌效果;LLH能够显著中和杀菌过程释放的内毒素,降低内毒素释放水平;LLH在高达115μmol/L(400μg/mL)浓度时未表现出显著的溶血性。结论:LLH具有杀菌和中和内毒素的双重功效,快速杀菌,且无显著溶血性。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 LINKER 内毒素 杀菌 溶血性
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新型抗铜绿假单胞菌双功能杂合抗菌肽LLM的设计及特性研究
5
作者 张泽瑾 姚宏纪 +6 位作者 薛兆毅 展羽桐 郭莹洁 吴蒙 蔺可鑫 熊婧妍 张勇 《海南医学院学报》 CAS 2022年第21期1627-1633,共7页
目的:设计抗铜绿假单胞菌的新型双功能(杀菌和中和内毒素)的杂合抗菌肽,并探究其杀菌特性。方法:拟以四肽GGGS-Linker偶联中和内毒素多肽和抗铜绿假单胞菌活性抗菌肽,构建新型双功能杂合抗菌肽,并对结构特征进行分析;测定其抗铜绿假单... 目的:设计抗铜绿假单胞菌的新型双功能(杀菌和中和内毒素)的杂合抗菌肽,并探究其杀菌特性。方法:拟以四肽GGGS-Linker偶联中和内毒素多肽和抗铜绿假单胞菌活性抗菌肽,构建新型双功能杂合抗菌肽,并对结构特征进行分析;测定其抗铜绿假单胞菌的活性和杀菌特点;进一步评价目标杂合肽对内毒素的中和作用和对兔红细胞的溶血性。结果:设计并获得具有高抗铜绿假单胞菌和中和内毒素双重功效的杂合抗菌肽LLM,其携带+8正电荷;LLM对铜绿假单胞菌P.aeruginosa CMCC10104和P.aeruginosa ATCC 9027的MIC分别为2、4μmol/L,MBC/MIC=1,其抗菌活性均优于母体肽;LLM能够快速杀菌,1 h处理能够杀灭99%以上的铜绿假单胞菌。LLM对内毒素呈现较强的中和作用,能够显著降低培养液中内毒素产生水平;LLM在高达115μmol/L(400μg/mL)时对兔红细胞没有表现出显著的溶血性。结论:LLM抗铜绿假单胞菌的MIC为2~4μmol/L,能够中和内毒素,可以快速杀菌,且浓度低于115μmol/L时未表现出显著溶血性。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 铜绿假单胞菌 内毒素中和 杀菌 溶血性
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杂合抗菌肽设计及生物学活性的研究进展 被引量:4
6
作者 武如娟 张日俊 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期94-100,共7页
随着抗生素在饲料中滥用导致的问题日趋严重,抗菌肽因其分子量小、抗菌谱广、抗菌活性高、耐热性强、不易产生抗药性、对高等生物正常细胞无毒害等优点已成为安全绿色抗生素添加剂替代品的理想选择。随着对抗菌肽结构、功能与杀菌机理... 随着抗生素在饲料中滥用导致的问题日趋严重,抗菌肽因其分子量小、抗菌谱广、抗菌活性高、耐热性强、不易产生抗药性、对高等生物正常细胞无毒害等优点已成为安全绿色抗生素添加剂替代品的理想选择。随着对抗菌肽结构、功能与杀菌机理研究的深入,人们开始尝试通过各种生物学手段设计杀菌活力更强、抗菌谱更广的杂合抗菌肽。从杂合抗菌肽的设计、生物学活性以及未来的研究方向等方面综述了杂合抗菌肽的研究进展。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 生物学活性 母源抗菌肽
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Hybrid Antimicrobial Peptide Buforin Ⅱ-Cecropin B Exhibits Antimicrobial Activity 被引量:2
7
作者 Xin NIE Li ZHANG +2 位作者 Shanshan WANG Jie DING Zhiping ZHAO 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2015年第1期55-58,共4页
[ Objective ] This study aimed to investigate the antimicrobial activity of hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B. [ Method ] Gene fragment BC encoding the hybrid antimicrobial peptide Buforin II-Cecropin... [ Objective ] This study aimed to investigate the antimicrobial activity of hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B. [ Method ] Gene fragment BC encoding the hybrid antimicrobial peptide Buforin II-Cecropin B was synthesized by SOE-PCR with six primers designed according to the published amino acid sequences. Then, the BC gene fragment was ligated into pET32a vector and expressed in BI21. Antimierobial ability of the crude hybrid antimicrobial peptide was detected with the Oxford cup method. [ Result] The BC gene fragment was correctly amplified by SOE-PCR and ligated into pET32a vector, to construct the expression vector pET32-BC. The hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B was expressed in BI21 after induction by IPTG. The optimal induction time was 2 h. Antimicrobial activity assay suggested that the hybrid antimicrobial peptide possessed antimicrobial activity to Escherichia coli and Bacillus subtilis. [ Conclusion] The hybrid antimicrobial peptide buforin II-cecropin B exhibited antimicrobial activity to Gram-negative E. coli and Gram-positive B. subtilis strains. 展开更多
关键词 hybrid antimicrobial peptide Buforin II Cecropin B EXPRESSION antimicrobial activity
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杂合抗菌肽Mel-MytB在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性测定 被引量:4
8
作者 张宏刚 吴剑良 李莉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期3246-3252,共7页
为了获得抗菌活性较强的抗菌肽,将蜂毒肽(Melittin)与贻贝素B(Mytilin-B)的核心功能序列杂合,以Melittin(3-14)和Mytilin-B(13-27)的成熟肽段作为模板序列,根据巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,采用SOE方法合成杂合抗菌肽Mel... 为了获得抗菌活性较强的抗菌肽,将蜂毒肽(Melittin)与贻贝素B(Mytilin-B)的核心功能序列杂合,以Melittin(3-14)和Mytilin-B(13-27)的成熟肽段作为模板序列,根据巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)偏好密码子,采用SOE方法合成杂合抗菌肽Mel-MytB(MEM)基因。改造后的基因克隆到pPICZα-A质粒,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A-MEM,而后经SacⅠ酶切线性化后电转入毕赤酵母受体菌X-33。结果表明,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子质量约3.0ku的Mel-MytB杂合抗菌肽获得表达,具有热稳定性和酸稳定性,煮沸40min、pH 2.0~10.0范围内抑菌活性基本不变。抗菌特性研究结果表明,该表达产物具有广谱抗菌活性,其对大肠杆菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923/ATCC6538、肠道沙门氏菌ATCC13076、鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028、副溶血弧菌ATCC17802、创伤弧菌ATCC27562、枯草芽孢杆菌ATCC6633的MIC值分别为5.1、2.2、2.0、4.6、7.6、9.4、13.2和59.4μg/mL。因此,重组抗菌肽Mel-MytB在疾病防治和动物饲料添加剂等方面具备较好的应用前景。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 蜂毒肽 贻贝素B 毕赤酵母 抑菌活性
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杂合抗菌肽Scy-Hep3在毕赤酵母中的分泌表达及其抗菌活性 被引量:3
9
作者 彭会 王克坚 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期551-557,共7页
为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽,通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin (简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3 (简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadinhepcidin3 (简记为scy-hep3),将scy-hep3与毕赤酵母P... 为获得体外稳定表达的高抗菌活性新型抗菌肽,通过重叠延伸PCR技术获得了拟穴青蟹抗菌肽Scygonadin (简记为Scy)和斜带石斑鱼抗菌肽Hepcidin 3 (简记为Hep3)的杂合抗菌肽基因scygonadinhepcidin3 (简记为scy-hep3),将scy-hep3与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-scy-hep3,用电转化法将其转化至毕赤酵母GS115菌中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得杂合抗菌肽Scy-Hep3,并进行抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-scy-hep3,用体积分数为0. 5%的甲醇诱导表达24 h,分泌表达上清液中获得了稳定表达的相对分子质量约24 000的表达产物,与预期杂合抗菌肽Scy-Hep3的大小相符;抗菌活性结果表明,杂合抗菌肽Scy-Hep3具有广谱抗菌活性,对被测的3种革兰氏阳性菌(溶壁微球菌Micrococcus lysodeikticus、谷氨酸棒杆菌Corynebacterium glutamicum和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus)和4种革兰氏阴性菌(施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri、荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila和弗氏志贺氏菌Shigella flexneri)具有较强的抗菌活性(最小抑菌浓度MIC<12μmol/L);对比于单一的抗菌肽Scy和Hep3,杂合抗菌肽Scy-Hep3的抗菌活性显著增强。本研究结果将为杂合抗菌肽Scy-Hep3的生产和开发应用提供数据资料。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 毕赤酵母 重组表达 抗菌活性
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杂合抗菌肽基因的设计及表达载体的构建 被引量:1
10
作者 王金固 杜娟 李尚伟 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2011年第5期133-136,共4页
为高效表达具有高抗菌活性的抗菌肽,根据Magainin 2(MA)、Sapecin(SA)和Melittin(ME)基因核心序列,设计杂合抗菌肽MA-SA-ME(MSM)基因并进行密码子优化。生物信息学分析显示,该抗菌肽具有很好的抗菌作用。将MSM基因与毕赤酵母表达载体pP... 为高效表达具有高抗菌活性的抗菌肽,根据Magainin 2(MA)、Sapecin(SA)和Melittin(ME)基因核心序列,设计杂合抗菌肽MA-SA-ME(MSM)基因并进行密码子优化。生物信息学分析显示,该抗菌肽具有很好的抗菌作用。将MSM基因与毕赤酵母表达载体pPICZα-A连接,构建重组表达载体pPICZ-αA-MSM,以实现抗菌肽基因MSM在毕赤酵母GS115中进行分泌表达。构建的重组表达质粒经PCR检测、双酶切和测序3步鉴定表明,构建的重组表达质粒与预期完全相符,可用于下一步的毕赤酵母表达试验。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 毕赤酵母 基因克隆 表达载体构建
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CecA-Mag及其突变体在Pichia pastoris中的表达及抗菌活性试验 被引量:1
11
作者 王秀青 朱明星 +2 位作者 张爱君 杨风琴 哈丽娜 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第2期56-60,共5页
参考相关天蚕素类抗菌肽的作用机制及抗菌肽结构与功能关系的假说,设计了杂合肽CecA-mag的3个突变体并利用重组聚合酶链式反应定点诱变技术,使突变体得以合成,利用琼脂孔扩散法检测CecA-mag和其突变体对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等临... 参考相关天蚕素类抗菌肽的作用机制及抗菌肽结构与功能关系的假说,设计了杂合肽CecA-mag的3个突变体并利用重组聚合酶链式反应定点诱变技术,使突变体得以合成,利用琼脂孔扩散法检测CecA-mag和其突变体对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等临床分离菌株的抑菌效价。结果显示,3个突变体的抑菌活性比CecA-mag分别提高了1.2、1.2、1.5倍。从而说明天蚕素类抗菌肽的作用机制与其所带电荷数有很大的关系,适当的增加其电荷数能进一步提高其抑菌活性。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽CecA-mag PICHIA PASTORIS 分泌表达 抑菌活性
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杂合抗菌肽CecA_mil的改造及在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:17
12
作者 张素芳 曹瑞兵 +2 位作者 贾赟 周斌 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期218-222,共5页
参照毕赤氏巴斯德酵母 (Pichiapastoris)偏好密码子 ,改造并化学合成杂合抗菌肽CecA_mil基因 ,改造后的CecA_mil基因克隆到pPICZα_A载体中 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα_A_CM ,转化Pichiapastoris受体菌X_33。在醇氧化酶 (AOX)... 参照毕赤氏巴斯德酵母 (Pichiapastoris)偏好密码子 ,改造并化学合成杂合抗菌肽CecA_mil基因 ,改造后的CecA_mil基因克隆到pPICZα_A载体中 ,构建分泌型重组酵母表达载体pPICZα_A_CM ,转化Pichiapastoris受体菌X_33。在醇氧化酶 (AOX)启动子调控下 ,分子量约 1 9kD的CecA_mil杂合抗菌肽获得表达 ,经表达条件优化 ,重组酵母菌的摇瓶发酵产率可达到 2 4 5 μg mL。抗菌特性研究表明 ,该表达产物具有广谱抗菌活性 ,对多数G- 菌及G+ 菌均有较好的抑菌活性 ,特别是对氨苄青霉素抗性菌和卡那霉素抗性菌抑杀效果更好 ;具有热稳定性和酸稳定性。这些特点使得重组抗菌肽CecA_mil在食品防腐、疾病防治和动物饲料添加剂等方面显露出很好的应用前景。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽CecA-mil PICHIA PASTORIS 分泌表达 抑菌活性 抗菌谱
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天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin突变体的合成以及在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:6
13
作者 王秀青 朱明星 +2 位作者 张爱君 丁淑琴 风琴 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期95-98,共4页
根据天蚕素类抗菌肽作用机制假说,设计引物对前期构建成功的载体天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin进行定点突变,使其生成杂合肽的衍生物,测序正确后转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子质量约119ku的ce... 根据天蚕素类抗菌肽作用机制假说,设计引物对前期构建成功的载体天蚕素类杂合肽cecropinA-magainin进行定点突变,使其生成杂合肽的衍生物,测序正确后转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX)启动子调控下,分子质量约119ku的cecA-mag杂合抗菌肽突变体获得表达,并通过琼脂扩散试验对表达产物的抑菌活性与cecA-mag进行了比较。结果表明,突变体对金黄色葡萄球菌抑菌活性比cecA-mag提高了1.2倍。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽cecA—mag 突变体 毕赤酵母 分泌表达 抑菌活性
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杂合抗菌肽MgJ基因在毕赤酵母中表达条件的优化 被引量:2
14
作者 尹佳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期162-166,共5页
为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达... 为确定杂合抗菌肽MgJ基因的最佳诱导表达条件,将构建好的重组表达载体p PICZαA-MgJ经SacⅠ线性化处理,电转入巴斯德毕赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增验证,甲醇诱导表达。优化杂合抗菌肽MgJ诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、初始菌体浓度表达条件。结果表明杂合抗菌肽MgJ的最佳表达条件为:28℃、250 r/min诱导培养,每24 h添加体积分数0.5%的甲醇,诱导时间120 h,MgJ表达量可达11.9 mg/L。纯化后获得的表达产物MgJ对S.aureus ATCC 29213有较好的抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)为10μg/m L。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽MgJ 毕赤酵母 表达条件优化
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