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燃煤PM_(2.5)不同组分对血管内皮细胞的氧化损伤效应 被引量:26
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作者 王菲菲 王先良 +3 位作者 刘芳盈 吕占禄 钱岩 朋玲龙 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期780-785,共6页
为了解细颗粒物不同组分在心血管系统损伤中的毒性机制,以大同散煤为样品煤,提取燃煤PM2.5全颗粒物、无机组分及有机组分,分别对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,采用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及丙二醛(MDA)... 为了解细颗粒物不同组分在心血管系统损伤中的毒性机制,以大同散煤为样品煤,提取燃煤PM2.5全颗粒物、无机组分及有机组分,分别对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,采用超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及丙二醛(MDA)指标检测PM2.5不同组分对EA.hy926细胞氧化损伤程度的影响.结果表明,燃煤PM2.5各组分对EA.hy926细胞染毒24h后,随着染毒剂量的增加,细胞上清液中SOD活力均下降,与对照组相比差异显著,而相同剂量组比较,其抑制SOD活力能力依次为:有机组分>无机组分>全颗粒物,且相同剂量组不同组分间的比较均有统计学差异;GSH-Px活力均下降,具有剂量依赖性,引起GSH-Px活力下降程度基本具有无机组分>有机组分>全颗粒物的趋势,但统计学意义不显著;MDA含量分别有不同程度的增加,各组分所致的MDA含量大小存在低剂量组有机组分>全颗粒物>无机组分,高剂量组全颗粒物>无机组分>有机组分趋势,随着剂量增加,全颗粒物和无机组分引起MDA含量明显增加,而有机组分则变化趋于平缓.可见,燃煤PM2.5不同组分均对血管内皮细胞EA.hy926氧化损伤作用明显,SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性降低. 展开更多
关键词 燃煤细颗粒物 PM 2 5 血管内皮细胞 EA hy926 氧化损伤 PM2 5 EA hy926
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嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66CGA47酌抑制脓毒症血清所致血管内皮细胞高通透性的研究 被引量:7
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作者 古妮娜 张丹 +4 位作者 罗丽 陈晓迎 谢明 刘景仑 姜丽萍 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期715-719,共5页
目的观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(Chromfungin,CHR)对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于人脐静脉内皮细胞株EA.hy926,采用四甲基偶氮唑... 目的观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66(Chromfungin,CHR)对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响。方法分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于人脐静脉内皮细胞株EA.hy926,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、Transwell小室法测定EA.hy926的活性[吸光度(A)值]和通透性(A值),免疫荧光法镜下观察细胞纤维肌动蛋白(F—actin)的形态和分布。结果与空白对照组比较,1、10、100nmol/LCHR对EA.hy926细胞活性无明显影响(A值:1.219±0.253、1.179±0.065、1.179±0.062比1.306±0.162,均P〉0.05),而1000nmol/L CHR对EA.hy926细胞活性有显著抑制作用(A值:1.049±0.256比1.306±0.162,f=-2.390,P=0.031)。与空白对照组比较,1、10、100nmol/L CHR作用下EA.hy926细胞通透性明显降低(A值:1.619±0.324、1.496±0.356、1.132±0.280比2.315±0.440,P〈0.05或P〈0.01);脓毒性休克患者血清或TNF—α单独作用下EA.hy926细胞通透性明显升高(血清组A值:1.204±0.248比0.277±0.017,P〈0.01;TNF-α组A值:2.485±0.113比1.602±0.679,P〈0.05);1、10、100nmol/L的CHR既可明显降低脓毒性休克患者血清引起的高通透性(A值:0.299±0.065、0.224±0.028、0.131±0.015比1.204±0.248,均P〈0.01),也可明显降低TNF—α引起的高通透性(A值:1.995±0.394、1.920±0.096、1.744±0.475比2.485±0.113,P〈0.05或P〈0.01),且在1-100nmol/L范围内,CHR的上述作用呈现一定的剂量依赖性。与空白对照组比较,脓毒性休克患者血清或TNF-α单独作用下,F—actin细胞骨架发生明显重组和再分布,应力纤维形成增多,而CHR可以抑制上述变化的发生。结论CHR可以抑制脓毒性休克患者血清引起的血管内皮细胞的高通透性,且呈现一定的剂量依 展开更多
关键词 嗜铬粒蛋白A 嗜铬粒蛋白A衍生多肽 血管内皮细胞 人脐静脉内皮细胞株EA hy926 内皮细胞通透性 脓毒症
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CGA 衍生多肽 CHR 抑制 TNF -α引起的血管内皮细胞高通透性的研究 被引量:3
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作者 古妮娜 张丹 +4 位作者 罗丽 陈晓迎 谢明 刘景仑 姜丽萍 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期747-751,共5页
目的:观察嗜铬粒蛋白 A ( chromogranin A , CGA )的衍生多肽 CGA47-66(chromogranin, CHR)对TNF-α引起血管内皮细胞(EA.hy926)高通透性的影响和初步机制。方法分别用 CHR、TNF -α作用人血管内皮细胞系 EA.hy926,应用 Tra... 目的:观察嗜铬粒蛋白 A ( chromogranin A , CGA )的衍生多肽 CGA47-66(chromogranin, CHR)对TNF-α引起血管内皮细胞(EA.hy926)高通透性的影响和初步机制。方法分别用 CHR、TNF -α作用人血管内皮细胞系 EA.hy926,应用 Transwell 小室法、PCR、Western-blot检测单层内皮细胞通透性的改变,血管内皮钙黏蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白的表达,以及磷酸化p38丝裂素活化蛋白激酶( p38 mitogen activated protien kinase , p38 MAPK)和总p38 MAPK等渗透性相关蛋白的表达。结果与空白对照组比较,TNF-α组EA.hy926细胞的通透性显著增高(2.479±0.117比1.769±0.554,t=3.543,P=0.008),VE-cadherin mRNA的表达显著降低(1.145±0.035比1.593±0.161, t=-4.707, P=0.035),而CHR (1 nM、10 nM、100 nM)组中EA.hy926细胞的VE-cadherin mRNA的表达较空白对照组有显著增加(1.512±0.04、1.615±0.170、1.918±0.355比1.162±0.189,P<0.05),同时CHR(1 nM、10 nM、100 nM、1000 nM)能够缓解TNF-α组引起的高渗透性改变(1.954±0.379、1.835±0.090、1.430±0.349、1.559±0.447比2.479±0.117,P<0.05)和 VE -cadherin mRNA 的低表达(1.541±0.149、1.529±0.098、2.087±0.437、1.640±0.160比1.145±0.035,P<0.05),并且在1~100 nM范围内,上述作用呈剂量依赖性;Western-blot检测到TNF-α组EA.hy926细胞的VE-cadherin蛋白表达明显低于空白对照组,磷酸化p38 MAPK蛋白表达明显高于空白对照组;TNF-α组+CHR组与TNF-α组相比,TNF-α组+CHR组中VE -cadherin 蛋白的表达明显增加,磷酸化p38 MAPK蛋白明显降低。结论 CGA衍生多肽CHR能改善TNF-α引起的血管内皮细胞高通透性,这一作用在一定剂量范围内呈剂量依赖性,并且可能与p38 MAPK信号通路相关。 展开更多
关键词 嗜铬粒蛋白A(CGA) 衍生多肽CGA47-66 (CHR) 肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 血管内皮细胞(EA hy926) 通透性 CHROMOGRANIN (CGA) Chromofungin (CHR) TNF-Α Vascular endothelial cells (EA hy926)
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白介素-1β通过上调血管内皮细胞中FucT-Ⅶ及蛋白糖基化调控细胞间黏附作用 被引量:1
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作者 琚娜娜 吴明军 +4 位作者 赵德璋 屈茹楠 王应雄 杨竹 于超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期337-342,共6页
目的探讨炎症因子白介素-1β(IL-1β)是否通过α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FucT-Ⅶ)对血管内皮细胞中功能蛋白糖基化修饰调控单核细胞与内皮细胞的黏附作用,为揭示炎症因子损伤血管内皮细胞的分子机制奠定基础。方法建立不同浓度IL-1β损伤E... 目的探讨炎症因子白介素-1β(IL-1β)是否通过α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FucT-Ⅶ)对血管内皮细胞中功能蛋白糖基化修饰调控单核细胞与内皮细胞的黏附作用,为揭示炎症因子损伤血管内皮细胞的分子机制奠定基础。方法建立不同浓度IL-1β损伤EA.hy926血管内皮细胞的模型,通过与荧光标记的THP-1单核细胞共培养,观察细胞间的黏附作用;采用Real time-PCR及Western blot检测EA.hy926细胞中FucT-Ⅶ差异表达;用蛋白免疫印迹法检测细胞内sLex糖支链蛋白差异表达;运用siRNA干扰FucT-Ⅶ基因,观察细胞间黏附的变化。结果 IL-1β可以促进内皮细胞与单核细胞的黏附,同时内皮细胞中FucT-Ⅶ表达上调;sLex糖支链蛋白表达也上调。当干扰内皮细胞中FucT-Ⅶ基因后,细胞间的黏附能力明显下降,且sLex糖支链蛋白表达下调。结论 IL-1β可能通过调控EA.hy926细胞中FucT-Ⅶ的糖基化修饰作用增加其对单核细胞的黏附能力,这可能是炎症早期发生时影响血管内皮功能新的重要分子机制之一。 展开更多
关键词 IL-1β FucT-Ⅶ SLEX EA hy926 糖基化 细胞黏附
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蒙花苷对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎症损伤及TLR4/IκBα/NF-κB信号通路的影响 被引量:37
5
作者 吴亚军 苏洁 +3 位作者 黄浦俊 陈国杨 陈素红 吕圭源 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 2017年第5期637-643,共7页
目的探讨蒙花苷对血管内皮细胞的保护作用和机制。方法 MTT法检测肿瘤坏死因子(TNF-?)和蒙花苷对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)活性的影响;采用TNF-?(50 ng·m L-1)刺激EA.hy926,加入不同浓度(5,15和25?mol·L-1)蒙花苷处理24 h,D... 目的探讨蒙花苷对血管内皮细胞的保护作用和机制。方法 MTT法检测肿瘤坏死因子(TNF-?)和蒙花苷对人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)活性的影响;采用TNF-?(50 ng·m L-1)刺激EA.hy926,加入不同浓度(5,15和25?mol·L-1)蒙花苷处理24 h,DAPI染色法测定EA.hy926细胞与单核细胞(THP-1)的黏附能力;Western blot法检测细胞中Toll样受体(TLR4)、核因子-?B抑制蛋白(IκBα)、核因子-?B(NF-?B)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)蛋白的表达;RT-PCR法检测ICAM-1、VCAM-1 m RNA的表达;ELISA法检测细胞上清液中白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的含量。结果蒙花苷可显著抑制TNF-?刺激EA.hy926细胞与THP-1细胞间黏附作用,降低EA.hy926细胞分泌的炎症因子IL-1、IL-6和IL-8水平。Western blot和RT-PCR结果表明蒙花苷能减少EA.hy926细胞中TLR4、NF-?B、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达量及ICAM-1、VCAM-1 m RNA的表达量,同时能升高细胞中IκBα的蛋白表达量。结论蒙花苷能缓解血管内皮细胞炎症损伤,其作用机制可能主要是通过抑制TLR4/IκBα/NF-κB信号通路发挥效用。 展开更多
关键词 蒙花苷 TNF-Α EA.hy926 炎症 IκBα/NF-κB
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燃煤PM_(2.5)不同组分对血管内皮细胞的毒性 被引量:24
6
作者 刘芳盈 丁明玉 +1 位作者 王菲菲 李杰 《环境科学研究》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第6期684-690,共7页
采用MTS法评价燃煤PM2.5不同组分对血管内皮细胞EA.hy926的细胞毒性.以大同散煤为样品煤,在实验室采用固定源稀释通道采集燃煤PM2.5,提取燃煤PM2.5全颗粒物、无机组分及有机组分,分别对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,采用MTS法检测P... 采用MTS法评价燃煤PM2.5不同组分对血管内皮细胞EA.hy926的细胞毒性.以大同散煤为样品煤,在实验室采用固定源稀释通道采集燃煤PM2.5,提取燃煤PM2.5全颗粒物、无机组分及有机组分,分别对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,采用MTS法检测PM2.5不同组分对EA.hy926细胞增殖的影响.结果表明:燃煤PM2.5全颗粒物、无机组分及有机组分均可抑制血管内皮细胞增殖,且具有剂量-反应关系;在相同染毒剂量组内,有机组分的活性抑制影响显著高于全颗粒物和无机组分,其差异具有统计学意义,但全颗粒物和无机组分之间并无统计学差异.PM2.5的来源和组分是影响其细胞毒性的重要因素,燃煤PM2.5不同组分均可抑制血管内皮细胞增殖,血管内皮损伤是PM2.5致心血管毒性的可能机制之一. 展开更多
关键词 燃煤细颗粒物 PM2.5 血管内皮细胞 EA.hy926 细胞毒性 MTS
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蒙花苷对脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症损伤的影响 被引量:17
7
作者 许韩婷 苏洁 +2 位作者 吴亚军 陈素红 吕圭源 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期29-32,共4页
目的:在体外细胞水平上模拟血管内皮炎症损伤,探讨蒙花苷对血管内皮细胞炎症损伤的保护作用及其机制。方法:采用脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(EA.hy926),加入不同浓度的蒙花苷处理,DAPI染色法测定EA.hy926与单核细胞(THP-1)的黏附能... 目的:在体外细胞水平上模拟血管内皮炎症损伤,探讨蒙花苷对血管内皮细胞炎症损伤的保护作用及其机制。方法:采用脂多糖(LPS)刺激人脐静脉内皮细胞(EA.hy926),加入不同浓度的蒙花苷处理,DAPI染色法测定EA.hy926与单核细胞(THP-1)的黏附能力,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-1(IL-1)水平,Western blot法检测细胞中p38、JNK、ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、核因子-κB(NF-κB)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的蛋白表达。结果:蒙花苷(5、10、20mol/L)可显著抑制LPS诱导的EA.hy926与THP-1的细胞间黏附作用,减少EA.hy926分泌的炎性因子TNF-α和IL-1水平,降低细胞中JNK、ERK1/2、p-p38、p-JNK、p-ERK1/2、NF-κB和ICAM-1的蛋白表达。结论:蒙花苷可通过抑制NF-κB及其相关信号通路的活化来减少炎性黏附和炎性因子分泌,从而缓解LPS引起的血管内皮细胞炎症损伤。 展开更多
关键词 蒙花苷 人脐静脉内皮细胞 脂多糖 炎症损伤
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化瘀祛痰方药对H_2O_2诱导人脐带静脉内皮细胞氧化应激保护作用的研究 被引量:14
8
作者 贾连群 杨关林 +3 位作者 任路 冯峻屹 陈文娜 陈阳 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2011年第9期44-45,64,共3页
目的探讨化瘀祛痰方药含药血清对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞(EA.hy926细胞)氧化应激的保护作用。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为5组。正常对照组:仅用DMEM完全培养基培养,不加任何药物;H2O2刺激组:培养液中加入终浓度为300μmol/L ... 目的探讨化瘀祛痰方药含药血清对H2O2诱导人脐带静脉内皮细胞(EA.hy926细胞)氧化应激的保护作用。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为5组。正常对照组:仅用DMEM完全培养基培养,不加任何药物;H2O2刺激组:培养液中加入终浓度为300μmol/L H2O2;含药血清低剂量组、含药血清中剂量组、含药血清高剂量组分别使用5%、10%、20%含药血清预处理24 h后加入终浓度为300μmol/L H2O2。各组细胞培养24 h后进行各项指标测定。采用MTT法检测细胞活性,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)活性。采用细胞活性氧检测试剂盒,通过荧光显微镜观察细胞内活性氧水平的变化。结果与正常对照组相比,H2O2刺激后细胞活性明显下降,SOD、NO活性显著降低,而LDH活性、MDA含量则显著增加,活性氧水平明显升高。10%、20%化瘀祛痰方药含药血清可显著提高细胞存活率及SOD、NO活性,而显著降低LDH活性、MDA含量及活性氧水平。结论化瘀祛痰方药对H2O2诱导EA.hy926细胞氧化应激具有保护作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的作用机制之一。 展开更多
关键词 化瘀祛痰 含药血清 动脉粥样硬化 氧化应激 EA.hy926细胞 活性氧
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左旋氨氯地平对血管内皮细胞氧化应激损伤的影响 被引量:13
9
作者 张园 海荣 陆欣 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期159-162,共4页
目的研究左旋氨氯地平对过氧化氢(H_2O_2)诱导人血管内皮细胞株EA.hy926氧化应激损伤的影响。方法实验随机分为5组,正常组,模型组(300μmol·L^(-1)H_2O_2)及左旋氨氯地平低、中、高剂量组(0.5,1,2μmol·L^(-1))。噻唑蓝法检... 目的研究左旋氨氯地平对过氧化氢(H_2O_2)诱导人血管内皮细胞株EA.hy926氧化应激损伤的影响。方法实验随机分为5组,正常组,模型组(300μmol·L^(-1)H_2O_2)及左旋氨氯地平低、中、高剂量组(0.5,1,2μmol·L^(-1))。噻唑蓝法检测各组细胞活力;二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)探针检测各组细胞内活性氧水平;分光光度法检测各组丙二醛及超氧化物歧化酶含量;Annexin V-FITC流式双染检测各组细胞凋亡率;分光光度法检测各组天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)活性;免疫印迹技术分析核因子-κB(NF-κB)通路的激活状况。结果与正常组比较,模型组中EA.hy926细胞活力下降(P<0.01),活性氧及丙二醛含量上升(P<0.01),超氧化物歧化酶含量下降(P<0.01),Caspase 3活性上升(P<0.01),NF-κB p65磷酸化水平降低(P<0.01);与模型组比较,0.5,1,2μmol·L^(-1)左旋氨氯地平能显著细胞活力(P<0.05),提高超氧化物歧化酶含量(P<0.05),降低活性氧及丙二醛含量(P<0.05),抑制Caspase 3活性及NF-κB p65磷酸活化水平(P<0.05)。结论左旋氨氯地平可抵抗H_2O_2诱导的人血管内皮细胞株EA.hy926细胞氧化应激作用,是通过抑制活性氧等物质的产生及细胞凋亡实现的。 展开更多
关键词 左旋氨氯地平 人血管内皮细胞株EA.hy926 氧化应激 细胞凋亡
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绞股蓝不同有效成分对氧化损伤内皮细胞线粒体膜电位的影响 被引量:11
10
作者 曹慧敏 宋囡 +5 位作者 贾连群 陈文娜 杨关林 杨芳 陈语柔 孙晓宁 《解剖科学进展》 2017年第5期447-450,共4页
目的探讨绞股蓝不同成分(绞股蓝总皂苷Gps、绞股蓝皂苷XILX GpXILX、绞股蓝皂苷A GpA、人参皂苷GRb3)对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞氧化应激损伤线粒体膜电位的影响。方法采用CCK-8法分别观察不同浓度Gps、GpXILX、GpA、GRb3对EA.Hy92... 目的探讨绞股蓝不同成分(绞股蓝总皂苷Gps、绞股蓝皂苷XILX GpXILX、绞股蓝皂苷A GpA、人参皂苷GRb3)对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞氧化应激损伤线粒体膜电位的影响。方法采用CCK-8法分别观察不同浓度Gps、GpXILX、GpA、GRb3对EA.Hy926细胞活力的影响,明确它们作用于EA.Hy926细胞的浓度;采用ox-LDL诱导氧化应激损伤模型,分别予Gps、GpXILX、GpA、GRb3处理24h。用微量法检测细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及T-AOC含量,流式细胞仪检测各组细胞线粒体膜电位的变化。结果不同浓度Gps、GpXILX、GpA、GRb3对EA.hy926细胞增殖无明显的抑制效应。ox-LDL诱导细胞后使细胞中MDA含量增高,SOD活力降低,T-AOC含量降低。而Gps、GpXILX、GpA、GRb3预处理能降低MDA的含量,Gps、GpXILX、GRb3能增强SOD的活性,提高T-AOC含量。线粒体膜电位数据显示,ox-LDL诱导细胞后使细胞线粒体膜电位降低。而Gps、GpXILX、GpA、GRb3处理细胞后能显著增加EA.hy926细胞线粒体膜电位。结论不同成分绞股蓝对ox-LDL所致内皮细胞氧化应激损伤具有不同程度的保护作用,可能与降低EA.hy926细胞氧化应激,提高抗氧化防御和稳定线粒体膜电位有关。 展开更多
关键词 绞股蓝皂苷 内皮细胞损伤 氧化应激 线粒体膜电位 EA.hy926细胞
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桂皮醛经JAK2/STAT3通路抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖、迁移及成管 被引量:11
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作者 陈明霞 刘建勋 +5 位作者 武曲星 王攀 连增林 刘晔 李志刚 任钧国 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期28-33,共6页
目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组... 目的:为探讨桂皮醛对糖尿病视网膜病变新生血管的作用及机制,观察了桂皮醛对血管内皮生长因子(VEGF)诱导EA. hy926细胞增殖、迁移、成管以及Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路的影响。方法:将EA.hy926细胞分成空白组、模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法和划痕实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞增殖和迁移作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+桂皮醛(90,150μmol·L-1)组,采用管腔形成实验检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞成管作用的影响;将EA. hy 926细胞分成空白组,模型组(7μg·L-1VEGF),VEGF+AG490 (50μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(90μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)组,VEGF+桂皮醛(150μmol·L-1)+AG490(50μmol·L-1)组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞JAK2/STAT3通路的影响。结果:与空白组比较,模型组能够显著地促进EA. hy 926细胞增殖和迁移(P <0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(60,90,120,150μmol·L-1)组能显著抑制VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖和迁移(P <0. 01)。与空白组比较,VEGF对EA. hy 926细胞成管具有一定的促进作用,成管的节点数、交叉点数、网眼数和血管分支数均有增加,但无统计学差异。与模型组比较,桂皮醛(90,150μmol·L-1)组对成管的节点数、交叉点数和网眼数均有明显抑制作用(P <0. 05,P <0. 01)。与空白组比较,模型组p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达明显升高(P <0. 05,P <0. 01)。与模型组比较,桂皮醛(150μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P <0. 01),桂皮醛(90μmol·L-1)能够显著抑制VEGF引起的p-STAT3,STAT3蛋白表达升高(P <0. 05,P <0. 01)。结论:桂皮醛对VEGF诱导EA. hy 926细胞的增殖、迁移、成管具有明显的抑制作用,该作用与抑制JAK2/STAT3通路的激活有关。 展开更多
关键词 桂皮醛 血管内皮生长因子(VEGF) EA.hy 926细胞 增殖 迁移 成管 Janus激酶2/信号传导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)通路
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白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响 被引量:12
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作者 陈明亮 易龙 +6 位作者 金鑫 谢琦 周曦 陈春烨 张婷 王丽 糜漫天 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1255-1258,共4页
目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测... 目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 白藜芦醇 血管内皮细胞 炎性反应 ICAM-1 TNFR1
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大蒜素对PM2.5损伤EA.hy926内皮细胞的保护作用及机制 被引量:10
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作者 万强 杨玉萍 刘中勇 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期692-697,共6页
目的探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及大蒜素的保护作用及机制。方法采集大气PM2.5分别以20、200、400 mg·L^(-1)染毒EA.hy926细胞24h,MTT法测细胞存活率;流式细胞术测细胞凋亡;Western blot法测p-ERK1/2、Bax、... 目的探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及大蒜素的保护作用及机制。方法采集大气PM2.5分别以20、200、400 mg·L^(-1)染毒EA.hy926细胞24h,MTT法测细胞存活率;流式细胞术测细胞凋亡;Western blot法测p-ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白水平;ELISA法测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)含量,并测细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入大蒜素(5、20、40 mg·L^(-1))和ERK1/2通路特异性阻滞剂PD98059 20μmol·L^(-1),检测大蒜素的干预作用及机制。结果与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞存活率,上调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌TNF-α及IL-6含量增高,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性(P<0.05);大蒜素呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-ERK1/2蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低TNF-α及IL-6含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性(P<0.05)。结论大蒜素可能通过抑制ERK1/2信号通路,减轻PM2.5诱导的炎症反应及氧化应激损伤,从而保护EA.hy926细胞。 展开更多
关键词 PM2.5 大蒜素 ERK1/2信号通路 EA.hy926内皮细胞 炎症反应 氧化应激损伤
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特女贞苷对血管内皮细胞氧化损伤的作用研究 被引量:12
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作者 顾闻 刘特 +4 位作者 陈久林 申定珠 邢三丽 郁志华 陈川 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1093-1098,共6页
目的研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用。方法采用H_2O_2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H_2O_2)、特女贞苷组(H_2O_2+5、50、500... 目的研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用。方法采用H_2O_2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H_2O_2)、特女贞苷组(H_2O_2+5、50、500μmol/L特女贞苷)、阴性对照组(H_2O_2+5、50、500μmol/L DMSO)、抗坏血酸组(H_2O_2+5、50、500μmol/L抗坏血酸)。检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、β-gal活性;采用Western blot法测定p66Shc、caspase-3活体剪切体、Bax、Bcl-2蛋白含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测p66mRNA含量。结果与空白组比较,模型组及阴性对照组SOD活性、Bcl-2表达量及Bcl-2/Bax比值下降,MDA含量、β-gal活性、p66Shc蛋白水平及mRNA含量、capase-3活性剪切体和Bax表达水平升高(均P<0.05)。与模型组比较,特女贞苷组及抗坏血酸组SOD升高,MDA含量(除特女贞苷组浓度500μmol/L外)和β-gal活性降低(P<0.01),抑制p66Shc表达及mRNA水平(P<0.01);特女贞苷组Bax和capase-3活性剪切体(除浓度500μmol/L外)表达水平降低,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值升高(均P<0.01)。与同浓度的抗坏血酸组比较,特女贞苷组对Bax、Bcl-2蛋白水平、Bcl-2/Bax比率、p66mRNA的调节作用较明显(P<0.05)。结论特女贞苷可能通过抑制p66Shc削弱血管内皮细胞的氧化损伤及降低凋亡相关蛋白的表达。 展开更多
关键词 P66SHC 氧化应激 特女贞苷 人脐静脉内皮细胞
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燃煤细颗粒物对血管内皮细胞EA.hy926的细胞毒性 被引量:9
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作者 刘芳盈 王菲菲 +1 位作者 丁明玉 李杰 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第1期156-161,共6页
以银川散煤为样品煤,在实验室采用固定源稀释通道采集燃煤PM2.5,超声波水浴提取燃煤PM2.5全颗粒悬液,对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,并采用MTS法检测燃煤PM2.5在不同染毒时间对EA.hy926细胞增殖的影响.结果表明,燃煤PM2.5悬液对EA... 以银川散煤为样品煤,在实验室采用固定源稀释通道采集燃煤PM2.5,超声波水浴提取燃煤PM2.5全颗粒悬液,对人脐静脉内皮细胞EA.hy926进行染毒,并采用MTS法检测燃煤PM2.5在不同染毒时间对EA.hy926细胞增殖的影响.结果表明,燃煤PM2.5悬液对EA.hy926细胞分别染毒6,12,24h均可抑制细胞增殖,且12,24h各剂量组和溶剂对照相比具有统计学意义;在相同染毒剂量组内,和6,12h相比,染毒24h对细胞存活率抑制更加明显,其差异具有统计学意义.可见,燃煤PM2.5可以抑制血管内皮细胞增殖且具有时间和剂量依赖性,血管内皮损伤是PM2.5致心血管毒性的可能机制之一. 展开更多
关键词 燃煤细颗粒物 PM2.5 血管内皮细胞 EA.hy926 细胞毒性 MTS法
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丹参酮ⅡA磺酸钠对PM2.5染毒血管内皮细胞的保护作用 被引量:7
16
作者 王芳 卢欣烁 +5 位作者 李岩 董晓婷 杨杰波 刘方芳 金瑶 李明 《广东药科大学学报》 CAS 2017年第2期207-210,230,共5页
目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用。方法取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50μg/mL STS干预后再加入100μg/mL PM2.5)。24 h后CCK8法... 目的观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用。方法取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50μg/mL STS干预后再加入100μg/mL PM2.5)。24 h后CCK8法测定细胞的存活率,荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白酶Caspase-9和Caspase-3的表达变化。结果 PM2.5对EA.hy926细胞有明显的毒性,可以导致细胞内氧自由基生成增多,并引起Caspase-9和Caspase-3活化造成细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义;STS可以抑制PM2.5对EA.hy926细胞的毒性,降低胞内活性氧(ROS)生成及Caspase-9和Caspase-3的活化,减少细胞凋亡数目,与PM2.5组比较差异有统计学意义。结论丹参酮ⅡA磺酸钠可以减少PM2.5引起的血管内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧自由基生成有关。 展开更多
关键词 丹参酮ⅡA磺酸钠 PM2.5 EA.hy926细胞 氧化应激 凋亡
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原代脐静脉内皮细胞与脐静脉内皮细胞株的培养方法及生物特性的比较 被引量:7
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作者 古力热巴 聂永梅 +4 位作者 马依彤 杨毅宁 刘芬 陈邦党 吴江 《临床和实验医学杂志》 2012年第10期729-730,733,共3页
目的建立一套成功率高,细胞污染率少,获得较多的细胞数的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外分离方法,并且将原代脐静脉内皮细胞与EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生物特性进行对比研究,为细胞培养及相关的医学基础研究提供依据。方法在新鲜(健... 目的建立一套成功率高,细胞污染率少,获得较多的细胞数的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外分离方法,并且将原代脐静脉内皮细胞与EA.HY926人脐静脉内皮细胞株生物特性进行对比研究,为细胞培养及相关的医学基础研究提供依据。方法在新鲜(健康剖宫产产妇分娩后立即取新生胎儿脐带,长度15~20 cm,取标本时间≤4h)脐静脉内注0.1%的Ⅱ型胶原酶消化获得内皮细胞,用M199生长液(含25%的内皮细胞生长因子)进行培养,EA.HY926细胞株用M199生长液。比较两组细胞的形态、超微结构、细胞纯度检测CD31抗体表达。结果①形态:原代HUVEC体外生长3~4 d可铺满单层,细胞呈梭形、饱满,漩涡状排列生长,传代后可见管腔样结构;EA.HY926细胞株胞质多颗粒,2~3可铺满单层,可长成复层。②超微结构:透射电镜下,原代HUVEC里可发现较多的横切与纵切的韦伯潘力小体,在EA.HY926细胞株里较少。③细胞纯度检测:CD31抗体的表达率原代HUVEC细胞大于EA.HY926细胞株,两种细胞CD31表达差异有统计学意义(P﹤0.001)。结论脐静脉注Ⅱ型胶原酶消化法配合M199生长液可迅速获取大量内皮细胞,其生物学特性明显优于HUVEC株,而细胞株则以细胞数量多,培养方法简单,成活率高为特点,两者均是组织工程及相关医学基础研究较好的细胞来源。 展开更多
关键词 原代人脐静脉内皮细胞 EA.hy926细胞株 细胞培养 比较
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王不留行黄酮苷对过氧化氢和高糖诱导损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用 被引量:9
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作者 谢凤珊 冯磊 +1 位作者 马丽萍 邱丽颖 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1009-1013,共5页
体外培养人脐静脉内皮细胞,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒评价王不留行黄酮苷孵育24 h后的细胞毒性。先给予13.76、6.88、3.44μmol/L的王不留行黄酮苷和维生素C阳性对照组(浓度为100μmol/L)预孵育12 h后,再分别以H2O2和高糖诱导内皮细胞损伤... 体外培养人脐静脉内皮细胞,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒评价王不留行黄酮苷孵育24 h后的细胞毒性。先给予13.76、6.88、3.44μmol/L的王不留行黄酮苷和维生素C阳性对照组(浓度为100μmol/L)预孵育12 h后,再分别以H2O2和高糖诱导内皮细胞损伤。SRB法测定细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。与模型组相比,王不留行黄酮苷13.76、6.88、3.44μmol/L组均可改善H2O2和高糖损伤模型的细胞活力,尤以13.76μmol/L作用最为显著(P<0.01);并且王不留行黄酮苷13.76μmol/L显著降低H2O2和高糖损伤组培养液中LDH和MDA释放量,增强细胞内SOD活性。 展开更多
关键词 王不留行黄酮苷 人脐静脉内皮细胞 H2O2损伤 高糖损伤
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乌司他丁抑制脓毒症患者血清诱导的血管内皮细胞高通透性 被引量:7
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作者 刘思佚 魏伏 +3 位作者 罗丽 许珊 刘疏柯 张丹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1600-1604,共5页
目的观察乌司他丁(UTI)对脓毒症休克患者血清诱导的人脐静脉血管内皮细胞高通透性的影响。方法 ELISA检测5例健康志愿者和5例脓毒症休克患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;分别以(10、100、1000)U/mL UTI、300μL脓毒症休克患者血清、... 目的观察乌司他丁(UTI)对脓毒症休克患者血清诱导的人脐静脉血管内皮细胞高通透性的影响。方法 ELISA检测5例健康志愿者和5例脓毒症休克患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;分别以(10、100、1000)U/mL UTI、300μL脓毒症休克患者血清、22 ng/mL TNF-α作用于体外培养的EA.hy926人脐静脉内皮细胞,采用Transwell^(TM)法检测细胞通透性;跨上皮细胞电阻法(EVOM)检测单层细胞电阻;免疫荧光细胞化学染色法检测细胞纤维型肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况。结果与健康志愿者相比,脓毒症患者血清中TNF-α含量明显增高;脓毒症血清作用于EA.hy926单层细胞后,细胞电阻值明显降低,细胞通透性显著升高,F-actin重新分布,细胞内应力纤维增多,而UTI可改善EA.hy926细胞的上述变化。结论 UTI能够抑制脓毒症血清引起的EA.hy926细胞通透性增加,且呈现一定的剂量依赖性。 展开更多
关键词 乌司他丁 EA.hy926血管内皮细胞 高通透性 肿瘤坏死因子Α
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黄连碱对过氧化氢损伤的血管内皮细胞保护作用 被引量:6
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作者 韦晟 刘金春 葛卫红 《中国医药导报》 CAS 2019年第3期4-7,21,F0004,共6页
目的探讨黄连碱对过氧化氢(H_2O_2)损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)分为对照组、模型组、给药组。对照组加入新鲜培养基,模型组给H_2O_2刺激4 h,给药组用不同浓度的黄连碱(2.5、5、1... 目的探讨黄连碱对过氧化氢(H_2O_2)损伤的血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)分为对照组、模型组、给药组。对照组加入新鲜培养基,模型组给H_2O_2刺激4 h,给药组用不同浓度的黄连碱(2.5、5、10、20、40μmol/L)预处理4 h,再用H_2O_2刺激4 h。采用MTS法检测细胞活力,荧光探针-二氢乙啶(DHE)染色法检测细胞内活性氧(ROS),Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果与对照组比较,模型组细胞存活率和Bcl-2蛋白的表达明显降低,细胞内ROS含量、细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白的表达明显升高(P <0.01);而与模型组比较,给药组细胞的存活率和Bcl-2蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐升高,细胞内ROS含量、细胞凋亡率、caspase-3和Bax蛋白的表达均随着给药浓度的增加而逐渐下降,差异均有高度统计学意义(P <0.01)。结论黄连碱是通过抑制H_2O_2诱导的EA.hy926细胞存活率降低、细胞内ROS升高、细胞凋亡增多、caspase-3和Bax蛋白表达的上调以及Bcl-2蛋白表达的下调,发挥其对H_2O_2损伤的血管内皮细胞的保护作用,且呈剂量依赖性。 展开更多
关键词 黄连碱 EA.hy926细胞 氧化应激 细胞凋亡
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