大黄素预处理对LPS/ATP诱导的人脐静脉内皮细胞焦亡的影响 被引量：15

1

作者 吴树宁 王凯 +1 位作者 施思 夏中元 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第4期410-414,共5页

目的探究大黄素(emodin,EMO)预处理对LPS/ATP诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡的影响。方法将生长状态良好的HUVEC随机分为三组(n=6):正常对照组(C组)、LPS和ATP处理组(LPS/ATP组)、大黄素预处理组(EMO组)。C组为正常生长的HUVEC细胞;... 目的探究大黄素(emodin,EMO)预处理对LPS/ATP诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)焦亡的影响。方法将生长状态良好的HUVEC随机分为三组(n=6):正常对照组(C组)、LPS和ATP处理组(LPS/ATP组)、大黄素预处理组(EMO组)。C组为正常生长的HUVEC细胞; LPS/ATP组用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激细胞24 h,再用5. 5 mmol/L三磷酸腺苷(ATP)刺激细胞4 h; EMO组先用大黄素60μmol/L预处理细胞24 h,然后用1μg/ml脂多糖(LPS)刺激细胞24 h,再用5. 5mmol/L三磷酸腺苷(ATP)刺激细胞4 h。用ELISA法检测细胞上清中LDH、ROS的水平,采用Western blot方法检测细胞内NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白的变化。结果与C组相比较,LPS/ATP组细胞上清中LDH、ROS水平明显升高(P <0. 05),细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达明显增加(P <0. 05);与LPS/ATP组相比较,EMO组细胞上清中LDH、ROS水平明显降低(P <0. 05),细胞内NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达明显下降(P <0. 05)。结论大黄素可以抑制细胞焦亡,减轻细胞损伤,其机制可能与大黄素抑制细胞内ROS的作用有关。 展开更多

关键词 大黄素 细胞焦亡 人脐静脉内皮细胞 脂多糖 三磷酸腺苷

下载PDF 职称材料

糖网明目颗粒对糖尿病大鼠视网膜病变防治作用及机制研究 被引量：11

2

作者 蒿长英 陈明霞 +3 位作者 郭平 刘国瑞 刘晔 连增林 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2015年第1期62-66,共5页

目的探讨糖网明目颗粒新工艺提取物防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法改进传统水煎煮中药制备工艺,优选提取制备新工艺,采用高效液相色谱法检测2种工艺糖网明目颗粒提取物有效成分的含量;建立体内外药效学评价模型,评价药物作用效... 目的探讨糖网明目颗粒新工艺提取物防治糖尿病视网膜病变的作用机制。方法改进传统水煎煮中药制备工艺,优选提取制备新工艺,采用高效液相色谱法检测2种工艺糖网明目颗粒提取物有效成分的含量;建立体内外药效学评价模型,评价药物作用效果。体外实验采用MTT法观察2种工艺不同浓度的糖网明目颗粒提取物对人脐静脉内皮细胞EA.hy 926增殖作用的影响。体内实验采用视网膜铺片及ELISA观察2种工艺糖网明目颗粒提取物对STZ造模制备的糖尿病大鼠视网膜微血管病变及其相关因子的影响。结果与传统工艺比较,糖网明目颗粒新工艺提取物所含有效成分明显提高;糖网明目颗粒新工艺提取物能够明显改善糖尿病大鼠视网膜微血管病理学状态,降低血管生成相关因子的蛋白水平。结论新工艺能够最大限度地提取和富集糖网明目颗粒中有效成分;新工艺提取物能够明显改善糖尿病大鼠视网膜微血管病理状态,其作用机制可能与调节血管细胞黏附分子及炎性因子有关。 展开更多

关键词 糖网明目颗粒 糖尿病视网膜病变 人脐静脉内皮细胞 黏附分子 炎性因子 大鼠

下载PDF 职称材料

苦参碱对人HepG2细胞与人ECV304细胞的增殖抑制活性比较研究 被引量：6

3

作者 王淑静 刘晨 +4 位作者 姜珊 孙希 徐芳 叶展俞 王怡南 《黑龙江医药》 CAS 2013年第2期212-214,共3页

目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响。方法:购买纯度高达99%的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影... 目的:研究苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响。方法:购买纯度高达99%的苦参碱纯品,通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察苦参碱对人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响。结果:MTT实验和生长曲线实验显示在不同浓度苦参碱作用不同时间后,人肝癌HepG2细胞和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为487.86μg/ml和1815.34μg/ml,且呈剂量、时间依赖性。HE染色后人肝癌HepG2细胞实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显。结论:苦参碱可抑制人肝癌HepG2细胞生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用较弱。 展开更多

关键词 苦参碱 人肝癌HEPG2细胞 人脐静脉内皮细胞ECV304 肿瘤治疗

下载PDF 职称材料

失血性休克后的肠淋巴液提高血管通透性的作用 被引量：4

4

作者 孙改霞 郭亚雄 +4 位作者 杜会博 张立民 赵自刚 刘圣君 牛春雨 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1506-1512,1536,共8页

目的：观察失血性休克肠后的淋巴液（PHSML）在血管高通透性中的作用。方法：18只雄性Wist-ar大鼠随机均分为假手术组、休克组和休克＋引流组。休克组与休克＋引流组复制失血性休克模型[（40±2） mmHg，90 min]，行液体复苏；休克... 目的：观察失血性休克肠后的淋巴液（PHSML）在血管高通透性中的作用。方法：18只雄性Wist-ar大鼠随机均分为假手术组、休克组和休克＋引流组。休克组与休克＋引流组复制失血性休克模型[（40±2） mmHg，90 min]，行液体复苏；休克＋引流组在复苏结束后，引流休克肠淋巴液至6 h，观察PHSML引流对休克大鼠各组织血管通透性的影响。随后，将引流至体外的 PHSML 与人脐静脉内皮细胞（ HUVECs ）共孵育6 h，观察PHSML对HUVECs形态以及单层细胞通透性的影响。结果：休克组大鼠肺、心肌、肾、肝、脾和小肠外观的蓝色程度、组织伊文氏蓝含量均显著高于假手术组，干湿重比值显著低于假手术组；PHSML引流逆转了这些指标的变化。进一步发现，4％和10％PHSML 0～3 h、3～6 h以及脂多糖（10 mg/L）均引起了HUVECs的形态学损伤，降低了细胞活性与跨细胞电阻，增加了对异硫氰酸荧光素标记白蛋白的通透性。结论：PHSML是血管通透性增加的一个重要因素。 展开更多

关键词 休克 出血性 肠淋巴液 血管通透性 人脐静脉内皮细胞 引流术

下载PDF 职称材料

糖皮质激素联合环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞增殖及其细胞间黏附分子-1和单核细胞趋化因子-1表达水平的影响 被引量：3

5

作者 李志 张梦莹 +4 位作者 徐亮 陆进明 陈兰芳 毛桐俊 宣丹 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2014年第4期366-370,共5页

目的:探讨地塞米松、环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及其细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和单核细胞趋化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP... 目的:探讨地塞米松、环磷酰胺对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及其细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和单核细胞趋化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)基因表达的影响。方法:对培养的人脐静脉内皮细胞,在不同时间以不同药物浓度分别加入地塞米松和环磷酰胺进行干预。以MTT法检测药物对脐静脉内皮细胞增殖的影响。计算两种药物的半数抑制浓度(IC50)。以地塞米松和环磷酰胺半数抑制浓度分别及联合作用人脐静脉内皮细胞48h,以RT-PCR的方法比较3组间人脐静脉内皮细胞ICAM-1和MCP-1的mRNA表达差异。结果:地塞米松、环磷酰胺均呈时间、剂量依赖性地抑制HUVECs的增殖,地塞米松和环磷酰胺IC50分别为0.74、1.87mg/mL。地塞米松与环磷酰胺分别及联合孵育下,人脐静脉内皮细胞ICAM-1和MCP-1mRNA表达水平较对照组显著下降(P<0.05),且联合作用组显著低于单个药物组(P<0.05)。结论:糖皮质激素和环磷酰胺抑制血管内皮细胞增生,并抑制血管内皮细胞ICAM-1和MCP-1mRNA表达,从而对血管起到保护作用并可能为临床治疗血管炎提供理论支持。 展开更多

关键词 人脐静脉内皮细胞 糖皮质激素 环磷酰胺 细胞间黏附分子 单核细胞趋化因子

下载PDF 职称材料

HDL抑制人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶4表达和活性氧生成 被引量：1

6

作者 王蕾 国汉邦 +5 位作者 张小勇 屈顺林 丁莉 满永 王抒 黎健 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第1期16-21,30,共7页

目的分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NAD-PH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用。... 目的分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NAD-PH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用。方法用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养HUVEC;用RT-PCR、Western印迹观察NOX4、p22phox、p67phox、Rac1表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内ROS的变化。结果HDL处理HUVEC能下调NOX4和p67phox mRNA和蛋白水平,但不影响p22phox和Rac1的表达。高浓度LDL刺激HUVEC时,NOX4表达上调,细胞内ROS生成增加,但p22phox、p67phox和Rac1的表达没有明显变化。用HDL预处理再加高浓度LDL刺激时,NOX4表达下调,ROS生成量减少;结论HDL可通过下调HUVEC NOX4表达降低ROS水平。 展开更多

关键词 NADPH氧化酶4 活性氧 人脐静脉内皮细胞 高密度脂蛋白

原文传递

胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高抑制HUVEC增殖和ER-α表达的关系 被引量：1

7

作者 余小平 刘驰 +2 位作者 王庆 迟东升 凌文华 《成都医学院学报》 CAS 2007年第2期81-85,94,共6页

目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-α(estrogen receptor-α,ER-α)基因表达变化的关系。方法以分离的原代人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cell,HUV... 目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-α(estrogen receptor-α,ER-α)基因表达变化的关系。方法以分离的原代人脐静脉内皮细胞(hu-man umbilical vein endothelial cell,HUVEC)为研究对象,经不同浓度的SAH水解酶强效抑制剂3-deazaadenosine(DZA)处理24～72h后,反相高效液相色谱法测定胞内SAH浓度,利用细胞计数法、流式细胞仪和TUNEL技术检测细胞的增殖凋亡能力,Western blot法检测ER-α蛋白的表达,荧光定量-PCR检测其mRNA表达,甲基化特异PCR法检测ER-α基因启动子甲基化状态。结果经DZA处理后,HUVEC胞内SAH浓度升高(P<0.05),生长增殖能力降低(主要受阻于G1/G0期),凋亡率增加(P<0.05),ER-α mRNA和蛋白的相对表达量降低(P<0.05),但DZA处理前后ER-α基因启动子甲基化状态不发生明显改变。结论SAH升高抑制HUVEC的增殖能力与ER-α的表达变化有关,但这种作用不是通过改变ER-α基因启动子的甲基化而实现的。 展开更多

关键词 S-腺苷同型半胱氨酸 人脐静脉内皮细胞 雌激素受体-Α 甲基化

下载PDF 职称材料

免疫荧光检测核因子-κB活化的定量分析 被引量：1

8

作者 修敏 何凤 +5 位作者 娄远蕾 徐露 熊洁琦 王平 刘丝荪 郭菲 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第3期669-674,共6页

免疫荧光可定性分析细胞内蛋白核转位现象,NF-κB/p65蛋白核转位提示NF-κB信号通路的活化,我们尝试运用自主研发设计的免疫荧光分析软件计算荧光图像中胞核和胞质位置的荧光值变化,定量分析核转位情况,并通过蛋白质免疫印迹法验证软件... 免疫荧光可定性分析细胞内蛋白核转位现象,NF-κB/p65蛋白核转位提示NF-κB信号通路的活化,我们尝试运用自主研发设计的免疫荧光分析软件计算荧光图像中胞核和胞质位置的荧光值变化,定量分析核转位情况,并通过蛋白质免疫印迹法验证软件分析结果。应用该软件分析内毒素诱导0.5、1、2和4h后原代人脐静脉内皮细胞的NF-κB信号通路活化,结果提示2h为核转位高峰期,与蛋白质免疫印迹法验证结果一致,表明自主研发的免疫荧光分析软件可应用于免疫荧光的定量分析。 展开更多

关键词 免疫荧光 荧光定量分析 NF-ΚB 人脐静脉内皮细胞 内毒素

原文传递

汉防己甲素抑制血管生成的作用 被引量：21

9

作者 钱晓萍 刘宝瑞 +4 位作者 胡静 李敏 胡文静 孙婧 禹立霞 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1050-1055,共6页

背景与目的:血管生成在肿瘤从良性向恶性转变、癌细胞进入血液循环、转移灶发展和破裂中都起着重要作用。本研究探讨汉防己甲素对体外、体内血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法:采用MTT法观察汉防己甲素对人脐静脉血管内皮细胞(hum... 背景与目的:血管生成在肿瘤从良性向恶性转变、癌细胞进入血液循环、转移灶发展和破裂中都起着重要作用。本研究探讨汉防己甲素对体外、体内血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法:采用MTT法观察汉防己甲素对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)和人肠癌LoVo细胞增殖的影响,通过Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察汉防己甲素对HUVEC迁移、成血管能力的影响。建立裸鼠LoVo细胞皮下移植瘤模型,给予汉防己甲素灌胃,观察用药对肿瘤微血管密度的影响。结果:2～8μg/mL的汉防己甲素作用48h时对HUVEC的细胞增殖抑制率为24.6%～76.9%,对LoVo细胞增殖抑制率为11.6%～14.0%;体外小管形成实验发现,2～8μg/mL的汉防己甲素作用24h时HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整,与对照组比较差异有统计学意义(P值均<0.001)。经2～8μg/mL的汉防己甲素处理12h后HUVEC迁移数明显少于对照组(P值均<0.001)。在裸鼠皮下移植瘤体内实验中,80mg/kg汉防己甲素作用于裸鼠LoVo细胞皮下移植瘤后其微血管密度与生理盐水对照组比较,差异具有统计学意义(P=0.035)。结论:汉防己甲素在体外能有效抑制血管生成,其机制可能与抑制HUVEC增生、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,抑制HUVEC DNA的合成有关。汉防己甲素在体内对裸鼠LoVo移植瘤具有抗血管生成作用。 展开更多

关键词 汉防己甲素/药理学 血管内皮细胞 抗血管生成 裸鼠

下载PDF 职称材料

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的机制 被引量：7

10

作者 张贵婷 周红 +4 位作者 何超 陈芋丹 欧阳航 张鹏 王韧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1472-1478,共7页

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI... 目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、LPS分组刺激HUVEC,收集总RNA和蛋白,利用实时定量PCR和Western blot法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)和冯·维勒布兰德因子(v WF)的mRNA和蛋白水平;采用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10μmol/L)预处理的方式,探索阻断TLR4通路后,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附分子表达的影响,通过THP-1细胞黏附实验检测oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附能力的影响。结果与培养基对照组相比,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够显著提高HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和v WF表达,并且能够增强HUVEC对THP-1细胞的黏附,TAK-242或SB203580处理能够抑制该过程。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强HUVEC的黏附分子表达和对THP-1细胞的黏附,TLR4和p38MAPK与该过程密切相关。 展开更多

关键词 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物 Toll样受体4(TLR4) 人脐静脉内皮细胞(HUVEC) 黏附分子

下载PDF 职称材料

NADPH氧化酶/ROS信号通路在维生素E改善氧化性低密度脂蛋白致人脐静脉内皮细胞氧化损伤中的作用 被引量：2

11

作者 徐笑群 《中国实用医刊》 2016年第14期1-4,共4页

目的：建立氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，研究维生素 E 对 oxLDL 诱导的 HUVEC 损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养 HUVEC，以不同浓度维生素 E （50~150μmol/ L）预孵育细胞24 h，... 目的：建立氧化性低密度脂蛋白（oxLDL）诱导损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤模型，研究维生素 E 对 oxLDL 诱导的 HUVEC 损伤的保护作用及其作用机制。方法体外培养 HUVEC，以不同浓度维生素 E （50~150μmol/ L）预孵育细胞24 h，再加入200μg/ ml 的 oxLDL 继续培养24 h；采用 CCK-8检测细胞生存率， DCFH-DA 检测细胞内活性氧（ROS）水平，RT-PCR 检测 NADPH 氧化酶亚基（p47phox、p67phox、NOX4）mRNA 表达水平。结果成功建立了 oxLDL 诱导 HUVEC 损伤模型；与正常组比较，oxLDL 组的细胞生存率显著降低，ROS 生成大量增加，差异有统计学意义（P ﹤0.01）；与 oxLDL 组比较，不同浓度维生素 E 组的细胞生存率显著升高，ROS生成大量减少，差异有统计学意义（P ﹤0.05）；oxLDL 组的 p47phox、p67phox、NOX4 mRNA 表达量分别是正常组的2.15±0.19、2.48±0.20、3.01±0.24倍（P ﹤0.01），而经不同浓度维生素 E 预孵育可剂量依赖性的显著降低oxLDL诱导的 p47phox、p67phox、NOX4 mRNA 表达上调，差异有统计学意义（P ﹤0.05）。结论 oxLDL 可引起 HUVEC 细胞生存率降低，NADPH 氧化酶亚基表达上调及 ROS 的大量产生；50~150μmol/ L 维生素 E 可剂量依赖性地改善oxLDL 对内皮细胞的损伤，通过抑制 NADPH 氧化酶/ ROS 信号通路的活化来减少 HUVEC 损伤，从而起到抗动脉粥样硬化的作用，为维生素 E 的抗动脉粥样硬化作用提供了实验依据。 展开更多

关键词 维生素E 氧化性低密度脂蛋白 人脐静脉内皮细胞 NADPH氧化酶 ROS

原文传递

模拟体内肿瘤微环境的乳腺癌细胞与脐静脉内皮细胞的体外共培养 被引量：1

12

作者 杨艳芳 孟盈盈 +5 位作者 叶军 夏学军 李琳 董武军 王洪亮 刘玉玲 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期403-409,共7页

为了更好地模拟体内肿瘤组织复杂的微环境特点,本研究采用间接共培养的方法,构建了乳腺癌细胞(human breast adenocarcinoma cells,MCF-7)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外共培养模型,以用于... 为了更好地模拟体内肿瘤组织复杂的微环境特点,本研究采用间接共培养的方法,构建了乳腺癌细胞(human breast adenocarcinoma cells,MCF-7)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外共培养模型,以用于后续抗血管生成和诱导肿瘤凋亡的双重疗法的体外研究。分别以同期单独培养的MCF-7和HUVECs细胞为对照,对共培养的MCF-7和HUVECs细胞在培养过程中的细胞活性、形态、电阻、周期和血管内皮生长因子(VEGF)含量进行了考察。结果显示,与单独培养的MCF-7和HUVECs细胞相比,共培养的两种细胞活性更高,且发生了变形、结构变疏松的形貌改变,表现出更低的电阻值,细胞周期活跃、增殖明显(S和G_2/M期比例较大),以及有更高的VEGF表达(约1.4~2倍)。该模型很好地模拟了体内肿瘤细胞与肿瘤血管的相互作用关系,可作为设计肿瘤靶向释药系统的体外研究模型。 展开更多

关键词 肿瘤微环境 乳腺癌细胞 脐静脉内皮细胞 体外双层细胞模型 非接触共培养

原文传递

补肾益精法经外泌体途径对系统性硬皮病的血管保护作用研究

13

作者 朱珂 谢颂苗 +3 位作者 杨海诗 朱佳玲 李东海 齐庆 《广州中医药大学学报》 CAS 2022年第5期1143-1150,共8页

【目的】观察经补肾益精法处理后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)来源的外泌体对系统性硬皮病血管损伤的治疗作用。【方法】(1)体外研究:制备大鼠补肾益精中药复方含药血清,通过血管内皮细胞成管实验观察含药血清与对照血清对HUVEC成管的影响,... 【目的】观察经补肾益精法处理后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)来源的外泌体对系统性硬皮病血管损伤的治疗作用。【方法】(1)体外研究:制备大鼠补肾益精中药复方含药血清,通过血管内皮细胞成管实验观察含药血清与对照血清对HUVEC成管的影响,细胞免疫荧光染色法检测血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)表达。采用超速离心法提取HUVEC细胞上清液中外泌体,透射电镜观察外泌体形态,Nano Analyzer法检测外泌体径粒与浓度,Western Blot法检测外泌体标志物的表达。设置对照血清干预HUVEC来源的外泌体组(对照血清-外泌体组)和含药血清干预HUVEC来源的外泌体组(含药血清-外泌体组),用外泌体处理HUVEC后,通过成管实验观察HUVEC成管能力,细胞免疫荧光染色法检测CD31表达。(2)体内研究:设置正常组、模型组及外泌体组。采用皮下注射博来霉素(100μL·mg^(-1)·d^(-1))28 d构建硬皮病小鼠模型。此外,模型组及外泌体组小鼠在造模第1、7天分别额外给予外泌体悬液及含药血清-外泌体局部皮下注射。4周后,观察小鼠皮肤组织病理变化,免疫组织化学法检测小鼠皮肤组织血管生成素1(ANG-1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管性假血友病因子(vWF)、CD31表达水平。【结果】与对照组比较,含药血清组与含药血清-外泌体组的HUVEC成管能力及CD31表达均显著增强。电镜下可见类圆形高亮膜性微囊泡,外泌体的标志物表达增强。HE染色结果显示,与模型组比较,外泌体组小鼠皮肤胶原纤维含量有所减少,胶原间隙增宽,血管数量增多;免疫组织化学结果显示外泌体组小鼠皮肤ANG-1、VEGF、v WF、CD31表达水平显著高于模型组,较正常组有所降低。【结论】补肾益精法可通过HUVEC来源的外泌体途径发挥对系统性硬皮病的血管保护作用。 展开更多

关键词 补肾益精法 系统性硬皮病 外泌体 人脐静脉内皮细胞 小鼠

原文传递