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hSCGF-α穿膜肽的构建及其对hUCMSCs增殖作用的影响 被引量：1
1
作者 彭鑫磊 马岩岩 +3 位作者 荣靖 任哲 陈海佳 王一飞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第4期871-874,共4页
目的:构建hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF),研究其对人脐带间充质干细胞的增殖作用。方法:采用基因工程技术将hSCGF-α基因重组插入pET-28a(+)质粒DNA,构建TAT-SCGF-28a重组DNA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效表达,包涵体纯化后,通过实验比... 目的:构建hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF),研究其对人脐带间充质干细胞的增殖作用。方法:采用基因工程技术将hSCGF-α基因重组插入pET-28a(+)质粒DNA,构建TAT-SCGF-28a重组DNA,并在大肠杆菌BL21(DE3)中成功高效表达,包涵体纯化后,通过实验比较hSCGF-α及hSCGF-α穿膜肽(TAT-SCGF)对人脐带间充质干细胞的增殖刺激作用。结果与结论:成功构建TAT-SCGF-28a重组DNA;纯化的蛋白纯度达90%以上;TAT-SCGF较不具有穿膜功能的SCGF对人脐带间充质干细胞有更强的增殖效果。 展开更多
关键词 人干细胞生长因子 人脐带间充质干细胞 穿膜肽 包涵体
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人干细胞生长因子Ca^(2+)依赖糖识别结构域缺失突变体的重组表达及生物学活性的初步探讨
2
作者 原野 要晖宇 +4 位作者 李秀森 郭子宽 吴英 江小霞 毛宁 《生物技术通讯》 CAS 2005年第3期235-238,共4页
本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除... 本文作者已有的研究结果证明,完整的人干细胞生长因子(hSCGF)没有种属特异性,即可以作用于小鼠骨髓造血细胞。这一点与在Ca2+依赖糖识别结构域(CRD)缺失了78个氨基酸残基的截短分子(hSCGFβ)有所不同。本研究从hSCGF全长cDNA中完全删除了CRD结构域编码序列,进一步探讨CRD结构域的生物学功能。由于该突变体序列GC含量较高,因此将该缺失突变体序列克隆在GST融合表达载体中进行融合表达。通过低温(28℃)诱导,表达产物主要以可溶蛋白的形式存在。利用亲和层析纯化CRD结构域完全缺失的hSCGF突变体融合蛋白,通过检测重组突变分子的协同刺激造血活性有无改变来初步探讨CRD结构域在hSCGF分子中的生物学功能。研究结果表明,去掉完整CRD结构域的突变分子仍然具有造血刺激活性。据此推断CRD结构域在hSCGF分子中可能对于受体配体结合起辅助作用。 展开更多
关键词 细胞生长因子 缺失突变体 Ca^2+ 结构域 糖识别 生物学活性 重组表达 生物学功能 全长cDNA 融合表达载体 研究结果 CRD 种属特异性 氨基酸残基 造血细胞 小鼠骨髓 编码序列 GC含量 可溶蛋白 表达产物 融合蛋白 层析纯化
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人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性
3
作者 原野 张云生 +5 位作者 李秀森 郭子宽 刘晓丹 侯春梅 唐佩弦 毛宁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期379-383,共5页
人干细胞生长因子(humanstemcellgrowthfactor,hSCGF)是一种早期造血调控因子。已知人干细胞生长因子具有两种形式,包括全长分子hSCGF以及在Ca2+依赖糖识别结构域(calcium-dependentcarbohydraterecognitiondomain,CRD)内缺失78氨基酸... 人干细胞生长因子(humanstemcellgrowthfactor,hSCGF)是一种早期造血调控因子。已知人干细胞生长因子具有两种形式,包括全长分子hSCGF以及在Ca2+依赖糖识别结构域(calcium-dependentcarbohydraterecognitiondomain,CRD)内缺失78氨基酸的截短型分子hSCGFβ。hSCGFβ的造血刺激活性具有严格的种属特异性。本研究目的在于探讨hSCGF能否协同刺激小鼠粒/单系祖细胞增殖。为克服hSCGF的cDNAGC含量较高的困难,本研究以两步PCR的方法从人胎肝cDNA文库(Clontech)中成功克隆hSCGFcDNA,进而将hSCGF成熟肽编码序列亚克隆于原核表达载体pGEX4T-2中,融合表达。研究结果表明,通过低温诱导(28℃),重组表达产物主要以可溶蛋白的形式存在于裂解上清中,利用亲和层析纯化融合表达蛋白。对重组蛋白的造血刺激活性分析表明,不同于截短型分子hSCGFβ,全长分子hSCGF能够刺激小鼠骨髓粒/单系造血祖细胞增殖。结论:hSCGFCRD不直接结合受体,可能具有其他生物学功能。 展开更多
关键词 人干细胞生长因子 CRD区 CDNA克隆 融合表达 造血种属特异性
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微小RNA-29a在膝骨关节炎兔子中的表达及其对干细胞生长因子β、血管内皮生长因子表达和炎症反应的影响 被引量：1
4
作者 李冕 刘宣毅 +1 位作者 董朝军 东彬 《广西医学》 CAS 2022年第3期289-295,共7页
目的探讨微小RNA(miRNA)-29a在膝骨关节炎(KOA)兔子中的表达水平及其对干细胞生长因子β(SCGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平及炎症反应的影响。方法(1)在48只新西兰兔中取8只作为空白对照组,另外40只用于建立KOA模型,建模成功... 目的探讨微小RNA(miRNA)-29a在膝骨关节炎(KOA)兔子中的表达水平及其对干细胞生长因子β(SCGF-β)、血管内皮生长因子(VEGF)表达水平及炎症反应的影响。方法(1)在48只新西兰兔中取8只作为空白对照组,另外40只用于建立KOA模型,建模成功后随机平均分为非干预组、SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组。SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组分别采用相应抗体干预,空白对照组与非干预组采用等量生理盐水干预。干预1周后,检测各组血清miRNA-29a、SCGF-β、VEGF、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和C反应蛋白(CRP)的表达水平。(2)取非干预组兔子的软骨组织制备KOA软骨细胞,利用miRNA-29a模拟物(Mimic组)、miRNA-29a阴性对照物(NC组)和miRNA-29a抑制物(Inhibitor组)转染细胞。正常组不予干预。7 d后检测各组软骨细胞miRNA-29a的表达水平及SCGF-β、VEGF mRNA和蛋白的相对表达水平。结果(1)与空白对照组相比,非干预组、SCGF-β组、VEGF组及SCGF-β+VEGF组的血清miRNA-29a表达水平均降低,而血清SCGF-β、VEGF、TNF-α和CRP水平均升高(均P<0.05)。SCGF-β组和SCGF-β+VEGF组的血清SCGF-β表达水平均低于VEGF组与非干预组,VEGF组和SCGF-β+VEGF组的血清VEGF表达水平均低于SCGF-β组与非干预组;SCGF-β组、VEGF组和SCGF-β+VEGF组的血清TNF-α和CRP表达水平均低于非干预组,且SCGF-β+VEGF组的血清TNF-α和CRP表达水平均低于SCGF-β组与VEGF组(均P<0.05)。(2)正常组及NC组miRNA-29a相对表达水平低于Mimic组,高于Inhibitor组;且Inhibitor组miRNA-29a相对表达水平低于Mimic组(均P<0.05);3组转染后的软骨细胞SCGF-β、VEGF的蛋白及mRMA相对表达水平均为Inhibitor组>NC组>Mimic组(均P<0.05)。结论KOA兔子血清miRNA-29a的表达水平降低,血清SCGF-β、VEGF、TNF-α和CRP的表达水平升高,下调SCGF-β和VEGF表达可抑制KOA兔子体内的炎症反应。上调miRNA-29a表达水平可抑制KOA软骨细胞SCGF-β、VEGF的表达,这有助于减轻KOA� 展开更多
关键词 膝骨关节炎 微小RNA-29a 人干细胞生长因子β 血管内皮生长因子 肿瘤坏死因子α C反应蛋白 新西兰兔
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