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重组质粒pcDNA3/sIL-1R(I)在哺乳动物细胞中的表达 被引量：9
1
作者 徐艳 李鹏 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期467-470,共4页
目的　检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法　采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ... 目的　检测重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中的表达。方法　采用脂质体介导基因转染技术 ,将已构建的pcDNA3 sIL_1R(I)质粒DNA导入体外培养的哺乳动物细胞系COS_1和CHO细胞中。加入G4 18对转染的细胞加压筛选 ,获得稳定转染的细胞。酶联免疫吸附实验 (ELISA)对重组质粒在COS_1和CHO细胞表达产物的含量进行检测。结果　G4 18筛选获得稳定转染的COS_1和CHO细胞 ,对照组加压后第10～ 2 0天细胞全部死亡。转染组第 15～ 2 3天汇片达 80 %左右。转染组细胞培养液和冻融液中sIL_1R表达量均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　以sIL_1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3 sIL_1R(I)在哺乳动物细胞系中具有表达功能。 展开更多
关键词 哺乳动物细胞 表达 人可溶性白细胞介素-1受体 基因治疗 体外转染
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人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建 被引量：4
2
作者 李鹏 徐艳 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-143,共4页
目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外... 目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果　挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论　采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+) 展开更多
关键词 人可溶性白介素-1受体 真核表达载体 PCDNA3 骨关节病 基因治疗
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重组质粒pcDNA3/sIL-1R(Ⅰ)转染牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测
3
作者 徐艳 章锦才 +1 位作者 张蕴惠 刘怡 《广东牙病防治》 2004年第4期243-245,i001,共4页
目的　检测以sIL 1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3/sIL 1R(Ⅰ )对人牙龈成纤维细胞的转染效率及瞬时表达量 ,为pcDNA3/sIL 1R(Ⅰ )导入动物牙龈组织提供依据。方法　人牙龈成纤维细胞体外原代培养并传代 ,重组... 目的　检测以sIL 1R胞外成熟肽编码区基因作为目的基因构建的重组质粒pcDNA3/sIL 1R(Ⅰ )对人牙龈成纤维细胞的转染效率及瞬时表达量 ,为pcDNA3/sIL 1R(Ⅰ )导入动物牙龈组织提供依据。方法　人牙龈成纤维细胞体外原代培养并传代 ,重组质粒用脂质体包裹介导进行体外转染。ELISA法对重组质粒在人牙龈成纤维细胞的表达产物进行含量检测。结果　sIL 1R(Ⅰ )在基因转染 2 4h内开始表达 ,72h最高 ,转染组细胞培养液和细胞冻融液中sIL 1R表达量均显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,1周后表达逐渐减弱 ,2周后仍有少量表达。结论　通过脂质体介导的基因转染方法 ,重组质粒pcDNA3/sIL 1R(Ⅰ )在人牙龈成纤维细胞系中具有表达功能 。 展开更多
关键词 IL-1 人牙龈成纤维细胞 重组质粒 PCDNA3 基因转染 瞬时表达 脂质体介导 进行体 表达功能 导入
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