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新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中乳头瘤病毒16型E6基因的克隆和序列分析 被引量：24
1
作者 马正海 钱东 +5 位作者 马纪 林仁勇 闻明 钟哲 张富春 张秋云 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期400-404,共5页
为了分析新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因结构特点 ,从中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,以宫颈癌活检组织标本DNA为模板进行PCR扩增 ,获得HPV16E6基因 ,将其克隆到pUCm T载体上 ,并对其... 为了分析新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因结构特点 ,从中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,以宫颈癌活检组织标本DNA为模板进行PCR扩增 ,获得HPV16E6基因 ,将其克隆到pUCm T载体上 ,并对其进行基因全序列分析 .PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16E6阳性率为 82 35 % (14/17) ;测序结果显示 ,新疆株HPV16E6基因全长 45 6bp ,大小与德国标准株一致 .E6基因的第 2 47位碱基发生T→G突变 ,并由此引起所编码的氨基酸亦发生改变 .上述结果表明 ,中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16E6的基因结构与德国标准株HPV16E6基因之间存在差异 . 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 宫颈癌 E6基因 核苷酸序列分析新疆 维族妇女
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人乳头瘤病毒16型E6和E7基因及其突变体转化活性的研究 被引量：16
2
作者 骆卫峰 韩立群 +4 位作者 任皎 田厚文 陆振华 谷淑燕 阮力 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期97-101,共5页
为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转... 为筛选出可用于研制HPV治疗性疫苗的HPV16型E6和E7基因突变体 ,故将HPV16型原型株 (德国株 )E6和E7基因及其各种突变体分别转染Balb/c3T3细胞 ,观察转染后的细胞在软琼脂培养中的集落形成能力和在裸鼠体内的成瘤能力。结果表明 ,单独转染和共转染HPV16野生型E6和E7基因的Balb/c3T3细胞系 ,在软琼脂中呈集落样生长 ,并在裸鼠体内成瘤 ;而转染E6基因突变体mE6 (5 0G)、E7基因的两种突变体mE7- 1(2 4G2 6G)和mE7- 3(2 4G2 6G6 7R)以及共转染mE6和mE7- 1的Balb/c3T3细胞 ,在软琼脂培养中极少形成集落 ,也不能在裸鼠体内成瘤。提示经结构改造后的HPV16E6和E7基因已失去了对Balb/c3T3细胞的转化活性 ,而保留了免疫原性 ,可用于HPV16相关肿瘤治疗性疫苗的构建。 展开更多
关键词 诱变 人乳头瘤病毒16型 E7基因 突变体 转化活性
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人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒的制备及其免疫原性研究 被引量：11
3
作者 魏旻希 李少伟 +7 位作者 黄博 沈文通 苏永在 张春华 顾颖 杜海莲 张军 夏宁邵 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期245-250,共6页
利用PCR技术从HPV16阳性阴道分泌物标本中获得HPV16 L1基因片段,并将其插入表达载体pTO-T7中,构建重组表达质粒pTO-T7-HPV16-L1;以该重组质粒转化大肠杆菌ER2566并表达HPV16 L1蛋白;所表达的HPV16 L1蛋白经过硫酸铵沉淀、离子交换层析... 利用PCR技术从HPV16阳性阴道分泌物标本中获得HPV16 L1基因片段,并将其插入表达载体pTO-T7中,构建重组表达质粒pTO-T7-HPV16-L1;以该重组质粒转化大肠杆菌ER2566并表达HPV16 L1蛋白;所表达的HPV16 L1蛋白经过硫酸铵沉淀、离子交换层析和疏水相互作用层析等纯化步骤后,HPV16 L1纯度达到98%以上,并可在体外装配为直径50nm的病毒样颗粒;动物免疫原性研究结果显示,该病毒样颗粒可诱导高滴度的针对HPV16的中和抗体。上述研究结果表明通过大肠杆菌表达系统制备的HPV16病毒样颗粒具有纯度高,与天然病毒颗粒形态高度相似的特点,并具有高度免疫原性,可以应用于HPV16病毒样颗粒的结构功能研究及HPV16疫苗研发等领域。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 大肠杆菌表达系统 纯化 病毒样颗粒 免疫原性
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利用昆虫—杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16型L1蛋白 被引量：9
4
作者 郑滨 王健伟 +4 位作者 姜惠英 屈建国 王一礼 司履生 董小平 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期314-316,共3页
目的　获得人乳头瘤病毒 16型 (Humanpapillomavirustype 16 ,HPV16 )L1蛋白。方法　以pFB1为载体构建HPV 16L1杆状病毒表达质粒 ,并感染昆虫细胞Sf 9结果　收集 2 7℃ ,培养 72h的感染重组病毒的Sf 9,提取细胞蛋白。经SDS PAGE蛋白电... 目的　获得人乳头瘤病毒 16型 (Humanpapillomavirustype 16 ,HPV16 )L1蛋白。方法　以pFB1为载体构建HPV 16L1杆状病毒表达质粒 ,并感染昆虫细胞Sf 9结果　收集 2 7℃ ,培养 72h的感染重组病毒的Sf 9,提取细胞蛋白。经SDS PAGE蛋白电泳分析 ,发现有一相对分子质量为 5 6 0 0 0的蛋白表达 ,Westernblot证实所表达的蛋白为HPV16L1。结论　昆虫—杆状病毒表达系统可有效地表达HPV 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 病毒蛋白质类 杆状病毒科 基因表达调控
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子宫颈非典型不成熟鳞状上皮化生与子宫颈鳞状上皮内瘤变Ⅲ级形态学及增殖分化特征比较 被引量：9
5
作者 贾薇 潘晓琳 +5 位作者 陆天才 胡文浩 蒋金芳 李洪安 陶林 杨安强 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期423-428,共6页
目的探讨子宫颈非典型性不成熟鳞状上皮化生(AIM)与子宫颈CINⅢ形态学及增殖分化特征的差异。方法采用形态学观察,AB黏液组化染色,细胞增殖相关抗原Ki-67和角蛋白(CK)10、14免疫组化染色方法,观察55例原诊断为CINⅢ的病例和14例子宫颈... 目的探讨子宫颈非典型性不成熟鳞状上皮化生(AIM)与子宫颈CINⅢ形态学及增殖分化特征的差异。方法采用形态学观察,AB黏液组化染色,细胞增殖相关抗原Ki-67和角蛋白(CK)10、14免疫组化染色方法,观察55例原诊断为CINⅢ的病例和14例子宫颈息肉伴成熟性鳞状上皮化生(OSM)组织病理学特征,黏液残留情况,细胞增殖活性和分化程度;采用半巢式PCR检测HPV16E6DNA。结果(1)参照Crum的组织学诊断标准,在CINⅢ中有1例经组织形态观察符合AIM的诊断标准,即重新诊断为AIM;(2)根据鳞状上皮中的黏液残留情况,从55例CINⅢ中鉴别出7例AIM;(3)AIM的Ki-67表达高于OSM(P=0.022),明显低于CINⅢ(P=0.000)差异有统计学意义;(4)CK10在AIM和CINⅢ中的表达差异有统计学意义(P=0.000);CK14在AIM和CINⅢ组间的表达差异无统计学意义(P=1.000);(5)AIM的HPV16感染检出率为71.4%与CINⅢ的检出率85.4%相比差异无统计学意义(P=0.321)。结论在Crum的AIM形态学诊断标准基础上,结合本研究中各项指标的研究结果,本研究提出AIM与CINⅢ的鉴别诊断依据:①核分裂象数≤15/10HPF,位于上皮下1/3层;②病理性核分裂象罕见;③AB染色显示有黏液残留;④Ki-67PI<50%;⑤CK10弥漫表达于除基底副基底层外黏膜上皮各层。 展开更多
关键词 子宫颈疾病 非典型性不成熟鳞状上皮化生 黏液残留 角蛋白 Ki-67 HPV16
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宫颈癌患者HPV16型E6蛋白的表达纯化及血清抗体检测 被引量：5
6
作者 高艳娥 郭金珠 +2 位作者 张菊 宋天保 阎小君 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1374-1379,共6页
背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相... 背景与目的:人乳头瘤病毒16型(humanpapillomavirustype16,HPV16)是宫颈癌组织中最常见的高危HPV,其相应蛋白的血清抗体与宫颈癌的发生发展相关。本研究构建HPV16E6重组表达载体并表达纯化获得HPV16E6重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16E6血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E6基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E6表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用异丙基硫代-$-D-半乳糖苷(isopropylthio-$-D-galactoside,IPTG)诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被ELISA板,检测正常女性、慢性宫颈炎患者和宫颈癌患者血清抗体。同时采用荧光偏振方法分型检测宫颈癌组织HPVDNA。结果:pRSET-16E6表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr24×103的HPV16E6组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的22.3%。表达形式为包涵体,重组蛋白纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者血清抗体阳性率分别为5.0%、6.5%和31.2%,宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率显著高于正常人(P<0.002)及慢性宫颈炎患者(P<0.01),而正常人与慢性宫颈炎患者间的差异无显著性。32例宫颈癌患者癌组织中,HPVDNA阳性率90.6%,HPV16DNA阳性率46.9%。HPV16DNA阳性组血清HPV16E6抗体阳性率(46.7%)高于阴性组(17.6%),但两组间的差异无显著性(P>0.05)。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16E6融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌患者HPV16E6血清抗体阳性率明显高于正常人和慢性宫颈炎患者。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 E6蛋白 基因表达 血清抗体 宫颈肿瘤
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细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂3在HPV16阳性宫颈癌中的表达及意义
7
作者 谯坤 徐殿琴 +3 位作者 朱小雨 周鑫竹 张瑜 谭玉洁 《重庆医学》 CAS 2024年第5期651-656,共6页
目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂3(CDKN3)在人乳头瘤病毒16(HPV16)阳性宫颈癌中的表达及意义。方法检索并下载基因表达谱交互式分析(GEPIA)平台CDKN3在泛癌中的表达情况,并比较正常宫颈组织(13份)和宫颈癌组织(306份)CDKN3表达水... 目的探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂3(CDKN3)在人乳头瘤病毒16(HPV16)阳性宫颈癌中的表达及意义。方法检索并下载基因表达谱交互式分析(GEPIA)平台CDKN3在泛癌中的表达情况,并比较正常宫颈组织(13份)和宫颈癌组织(306份)CDKN3表达水平;再访问并下载基因表达综合(GEO)数据库中HPV16阳性宫颈癌GSE39001数据集,比较HPV16阳性宫颈癌组织(43份)与正常宫颈组织(12份)CDKN3 mRNA表达水平;通过免疫组织化学法检测贵州医科大学附属医院12例HPV16阳性宫颈癌、12例HPV16阳性宫颈癌前病变、10例HPV16阳性慢性宫颈炎患者及7例HPV阴性正常宫颈者组织CDKN3表达情况;选取宫颈癌SiHa(HPV16阳性)、HeLa(HPV18阳性)、HCC94(HPV阴性)细胞株,使用Western blot检测其CDKN3表达差异。结果GEPIA平台分析结果显示,CDKN3在泛癌中高表达,且宫颈癌组织CDKN3表达水平明显高于正常宫颈组织(P<0.05);GEO数据集分析结果发现,HPV16阳性宫颈癌组织CDKN3 mRNA相对表达水平明显高于正常宫颈组织(P<0.001);免疫组织化学验证发现,HPV16阳性宫颈癌、HPV16阳性宫颈癌前病变、HPV16阳性慢性宫颈炎及HPV阴性正常宫颈组织CDKN3阳性表达率分别为91.7%、58.3%、0、0;宫颈癌细胞Western blot检测结果显示,宫颈癌SiHa(HPV16阳性)细胞CDKN3表达水平明显高于HeLa(HPV18阳性)和HCC94(HPV阴性)细胞(P<0.05)。结论CDKN3可能是HPV16阳性宫颈癌中一种潜在的致癌基因,可作为一种宫颈癌前病变及宫颈癌筛选标志物,并为后续的机制研究及靶向治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 宫颈肿瘤 周期素依赖激酶抑制蛋白质类 免疫组织化学 细胞培养
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沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型多重荧光定量PCR检测方法的建立及其应用 被引量：5
8
作者 胡天 卓永光 +1 位作者 樊祖茜 黄永霞 《分子诊断与治疗杂志》 2018年第6期385-389,405,共6页
目的建立一种可准确、快速检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型3种病原体DNA的多重荧光定量PCR检测方法。方法本研究针对沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型分别设计了一对特异性探针引物,构建了可同时检测... 目的建立一种可准确、快速检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型3种病原体DNA的多重荧光定量PCR检测方法。方法本研究针对沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型分别设计了一对特异性探针引物,构建了可同时检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型的多重荧光PCR反应体系,并与商业试剂同时检测300例临床标本,评估其一致性。结果性能评价结果显示,所建立的多重荧光PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,与对照商业试剂检查结果符合率达到100%。结论所建立的多重荧光PCR检测方法能实现3种病原体的快速、正确定量检测。 展开更多
关键词 多重荧光定量PCR 沙眼衣原体 单纯疱疹病毒2型 人乳头瘤病毒16型
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HPV-16-11 L1双价重组杆状病毒的构建及VLP形成 被引量：4
9
作者 庄敏 谷鸿喜 +4 位作者 李迪 崔洪波 刘希君 魏兰兰 凌虹 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期771-776,共6页
目的将本地区流行株HPV-16 L1基因与HPV-11 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细胞表达系统,组装成类病毒颗粒(virus like particles,VLP)。为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础。方法对本地流行株HPV... 目的将本地区流行株HPV-16 L1基因与HPV-11 L1基因双表达于杆状病毒昆虫细胞表达系统,组装成类病毒颗粒(virus like particles,VLP)。为研制同时预防宫颈癌和尖锐湿疣等多种疾病的HPV-16-11型基因工程疫苗奠定基础。方法对本地流行株HPV-16 L1基因进行亚克隆,构建pBluescript-HPV-16L1克隆质粒,并对其测序。再将质粒中HPV-16 L1基因切下,连接到pFastBacDual的强启动子phol后;从克隆质粒pSP73-HPV-11 L1切下HPV-11 L1,连接到pFastBacDual的弱启动子p10后,利用Bac to Bac系统在昆虫细胞Sf9中表达外源蛋白。SDS-PAGE和Western blot鉴定HPV-16 L1和HPV-11 L1蛋白的表达量及特异性,电镜观察昆虫细胞内VLP的存在。结果酶切和PCR法证实pFastBacDual-HPV-16 L1-HPV-11 L1转移质粒连接正确,转染昆虫细胞Sf9后,检测到HPV-16和HPV-11 L1特异蛋白,两种蛋白的相对分子质量(Mr)相近,约56×103;电镜观察到了VLP。结论本研究利用Bac to Bac系统构建Bacmid／HPV-16-HPV-11 L1,转染到Sf9昆虫细胞后重组外源蛋白得到高效表达,并经电镜证实昆虫细胞内存在较大量VLP,用此VLP免疫BALB／c小鼠后产生抗L1蛋白的抗体。共表达HPV L1蛋白可能为预防多型别HPV感染提供新途径。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16型 人乳头状瘤病毒11型 L1基因 共表达 类病毒颗粒 杆状病毒
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LncRNA HOTAIR在宫颈癌中的表达及与HPV16感染的相关性 被引量：5
10
作者 王丽莉 陈新光 《现代肿瘤医学》 CAS 2020年第7期1173-1177,共5页
目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)在宫颈癌中的表达及其与人乳头瘤病毒16型(HPV16)感染的相关性。方法:选取2016年8月至2017年6月于本院进行宫颈癌切除手术的96例癌组织标本为宫颈癌组,另选取同期68例宫颈上皮内瘤... 目的:探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(LncRNA HOTAIR)在宫颈癌中的表达及其与人乳头瘤病毒16型(HPV16)感染的相关性。方法:选取2016年8月至2017年6月于本院进行宫颈癌切除手术的96例癌组织标本为宫颈癌组,另选取同期68例宫颈上皮内瘤变(CIN)及52例正常宫颈组织标本分别为癌前病变组、正常组。采用qRT-PCR法检测各组LncRNA HOTAIR相对表达量,采用原位杂交法检测HPV16感染情况并根据检测结果将其分为阳性组(54例)与阴性组(42例)。比较分析LncRNA HOTAIR与宫颈癌患者临床病理特征及HPV16感染的关系,采用Logistic法分析影响宫颈癌患者HPV16感染的相关因素。结果:癌前病变组与宫颈癌组LncRNA HOTAIR表达水平显著高于正常组(P<0.05),且宫颈癌组LncRNA HOTAIR表达水平及HPV16阳性检出率显著高于癌前病变组(P<0.05);LncRNA HOTAIR表达与CIN分级、病理分级、淋巴结转移、临床分期、组织分化、HPV16感染显著相关(P<0.05);阳性组LncRNA HOTAIR表达水平显著高于阴性组(P<0.05);Logistic分析显示LncRNA HOTAIR表达为影响宫颈癌患者HPV16感染的独立危险因素。结论:宫颈癌中LncRNA HOTAIR表达水平升高并与HPV16感染密切相关,两者可发挥协同作用而参与宫颈癌发生及发展过程。 展开更多
关键词 宫颈癌 长链非编码RNA HOX转录反义RNA 人乳头瘤病毒16型
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人乳头瘤病毒16型E6蛋白真核表达载体的构建及表达 被引量：4
11
作者 蒋永林 王静 +2 位作者 王鑫 余敏君 万艳平 《南华大学学报（医学版）》 2006年第4期505-508,共4页
目的构建在哺乳动物细胞中表达的人乳头瘤病毒16型早期蛋白6真核表达载体pcD-NA3.1(-)/E6,为研究HPV16 E6蛋白在细胞永生化作用中的机制奠定实验基础。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增E6基因。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白斑筛... 目的构建在哺乳动物细胞中表达的人乳头瘤病毒16型早期蛋白6真核表达载体pcD-NA3.1(-)/E6,为研究HPV16 E6蛋白在细胞永生化作用中的机制奠定实验基础。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增E6基因。将PCR产物纯化后与pUCm-T载体连接,经蓝白斑筛选、双酶切鉴定及序列分析后,亚克隆至pcDNA3.1(-)真核表达载体中;阳性克隆经双酶切鉴定后转染RAW264.7巨噬细胞,Western blotting鉴定其在RAW264.7细胞中的表达。结果重组载体经酶切、PCR及测序证明插入片断序列正确无误,转染RAW264.7细胞后可在细胞中表达HPV16 E6蛋白。结论成功构建的HPV16 E6真核表达载体pcDNA3.1(-)/E6能在RAW264.7细胞中表达E6蛋白。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 早期蛋白6 真核表达
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pQE31-HPV16 L1重组质粒的构建及鉴定 被引量：3
12
作者 商庆龙 隋丽华 +3 位作者 李迪 王晶 钟照华 谷鸿喜 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2001年第1期7-9,共3页
目的　构建重组原核表达质粒以获得HPV16L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV16基因工程疫苗打下基础。方法　以克隆质粒pCR2 .1-HPV16L1为模板 ,用PCR方法扩增HPV16L1DNA片段 ,利用pQE31质粒载体构建pQE31 HPV16L1重组质粒 ,用酶切电泳验证重... 目的　构建重组原核表达质粒以获得HPV16L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV16基因工程疫苗打下基础。方法　以克隆质粒pCR2 .1-HPV16L1为模板 ,用PCR方法扩增HPV16L1DNA片段 ,利用pQE31质粒载体构建pQE31 HPV16L1重组质粒 ,用酶切电泳验证重组结果的正确性 ,测序检查质粒重组后序列情况。结果　PCR结果显示扩增片断大小约 1.5Kb ,与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小约 5 .0Kb。大小及酶切图谱与预期相同。经测序发现插入片段两端序列无改变。结论　pQE31 HPV16L1质粒构建成功。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 原核表达系统 pQE31-HPV16L1
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人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1的表达及病毒样颗粒的装配 被引量：4
13
作者 魏兰兰 谷鸿喜 +5 位作者 初明 王燕 庄敏 商庆龙 凌虹 张凤民 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期383-387,共5页
目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒 ,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。方法　获得含有HPV16L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在... 目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒 ,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。方法　获得含有HPV16L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在昆虫细胞中表达 ;对重组杆状病毒的扩增条件及L1蛋白的表达水平进行优化 ;电镜下观察昆虫细胞中晚期蛋白装配成病毒样颗粒的情况 ,经氯化铯密度梯度纯化病毒样颗粒 ,并经Westernblot进行验证。结果　获得了稳定表达L1蛋白的重组杆状病毒 ;以MOI值为 0 .2感染昆虫细胞可获得较高滴度的重组病毒 ,以MOI值为 10感染昆虫细胞可获得较高水平的L1蛋白表达 ;电镜下可观察到昆虫细胞核内直径为 5 5nm的病毒样颗粒 ;病毒样颗粒可通过氯化铯密度梯度离心获得。结论　获得人乳头瘤病毒哈尔滨地区分离株L1蛋白可在昆虫细胞中自主装配的病毒样颗粒并成功分离纯化。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 晚期蛋白L1 基因表达 病毒样颗粒 HPV16 地区分离株
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Aurora激酶A及Aurora激酶B与宫颈癌发生发展的相关性研究 被引量：3
14
作者 胡梦川 肖晋军 刘海霞 《临床和实验医学杂志》 2018年第4期346-350,共5页
目的探讨Aurora激酶A(Aurora-A)、Aurora激酶B(Aurora-B)与宫颈癌发生发展的相关性及意义。方法回顾性选取宫颈癌标本(鳞状细胞癌)30例为宫颈癌组;宫颈上皮内瘤样病变(CIN)30例为CIN组;正常宫颈组织30例为正常组。采用免疫组化检测Auror... 目的探讨Aurora激酶A(Aurora-A)、Aurora激酶B(Aurora-B)与宫颈癌发生发展的相关性及意义。方法回顾性选取宫颈癌标本(鳞状细胞癌)30例为宫颈癌组;宫颈上皮内瘤样病变(CIN)30例为CIN组;正常宫颈组织30例为正常组。采用免疫组化检测Aurora-A、Aurora-B、采用半定量RT-PCR法检测高危人乳头状瘤病毒(HPV16及HPV18)的mRNA在不同宫颈组织的表达,结合宫颈癌的病理特征进行分析。结果 (1)Aurora-A、Aurora-B及HPV16 mRNA、HPV18 mRNA在正常组、CIN组及宫颈癌组的表达分别为:1.54%、2.09%、(41.17±8.02)%、(16.05±6.78)%;36.58%、29.32%、(64.52±14.21)%、(28.97±7.98)%及71.59%、68.55%、(91.18±21.45)%、(46.62±13.58)%,宫颈癌组高于CIN组及正常组,差异有统计学意义(P<0.05),CIN组高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。Aurora-A、Aurora-B及HPV16 mRNA、HPV18 mRNA与宫颈病变呈正相关(P<0.05),Aurora-A或AuroraB均与HPV16 mRNA、HPV18 mRNA的表达呈正相关(P<0.05)。(2)Aurora-A或Aurora-B均与TNM分期、淋巴结转移、组织学分级呈正相关(P<0.05)。结论 Aurora-A、Aurora-B的表达与高危HPV有密切的关系,随着子宫颈病变的进展而逐渐增加,Aurora-A与Aurora-B有望成为宫颈癌早期诊断的分子标记以及的预防、治疗宫颈癌的新靶点。 展开更多
关键词 宫颈癌 Aurora激酶A Aurora激酶B HPV16 HPV18
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口腔鳞状细胞癌及白斑人乳头瘤病毒16型感染的临床研究 被引量：3
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作者 薛万林 刘春利 《临床口腔医学杂志》 2012年第5期293-294,共2页
目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和白斑(LK)患者人乳头瘤病毒16型(HPV-16)感染和临床病理参数之间的相关性。方法:收集30例OSCC和5例LK患者的组织切片,所有病例均经病理学确诊,提取组织DNA,通过巢式PCR检测HPV-16感染情况。结果:HPV-16与... 目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)和白斑(LK)患者人乳头瘤病毒16型(HPV-16)感染和临床病理参数之间的相关性。方法:收集30例OSCC和5例LK患者的组织切片,所有病例均经病理学确诊,提取组织DNA,通过巢式PCR检测HPV-16感染情况。结果:HPV-16与TNM分级之间未见相关性,60岁以下女性患者的HPV-16感染率高于60岁以上女性患者(P=0.024),而男性患者未见HPV-16感染和年龄存在相关性(P=0.649)。结论:60岁以下女性OSCC及LK患者中出现较高的HPV-16感染率,提示这可能是新的致癌危险因子。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 人类乳头瘤病毒-16 TNM分级
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hnRNP K在宫颈上皮内瘤样变中的作用及其与HPV16交互效应 被引量：4
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作者 丁玲 冯美娟 +7 位作者 刘春亮 王璐 宋志超 杨倩 李小雪 宋丽 高雯 王金桃 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1630-1635,共6页
目的探讨hnRNPK与HPVl6感染在宫颈上皮内瘤样变(CIN)中的作用及其交互效应。方法选取2014年6月至2015年6月在山西省介休市建立的社区队列中经病理学确诊的正常宫颈(NC)女性67例和CIN患者137例(CIN患者69例、CINⅡ/Ⅲ患者68例)为研究对... 目的探讨hnRNPK与HPVl6感染在宫颈上皮内瘤样变(CIN)中的作用及其交互效应。方法选取2014年6月至2015年6月在山西省介休市建立的社区队列中经病理学确诊的正常宫颈(NC)女性67例和CIN患者137例(CIN患者69例、CINⅡ/Ⅲ患者68例)为研究对象。采用结构式问卷收集研究对象人口学资料及宫颈病变相关因素的基础上,采集宫颈脱落细胞和宫颈活检或手术组织,应用分子导流杂交法检测HPVl6感染状况,并采用Westem blot技术检测宫颈组织中hnRNPK蛋白表达水平。采用SPSS 23.0软件对资料进行整理分析,研究对象的人口学特征、相关因素、hnRNPK蛋白和HPVl6感染在NC组、CIN I和CINⅡ/Ⅲ组的差异通过矿检验、趋势X^2检验、Kruskal-Wallis H检验进行比较;hnRNP K蛋白表达量的组间两两多重比较采用Bonferroni法;采用非条件logistic回归模型计算hnRNPK蛋白、HPVl6感染与CIN的关联强度OR值及其95%CI,采用相加交互模型及交互效应指标评价hnRNP K蛋白和HPVl6感染两因素在CIN中的交互效应。结果CINⅡ/Ⅲ组HPVl6感染率(41.2%)高于NC(10.4%)、CIN I(14.5%),差异有统计学意义(P<0.001),且随着CIN程度加重,HPVl6的感染率呈上升趋势(趋势Χ^2=18.512)。hnRNP K蛋白表达量在NC组、CIN I组和CINⅡ/Ⅲ组间差异有统计学意义(H=48.138,P<0.001),且随着CIN程度加重呈上升趋势(趋势Χ^2=21.765,P<0.001)。交互效应分析显示,hnRNPK蛋白高表达与HPVl6感染在CINⅡ/Ⅲ组存在正相加交互作用(API=0.639,95%CI:O.083~1.196),在CIN I组尚未发现存在类似交互作用。结论hnRNP K蛋白高表达、HPV16感染均可能增加CIN的发生风险,且在高度CIN发生中存在正相加交互作用。 展开更多
关键词 核不均一核糖核蛋白K 人乳头瘤病毒16型 宫颈上皮内瘤样变 交互效应
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98例宫颈癌人乳头状瘤病毒16型E6基因突变及多态性分析 被引量：4
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作者 丁晓华 蔡红斌 +2 位作者 张帆 梁雨 杨占秋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期989-992,共4页
目的研究湖北地区宫颈癌患者人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E6基因点突变分布及频率，与国内外其他研究人员发现的踊突变进行对比，分析历突变在宫颈癌发生中的意义。方法从宫颈癌患者手术切除标本中提取组织DNA，用HPV16E6特异性引物进行... 目的研究湖北地区宫颈癌患者人乳头状瘤病毒16型（HPV16）E6基因点突变分布及频率，与国内外其他研究人员发现的踊突变进行对比，分析历突变在宫颈癌发生中的意义。方法从宫颈癌患者手术切除标本中提取组织DNA，用HPV16E6特异性引物进行PCR扩增，对扩增的历基因片段进行测序分析。结果在35例宫颈癌组织DNA中有18例发生历基因178位核苷酸的突变，变突频率为51．43％，相应核苷酸改变为Asp—Glu，442位核苷酸有4例发生核苷酸序列的改变，突变频率为11．43％，另有10例发生1～2个核苷酸序列的改变。结论湖北地区98例宫颈癌患者人乳头状瘤病毒历基因存在高频率的178和442位核苷酸突变，一些为新发现的核苷酸序列的突变，这些突变在宫颈癌发生中的作用有待于进一步研究。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头状瘤病毒16型 序列分析 突变
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基于戊肝病毒的嵌合病毒样颗粒对人乳头瘤病毒16型肿瘤免疫治疗作用的研究
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作者 张柯欣 朱赟 +8 位作者 马培凯 安彤 李思奇 沈钱通 陈刚 罗永能 庄昉成 陆绍红 高孟 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第23期3251-3256,共6页
目的 研究基于戊肝病毒(hepatitis E virus,HEV)的嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV 16)肿瘤免疫治疗作用。方法 将HPV 16 E7插入HEV的p239蛋白形成重组嵌合蛋白p239-HPV... 目的 研究基于戊肝病毒(hepatitis E virus,HEV)的嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus type 16,HPV 16)肿瘤免疫治疗作用。方法 将HPV 16 E7插入HEV的p239蛋白形成重组嵌合蛋白p239-HPV16E7。所构建的重组蛋白经大肠杆菌表达、纯化、复性后,通过电镜和动态光散射对所得蛋白颗粒大小形态进行表征。将蛋白颗粒免疫C57B/L小鼠,通过流式细胞技术与酶联免疫斑点免疫试验检测脾淋巴细胞特异性免疫细胞分化情况;并且利用TC-1肿瘤细胞在C57B/L小鼠中构建肿瘤模型,以此评价蛋白颗粒在小鼠体内的抗肿瘤免疫效果。结果 体外复性后的嵌合蛋白在电镜下观察到颗粒结构,粒径大小为22.80 nm。所得蛋白颗粒在C57B/L小鼠体内诱导产生良好的特异性细胞免疫反应。与对照组相比,试验组脾淋巴细胞的CD3^(+)/CD4^(+)、CD3^(+)/CD8^(+)比例均有明显差异(P<0.05),且分泌IFN-γ干扰素的效应T细胞显著增加。同时,所得蛋白颗粒能有效抑制TC-1荷瘤小鼠体内肿瘤细胞的生长,在实验周期内小鼠未出现死亡,而对照组小鼠体内肿瘤快速生长,且6周后全部死亡。结论 原核表达的嵌合蛋白p239-HPV16 E7形成病毒样颗粒并有效诱导针对HPV 16的抗肿瘤免疫。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16型 原核表达 免疫原性
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E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒16/18型阳性患者分流的可行性 被引量：2
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作者 梁雯 白华 +2 位作者 林晓琰 黄丽英 黄宁 《广西医学》 CAS 2021年第5期569-573,共5页
目的探讨E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒61(HPV)16/18型阳性患者分流的可行性。方法选取HPV 16/18型阳性的200例患者作为研究对象。所有患者均进行E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查及阴道镜活检检查。以病理结果为金标准,评估E6/E7 m... 目的探讨E6/E7 mRNA检测用于人乳头状瘤病毒61(HPV)16/18型阳性患者分流的可行性。方法选取HPV 16/18型阳性的200例患者作为研究对象。所有患者均进行E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查及阴道镜活检检查。以病理结果为金标准,评估E6/E7 mRNA检测、液基细胞学检查对HPV 16/18型感染者的高级别鳞状上皮内瘤变(HSIL)及以上病变的诊断效能。结果在200例HPV 16/18型感染者中,阴道镜活检HSIL及以上病变的检出率仅为29.5%(59/200)。共107例患者HPV E6/E7 mRNA阳性,56例患者液基细胞学阳性。HPV E6/E7 mRNA阳性者HSIL及以上病变检出率高于阴性者(P<0.05);随着宫颈病变病理级别的提高,HPV E6/E7 mRNA阳性率呈升高趋势(均P<0.05),但液基细胞学异常率差异无统计学意义(P>0.05)。HPV E6/E7 mRNA诊断HSIL及以上病变的灵敏度、特异度分别为86.44%、60.28%,液基细胞学的灵敏度、特异度分别为25.42%、70.92%,HPV E6/E7 mRNA的灵敏度高于液基细胞学(P<0.05)。结论E6/E7 mRNA检测对HPV 16/18型感染者的HSIL及以上病变具有较好的诊断效能,或可用于患者的进一步分流,以降低阴道镜的转诊率。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒感染 人乳头状瘤病毒16型 人乳头状瘤病毒18型 E6/E7 mRNA 患者分流 液基细胞学 阴道镜转诊率
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人成纤维细胞转染HPV16型早期蛋白基因后端粒酶的活性表达 被引量：1
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作者 吴翔 朱冰 +1 位作者 杨光彩 徐钤 《第一军医大学学报》 CSCD 1999年第5期431-434,共4页
用已构建的含有ＨＰＶ１６的早期蛋白的质粒载体：ｐＭＥ６ＳＮ、ｐＭＥ７ＳＮ和ｐＭＥ６Ｅ７ＳＮ经脂质体介导，转入正常的人成纤维细胞。经Ｇ４１８选择筛选及鉴定后证实，Ｅ６、Ｅ７、Ｅ６Ｅ７转化的细胞细胞寿命延长；Ｅ６、Ｅ６Ｅ... 用已构建的含有ＨＰＶ１６的早期蛋白的质粒载体：ｐＭＥ６ＳＮ、ｐＭＥ７ＳＮ和ｐＭＥ６Ｅ７ＳＮ经脂质体介导，转入正常的人成纤维细胞。经Ｇ４１８选择筛选及鉴定后证实，Ｅ６、Ｅ７、Ｅ６Ｅ７转化的细胞细胞寿命延长；Ｅ６、Ｅ６Ｅ７表达的细胞中有端粒酶的表达，Ｅ７表达的细胞中未能检测到端粒酶的表达。提示端粒酶的表达是细胞转化后的一个后续事件。 展开更多
关键词 人乳瘤病毒 人成纤维细胞 端粒酶 子宫颈肿瘤
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