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人肺鳞癌组织的血清蛋白质组学的比较分析 被引量:10
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作者 李萃 肖志强 +7 位作者 章晓鹏 陈主初 吴晓英 冯雪萍 张鹏飞 李建玲 易红 梁宋平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期357-368,共12页
采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学(proteomics)研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(serologicproteomeanalysis ,SERPA)筛选肺癌分子标志物.对10例人肺鳞癌组织,应用双向凝胶电泳(two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)... 采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学(proteomics)研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(serologicproteomeanalysis ,SERPA)筛选肺癌分子标志物.对10例人肺鳞癌组织,应用双向凝胶电泳(two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)技术对同一肺鳞癌组织的细胞总蛋白同时进行电泳后获得3张相同的凝胶,其中一块2 DE凝胶经银染显色作为平行胶,其余两块2 DE凝胶经电转膜将凝胶中的蛋白质转至硝酸纤维素(NC)膜上,然后分别与肺癌患者的自身血清以及正常对照血清进行Western印迹分析,获取Western印迹反应图谱.经计算机图像分析识别差异反应的蛋白质,然后与平行胶比较找出相应的差异反应蛋白质点.获得了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的Western印迹反应图谱;图像分析共识别36±8个差异反应的蛋白质;在平行胶上找到了匹配的差异反应蛋白质点.对2 0个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出14个与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关抗原.通过血清蛋白质组技术对肺鳞癌组织进行的研究,建立了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常血清的Western印迹反应图谱,成功鉴定14个肺鳞癌相关抗原,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断。 展开更多
关键词 人肺鳞癌 血清蛋白质组 双向凝胶电泳 Western印迹反应图谱 MALDI-TOF-MS
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CBP基因对肺鳞癌NCI-H520细胞生长侵袭的抑制作用 被引量:5
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作者 周栋 杨勇 +5 位作者 王志强 王成 张建华 苟云久 李斌 苏云峰 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1594-1598,共5页
目的:研究CSK结合蛋白(CSK-binding protein,CBP)基因转染对人肺鳞癌NCI-H520细胞体外生长侵袭的影响。方法:构建CBP真核表达质粒pcDNA3.0-CBP,以脂质体转染法转染体外培养的人肺鳞癌细胞株NCI-H520,G418筛选出抗性克隆。Western-blott... 目的:研究CSK结合蛋白(CSK-binding protein,CBP)基因转染对人肺鳞癌NCI-H520细胞体外生长侵袭的影响。方法:构建CBP真核表达质粒pcDNA3.0-CBP,以脂质体转染法转染体外培养的人肺鳞癌细胞株NCI-H520,G418筛选出抗性克隆。Western-blotting和RT-PCR分别检测转染前后CBP蛋白和mRNA水平的变化,MTT法分析细胞生长抑制作用,Transwell体外侵袭实验和Wound-healing实验观察细胞的侵袭和迁移能力。结果:稳定转染CBP基因的细胞株有外源目的基因的整合和相应蛋白的高表达。MTT检测表明,pcDNA3.0-CBP转染组活细胞数低于未转染组和pcDNA3.0(-)空载体质粒细胞转染组(P<0.01)。细胞侵袭、迁移实验表明转染pcDNA3.0-CBP的瘤细胞侵袭与迁移能力均明显下降(P<0.01)。结论:外源性CBP基因稳定转染可抑制人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖、侵袭的恶性表型。 展开更多
关键词 CBP基因 肺鳞癌 转染 侵袭
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19片段角蛋白阴性的肺鳞癌患者血清蛋白质谱分析
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作者 王波 杨欢 +2 位作者 张军宁 朱虹 庄志祥 《中国血液流变学杂志》 CAS 2013年第1期92-95,共4页
目的运用液体蛋白芯片飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析19片段角蛋白(CYFRA21-1)阴性的肺鳞癌血清蛋白质表达谱,筛选具有诊断意义的血清标志物,用于CYFRA21-1阴性的肺鳞癌的早期诊断.方法采集60例CYFRA21-1阴性肺鳞癌患者和60名... 目的运用液体蛋白芯片飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析19片段角蛋白(CYFRA21-1)阴性的肺鳞癌血清蛋白质表达谱,筛选具有诊断意义的血清标志物,用于CYFRA21-1阴性的肺鳞癌的早期诊断.方法采集60例CYFRA21-1阴性肺鳞癌患者和60名正常对照者血清标本,随机分为模型构建组和模型验证组;运用Clinprot磁珠纯化、MALDI-TOF-MS技术及ClinProTools软件检测分析模型构建组血清蛋白表达谱,筛选差异蛋白并建立诊断模型,再用模型验证组标本进行验证.结果模型构建组CYFRA21-1阴性的肺鳞癌患者与正常对照者的血清蛋白质图谱比较,发现差异蛋白23个,筛选出质荷比为3883.83(m/z)、4640.68(m/z)、6629.27(m/z)、7763.29(m/z)、9284.66(m/z)的蛋白建立诊断模型,模型敏感性为90.0%,特异性为96.7%,其中差异蛋白6629.27(m/z)为肿瘤高表达,差异蛋白3883.83(m/z)、4640.68(m/z)、7763.29(m/z)、9284.66(m/z)为肿瘤低表达.结论运用MALDI-TOF-MS技术可筛选出CYFRA21-1阴性的肺鳞癌血清中的特异性标志物,为肺鳞癌的早期诊断提供了新的检测方法. 展开更多
关键词 CYFRA21-1 MALDI-TOF-MS 肺鳞癌 蛋白谱
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5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因甲基化及蛋白表达的影响
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作者 郭琪 胡娇 +1 位作者 张毅 胡明军 《新乡医学院学报》 CAS 2020年第5期401-403,409,共4页
目的探讨5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中大麻素受体相互作用蛋白-1(CNRIP1)基因甲基化和蛋白表达的影响。方法取对数生长期NCI-H226和NCI-H520细胞株分为实验组和对照组,对照组细胞使用不含5′-氮杂-... 目的探讨5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中大麻素受体相互作用蛋白-1(CNRIP1)基因甲基化和蛋白表达的影响。方法取对数生长期NCI-H226和NCI-H520细胞株分为实验组和对照组,对照组细胞使用不含5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养;将实验组细胞分为0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组,分别使用含不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol·L^-1)5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养。取各组培养72 h后的细胞进行DNA提取及蛋白提取,采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测各组细胞中CNRIP1基因的甲基化状态,采用Western blot检测各组细胞中CNRIP1蛋白表达。结果对照组和0.5μmol·L^-1组NCI-H226、NCI-H520细胞株均显示为甲基化,1.0、1.5μmol·L^-1组中2种细胞株均显示为非甲基化。0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量随浓度的增加而升高,两两比较差异均有统计学意(P<0.05)。结论人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因发生甲基化可能是导致基因表达下调甚至失活的主要原因,5′-氮杂-2′-脱氧胞苷可以逆转CNRIP1基因甲基化状态,促进CNRIPI蛋白表达。 展开更多
关键词 NCI-H226 NCI-H520 人肺鳞状细胞癌 基因甲基化 大麻素受体相互作用蛋白-1 5′-氮杂-2′-脱氧胞苷
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双向凝胶电泳-飞行时间质谱法分析人肺鳞癌细胞NCI-H520蛋白质组成分 被引量:34
5
作者 詹显全 陈主初 +5 位作者 关勇军 李萃 何春梅 梁宋平 谢锦云 陈平 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期575-582,共8页
目的:建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法:用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系NCI-H520总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析,对部分蛋白质 点用基质辅助激... 目的:建立和优化肿瘤蛋白质组研究的方法系统,并分析人肺鳞癌细胞蛋白质组。方法:用固相 pH梯度双向凝胶电泳分离人肺鳞癌细胞系NCI-H520总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析,对部分蛋白质 点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flying mass  spectrometry, MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,用 PeptIdent软件查询 SWISS-PROT数据库。结果:获得了分辨 率和重复性均较好的双向电泳银染图谱,图像分析探测到3块胶的平均蛋白质点数为(1146±116),平均匹配的点 数为(851±95),匹配率达 73. 7%, 3 块胶在蛋白质点位置上具有较好的重复性, IEF方向的平均偏差为(1. 52± 0.22)mm,SDS-PAGE方向的平均偏差为(1.97 ± 0.13)mm。随机取60个蛋白质点进行胶内原位酶解-质谱指纹图 分析得到了54个蛋白质点的肽质指纹图,查询数据库初步鉴定了44个蛋白质,其中部分是与细胞周期有关的蛋 白,部分是与信号传导有关的蛋白。 展开更多
关键词 双向电泳 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 肺肿瘤 鳞癌细胞 NCI-G520
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Proteomic Comparison of Two-Dimensional Gel Electrophoresis Profiles from Human Lung Squamous Carcinoma and Normal Bronchial Epithelial Tissues 被引量:16
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作者 CuiLi XianquanZhan +9 位作者 MaoyuLi XiaoyingWu FengLi JianlingLi ZhiqiangXiao ZhuchuChen XuepingFeng PingChen JingyunXie SongpingLiang 《Genomics, Proteomics & Bioinformatics》 SCIE CAS CSCD 2003年第1期58-67,共10页
Differential proteome profiles of human lung squamous carcinoma tissue compared to paired tumor-adjacent normal bronchial epithelial tissue were established and analyzed by means of immobilized pH gradient-based two-d... Differential proteome profiles of human lung squamous carcinoma tissue compared to paired tumor-adjacent normal bronchial epithelial tissue were established and analyzed by means of immobilized pH gradient-based two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-D PAGE) and matrix-assisted laser desorp-tion/ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). The results showed that well-resolved, reproducible 2-DE patterns of human lung squamous carcinoma and adjacent normal bronchial epithelial tissues were obtained under the condition of 0.75-mg protein-load. The average deviation of spot position was 0.733±0.101 mm in IEF direction, and 0.925±0.207 mm in SDS-PAGE direction. For tumor tissue, a total of 1241±88 spots were detected, 987±65 spots were matched with an average matching rate of 79.5%. For control, a total of 1190±72 spots were detected, and 875±48 spots were matched with an average matching rate of 73.5%. A total of 864±34 spots were matched between tumors and controls. Forty-three differential proteins were characterized: some proteins were related to oncogenes, and others involved in the regulation of cell cycle and signal transduc-tion. It is suggested that the differential proteomic approach is valuable for mass identification of differentially expressed proteins involved in lung carcinogenesis. These data will be used to establish human lung cancer proteome database to further study human lung squamous carcinoma. 展开更多
关键词 human lung squamous carcinoma tissue normal bronchial epithelial tissue 2-D PAGE MALDI-TOF-MS PROTEOME
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REVERSION OF MALIGNANT PHENOTYPES OF HUMAN LUNG SQUAMOUS CARCINOMA CELLS BY ORNITHINE DECARBOXYLASE ANTISENSE RNA 被引量:4
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作者 关钧 范慕贞 曹淑兰 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1996年第4期240-243,共4页
Abnormally elevated activity of ornithine decarboxylase (ODC), and subsequent polyamine accumulation are intimately associated with the genesis.development and metastasis of cancer. In the present study, to control th... Abnormally elevated activity of ornithine decarboxylase (ODC), and subsequent polyamine accumulation are intimately associated with the genesis.development and metastasis of cancer. In the present study, to control the growth of tumor cells, ODC antisense RNA was used to transfect human lung squamous carcinoma cell line LTEP-78. Compared with the parental cells, growth of the antisense transfected LTEP-78 cells arrested in G0/Gl phase and colony formation in soft agarose and tumorigenicity in nude mice were significantly reduced. Nucleic acid hybridization demonstrated that the transfectants expressed a high level of ODC antisense RNA and a significantly reduced level of endogenous ODC mRNA.The results suggest that the reversion of malignant phenotypes of human lung squamous carcinoma cells transfected with ODC antisense RNA is associated with the inhibition of polyamine biosynthesis. 展开更多
关键词 human lung squamous carcinoma cells Ornithine decarboxylase Antisense RNA
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人肺鳞癌细胞电阻抗谱测量实验研究 被引量:3
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作者 张倩 方云 +1 位作者 董长征 马青 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期114-118,共5页
在1 k Hz^100 MHz范围内,采用Agilent 4294A精密阻抗分析仪,测量人肺鳞癌SK-MES-1细胞悬浮液的电阻抗,通过电阻抗频谱图和Nyquist图的分析,提取肺癌细胞电阻抗频谱的特征参数,并与人正常肺上皮BEAS-2B细胞进行比较。结果显示:肺癌细胞... 在1 k Hz^100 MHz范围内,采用Agilent 4294A精密阻抗分析仪,测量人肺鳞癌SK-MES-1细胞悬浮液的电阻抗,通过电阻抗频谱图和Nyquist图的分析,提取肺癌细胞电阻抗频谱的特征参数,并与人正常肺上皮BEAS-2B细胞进行比较。结果显示:肺癌细胞与正常人肺细胞悬浮液的电阻抗谱存在着较显著的差异;肺鳞癌细胞的电阻抗实部增量最大值(ΔZmax)和电阻抗虚部峰值(Z″P)与细胞体积分数(Φ)呈线性关系;肺鳞癌细胞悬浮液阻抗谱的特征频率(fc)低于正常人肺细胞的54.72%(P<0.001),并且不受细胞体积分数的影响。这表明,细胞悬浮液阻抗谱特征频率可以用于区分肺鳞癌细胞和正常人肺细胞,可为肺鳞癌细胞的鉴定与分型提供电生理指标。 展开更多
关键词 人肺鳞癌细胞 电阻抗频谱 Nyquist图 特征频率
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维甲酸对肺鳞癌细胞株增殖分化的影响 被引量:2
9
作者 苏晓丽 胡成平 +1 位作者 吴鄂生 唐发清 《湖南医科大学学报》 CSCD 2000年第6期579-581,共3页
用 5× 10 -6mol·L-1浓度的全反式维甲酸 (ATRA)作用于人肺鳞癌细胞株 (TUL细胞 ) ,检测细胞生长曲线 ;用MTT法检测细胞生长抑制率 ;用3H TdR掺入法测细胞DNA合成情况 ;透射电镜下观察细胞超微结构改变 ;并观察裸鼠成瘤情况。... 用 5× 10 -6mol·L-1浓度的全反式维甲酸 (ATRA)作用于人肺鳞癌细胞株 (TUL细胞 ) ,检测细胞生长曲线 ;用MTT法检测细胞生长抑制率 ;用3H TdR掺入法测细胞DNA合成情况 ;透射电镜下观察细胞超微结构改变 ;并观察裸鼠成瘤情况。结果显示 :与对照组比较 ,经ATRA作用后 ,TUL细胞生长速度减慢 ,细胞生长曲线平坦 ,细胞生长抑制率为 42 3 % ,3H TdR掺入率明显减低 (P <0 .0 1) ,细胞DNA合成减少 ,透射电镜观察发现 ,TUL细胞呈良性分化 ,TUL细胞致瘤性明显降低。提示ATRA能抑制TUL细胞增殖 ,诱导分化 。 展开更多
关键词 维甲酸 肺鳞癌 细胞株 细胞增殖 细胞分化
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携带凋亡素基因的重组腺病毒对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299凋亡的影响
10
作者 阮军 吴友茹 缪李丽 《中国药房》 CAS 北大核心 2015年第22期3066-3069,共4页
目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对... 目的:研究携带凋亡素基因VP3的重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3对人肺鳞癌细胞SK-MES-1、人肺腺癌细胞NCI-H1299的凋亡的影响。方法:取对数生长期SK-MES-1、NCI-H1299细胞,各分为重组腺病毒(Adxsi-GFP-VP3)组、空病毒(Adxsi-GFP)组和细胞对照(磷酸盐缓冲液)组,依次记为A、B、C组。采用逆转录-聚合酶链反应和Western blot法检测A、B组细胞转染48、72 h的VP3 mRNA和Apoptin表达情况,透射电镜观察A组细胞转染72 h的超微结构变化。采用MTT法检测3组细胞转染24、48、72、96 h的细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞转染后24、48、72 h的凋亡率及细胞周期变化。结果:与B组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞转染48 h后有VP3 mRNA表达,转染72 h后有Apoptin表达。A组转染72 h后SK-MES-1、NCI-H1299细胞均出现细胞凋亡的超微结构改变。与B、C组比较,A组SK-MES-1、NCI-H1299细胞增殖活性降低、细胞凋亡率增加,且与转染时间呈正相关;转染72 h S期的SK-MES-1、NCI-H1299细胞比例降低、G2/M期细胞比例增加。以上差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:Adxsi-GFP-VP3能有效诱导SK-MES-1、NCI-H1299细胞凋亡。 展开更多
关键词 凋亡素基因VP3 重组腺病毒载体Adxsi-GFP-VP3 人肺鳞癌细胞SK-MES-1 人肺腺癌细胞NCI-H1299 蛋白表达 凋亡 细胞周期
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重组人内皮抑素对肺鳞癌放射增敏作用的体外实验研究 被引量:5
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作者 游震宇 王俊杰 +3 位作者 赵勇 庄洪卿 刘峰 张颖东 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2009年第4期326-329,共4页
目的探讨国产重组人内皮抑素是否对肺鳞癌细胞系H-520具有放射增敏作用。方法取指数生长期的人肺鳞癌细胞系H-520细胞,用成克隆实验检测内皮抑素的细胞毒性和各实验组的克隆形成能力,计算各组细胞存活分数,利用多靶单击模型拟合细胞... 目的探讨国产重组人内皮抑素是否对肺鳞癌细胞系H-520具有放射增敏作用。方法取指数生长期的人肺鳞癌细胞系H-520细胞,用成克隆实验检测内皮抑素的细胞毒性和各实验组的克隆形成能力,计算各组细胞存活分数,利用多靶单击模型拟合细胞存活曲线。流式细胞术检测细胞凋亡、细胞周期分布变化及活化的Caspase蛋白片段水平。结果成克隆实验中内皮抑素联合照射组较照射组D0、Dq、D10SF2值均低,放射增敏比为1.50(D0值之比)。流式细胞术检测细胞凋亡示内皮抑素+照射组细胞凋亡率分别为22.38%±1.61%、35.01%±1.16%、46.83%±2.06%、64.08%±4.28%,照射组分别为4.27%±0.29%、14.3%±1.15%、28.49%±1.58%、54.79%±1.89%,两组凋亡率差异有统计学意义(f=19.17、17.79、25.64、3.44,P值均〈0.05)。内皮抑素可诱导H-520细胞G0+G1阻滞,而照射则诱导G2+M期阻滞。内皮抑素+照射组活化Caspase蛋白片段表达增加(62.7%±1.9%)较对照组(12.1%±0.1%)、内皮抑素组(54.6%,4-1.0%)和照射组(34.1%±1.2%)显著增高(t=46.69、6.55、22.54,P值均〈0.05;)。结论内皮抑素可通过抑制H-520细胞生长、促进凋亡、细胞周期重分布来达到放射增敏作用。 展开更多
关键词 内皮抑素 细胞系 人肺鳞状细胞癌 放射增敏 细胞凋亡 细胞周期
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回药爱康方含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响 被引量:2
12
作者 周慧 马科 +3 位作者 周丽萍 马治国 边静 姬秀娥 《宁夏医科大学学报》 2014年第3期241-244,247,236,共6页
目的探讨回药爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKFL、AKFM、AKFH)组,环磷酰胺(CTX)组,AKFL、AKFM、AKFH联合CTX组。... 目的探讨回药爱康方(AKF)含药血清对人肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖及周期的影响。方法雄性SD大鼠80只,按体重随机分为8组:生理盐水对照组(NS),回药爱康方低、中、高剂量(AKFL、AKFM、AKFH)组,环磷酰胺(CTX)组,AKFL、AKFM、AKFH联合CTX组。分别给予相应AKFL、AKFM、AKFH浓缩水煎剂灌胃,连续5d;CTX组和联合组再按20mg·kg-1给予环磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射。NS组给予等量生理盐水。上述各组动物取血制备含药血清,体外培养人肺鳞癌SK-MES-1细胞。应用MTT法检测各组含药血清对SK细胞增殖的影响,流式细胞仪进行细胞周期时相分析。结果 AKF含药血清作用不同时间对SKMES-1细胞生长有抑制作用(P<0.05)。AKF联合CTX含药血清能够抑制SK细胞增殖,其中AKFH联合CTX组的抑制率明显高于其他组,48h之内抑制程度呈时间和浓度依赖性。5%、10%、20%浓度组的含药血清作用SK-MES-1细胞24、48、72h后,与NS比较,除AKFL外,其余各组抑制率均有升高(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,AKF含药血清及联合CTX含药血清能使SK细胞阻滞于G1期,随着药物浓度的增加,G1期细胞增多、S期细胞减少,和NS组比较,高剂量以及联合组尤为明显(P<0.05)。10%、20%浓度含药血清组与NS组比较,各组的G0/G1期细胞增多、S期细胞逐渐减少(P<0.05);而与CTX组比较,G0/G1期细胞少于CTX组,S期细胞多于CTX组(P<0.05),各联合组G0/G1期细胞多于CTX组,S期细胞少于CTX组(P<0.05)。结论 AKF含药血清可抑制SK细胞增殖,并与CTX有协同作用,其机制可能与其阻滞细胞于G1期有关。 展开更多
关键词 回药爱康方 含药血清 人肺鳞癌SK-MES-1细胞 增殖 周期
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三株抗人肺鳞癌单克隆抗体免疫组化分析
13
作者 唐睿珠 李继梅 +3 位作者 边莉 马丽菊 王秦秦 郝萍 《昆明医学院学报》 2010年第2期31-34,38,共5页
目的对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确... 目的对三株抗云南个旧肺鳞癌YTMLC-90杂交瘤细胞S2D1、N2D1、N3C5所分泌的单克隆抗体进行不同组织细胞的免疫组化分析,探讨其特异性.方法用收集的原倍杂交瘤细胞上清常规ABC免疫组化法进行组织细胞学交叉检测,分析三个抗体与临床病理确诊的肺鳞癌组织、肺腺癌组织、肠癌组织、食道癌组织、肾癌组织、肺正常组织石腊切片和肺鳞癌YTMLC-90细胞系、肺腺癌GLC-82细胞系、舌鳞癌Tca-8113细胞系、鼻咽癌KB细胞系、胶质瘤U-251细胞系、膀胱癌T-24、B1u-87细胞系的交叉反应.结果杂交瘤细胞上清液与肺癌组织及肺鳞癌、肺腺癌细胞系YTMLC-90、GLC-82反应呈阳性,阳性率分别为82%、100%;与正常肺组织及肠癌组织、肾癌组织、食道癌组织及体外培养的其它各肿瘤细胞系均呈阴性反应.结论经免疫组化研究,三株单克隆抗体具有肺癌特异性,属于肺癌相关抗原的单克隆抗体. 展开更多
关键词 肺鳞癌细胞系YTMLC-90 单克隆抗体(McAb) 免疫组化
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吸烟者肺肿瘤ras原癌基因活化的检测 被引量:1
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作者 刘祥麟 马洁羽 +3 位作者 孔颂阳 钱连芳 茅幼霞 周筱梅 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期412-415,共4页
从有长期吸烟嗜好的肺癌患者的手术标本(鳞状上皮癌)提取高分子量的癌细胞基因组DNA,对小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)进行转染,获二轮转化细胞,发现二轮转化率是一轮的3倍.证实在转染过程中转化灶出现的多少,与所用DNA的量有关,... 从有长期吸烟嗜好的肺癌患者的手术标本(鳞状上皮癌)提取高分子量的癌细胞基因组DNA,对小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)进行转染,获二轮转化细胞,发现二轮转化率是一轮的3倍.证实在转染过程中转化灶出现的多少,与所用DNA的量有关,二轮转化细胞可在软琼脂上培养存活,接种裸鼠(BALB/c)于注射部位长出肿瘤。表明该二轮转化细胞具有肿瘤细胞的特性,用32P标记的人Alu重复序列和ras癌基因家族探针分别与一轮、二轮转化细胞和裸鼠肿瘤细胞的DNA进行Southern印迹转移和分子杂交。结果在三者细胞的DNA中都见有与Alu杂交的阳性条带,从而证明在转染过程中人体特有的Alu重复序列已整合到转化细胞的基因组中,并确定了转化细胞中的转化基因之一的属性为Ha-ras癌基因,本工作提示吸烟可能是人体原癌基因(C-Ha-ras)活化和肺鳞癌发生的重要原因。 展开更多
关键词 吸烟 检测 原癌基因 肺肿瘤
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5-杂氮-2′-脱氧胞苷上调CK13表达并抑制人肺鳞癌YTMLC-9细胞增殖
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作者 姚芳 张鹏 王元国 《天津医科大学学报》 2015年第6期474-479,共6页
目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine)对人肺鳞癌YTMLC-9细胞株增殖的影响及对细胞角蛋白13(CK13)表达和CK13基因甲基化的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(1、2、5、10... 目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-杂氮2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine)对人肺鳞癌YTMLC-9细胞株增殖的影响及对细胞角蛋白13(CK13)表达和CK13基因甲基化的影响。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度(1、2、5、10,20、40μmol/L)5-aza-2′-deoxycytidine处理1~4 d后的5-aza-2′-deoxycytidine对人肺鳞癌YTMLC-9细胞株生长的影响;采用半定量PCR及Western blot检测5μmol/L的5-aza-2′-deoxycytidine作用YTMLC-91~4 d CK13的表达;采用甲基化PCR检测不同浓度(1、2、5、10μmol/L)5-aza-2′-deoxycytidine 处理48 h后CK13甲基化和非甲基化的变化。结果:5-aza-2′-deoxycytidine对人肺鳞癌YTMLC-9细胞株的生长具有明显地抑制作用,当用药浓度高于20μmol/L后产生明显的细胞毒性;5-aza-2′-deoxycytidine能够上调CK13基因表达,呈时间依赖性。结论:5-aza-2′-deoxycytidine抑制人肺鳞癌YTMLC-9细胞的生长,抑制作用呈浓度、时间依赖性。5-aza-2′-deoxycytidine可以使CK13重新表达。其生物学效应可能与CK13启动子甲基化状态改变有关。 展开更多
关键词 5-aza-2′-deoxycytidine YTMLC-9 细胞增殖 DNA甲基化 CK13
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肺鳞癌细胞单克隆抗体的建立及鉴定
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作者 唐睿珠 李继梅 +3 位作者 边莉 马丽菊 郝萍 王秦秦 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第9期907-911,共5页
目的制备出高效价的抗人肺鳞癌单克隆抗体。方法以云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90免疫的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1、SP2/0细胞为亲代细胞,应用鼠-鼠杂交瘤技术建立杂交瘤细胞系。ELISA法筛选,有限稀释法克隆化培养,ELISA法测定抗... 目的制备出高效价的抗人肺鳞癌单克隆抗体。方法以云南个旧肺鳞癌细胞YTMLC-90免疫的BALB/c小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤NS-1、SP2/0细胞为亲代细胞,应用鼠-鼠杂交瘤技术建立杂交瘤细胞系。ELISA法筛选,有限稀释法克隆化培养,ELISA法测定抗体效价,双抗体夹心法鉴定Ig亚类,制备染色体,G iemsa染色计数染色体数目,ABC免疫组化法行不同组织细胞的交叉检测。结果获得3株稳定分泌抗YTMLC-90细胞抗体的杂交瘤细胞株S2D1、N2D1及N3C5。培养上清效价分别为1∶512、1∶284及1∶1 024,腹水效价分别为1∶105、1∶104及1∶104;Ig亚类分别为IgG1、IgG2a及IgG3;染色体众数在90~110之间;3株抗人肺鳞癌单克隆抗体与其他组织细胞无交叉反应性。杂交瘤细胞体外传代培养6个月仍保持抗体稳定分泌。结论成功制备高效且特异的抗人肺鳞癌单克隆抗体。 展开更多
关键词 肺鳞癌细胞YTMLC-90 单克隆抗体 生物学特性
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