PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤中的调控作用及重组人红细胞生成素预保护效应 被引量：12

1

作者 周文祥 杨永丽 +4 位作者 杨晓 夏章晖 韩敏 聂祥智 徐翠玲 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期314-320,共7页

目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断... 目的探讨PI3K/Akt/GSK-3β通路对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤过程中细胞凋亡的调控及重组人红细胞生成素(rHuEPO)的预保护作用。方法正常培养的HK-2细胞,分为7组,正常对照组、缺血再灌注(I/R)组、LY294002干预组(PI3K/Akt阻断剂10μmol/L)、LiCl干预组(GSK-3β阻断剂20μmol/L)、rHuEPO干预组(20U/L)、rHuEPO+LY294002双干预组、rHuEPO+LiCl双干预组。Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)、AktSer473、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、GSK-3βSer9及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3活性;MTT法检测细胞活力;An-nexinⅤ/PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡。结果缺血再灌注损伤诱导HK-2细胞凋亡率上调[(15.2±1.4)%]、Akt活性水平下降、GSK-3β及Caspase3酶活性水平上调,与正常对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与I/R组相比,LY294002干预使细胞凋亡率进一步上调[(18.2±2.1)%]、Akt活性水平下调、GSK-3β及Caspase3酶活性上调;LiCl干预使细胞凋亡率下调[(12.3±0.8)%]、Akt活性水平上调、GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。rHuEPO干预与I/R组相比,细胞凋亡率下降[(11.1±1.6)%]、Akt活性水平升高而GSK-3β及Caspase3酶活性下调,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与rHuEPO干预组比较,rHuEPO+LY294002双干预组细胞凋亡率升高[(13.4±1.9)%]、Akt活性水平下降而GSK-3β及Caspase3酶活性上调;rHuEPO+LiCl双干预组细胞凋亡率下调[(7.5±1.3)%]、Akt活性水平上升而GSK-3β及Caspase3酶活性下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺血再灌注损伤可引起肾小管上皮细胞凋亡,Akt活性降低及GSK-3β活性升高,影响Caspase3依赖的外源性凋亡途径可能是其凋亡机制之一。rHuEPO可通过增强Akt活性,降低GSK-3β及Caspase3酶活性,减少细胞凋亡,对HK-2缺血再灌注损伤有一定的保护作用。 展开更多

关键词 磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B 糖原合成酶激酶3Β 缺血再灌注损伤 肾小管上皮细胞 细胞凋亡 重组人促红细胞生成素

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丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

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作者 石贤聪 谢治深 +6 位作者 赵靓 王佳俊 段亚飞 王潘 张振强 张效威 徐江雁 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期56-64,共9页

目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-... 目的:基于B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20μmol·L^(-1))丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响及给予丹酚酸F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)评价丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、Bcl-2、细胞色素C(Cyt C)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达及激活情况的影响。2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)及线粒体膜电位(JC-1)考察丹酚酸F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生及线粒体膜电位的影响。结果:与空白组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.01),乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01);Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的降低,ROS产生过量蓄积。与模型组比较,丹酚酸F组有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05),明显降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β含量(P<0.05,P<0.01),显著减少PI阳性细胞的比例(P<0.01);丹酚酸F组降低Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达,明显升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),HK-2细胞线粒体膜电位的升高,ROS的过量蓄积减少。结论:丹酚酸F通过减少ROS的产生,改善线粒体膜电位失衡,抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。 展开更多

关键词 丹酚酸F B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/胱天蛋白酶-3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)信号通路 肾小管上皮细胞 细胞焦亡

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山松醇同源物1在缺氧/复氧诱导的人肾小管上皮细胞损伤中的作用及机制研究

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作者 胡圣国 郭义 +3 位作者 袁超 李又空 王敏 朱敏 《临床肾脏病杂志》 2024年第10期841-846,共6页

目的探究山松醇同源物1(pumilio homolog 1,PUM1)在缺氧/复氧(hypoxia/reoxy-genatio,H/R)诱导的人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,HK-2)损伤中的作用及机制。方法体外建立HK-2细胞的H/R模型;通过小干扰RNA(small... 目的探究山松醇同源物1(pumilio homolog 1,PUM1)在缺氧/复氧(hypoxia/reoxy-genatio,H/R)诱导的人肾小管上皮细胞(human renal tubular epithelial cells,HK-2)损伤中的作用及机制。方法体外建立HK-2细胞的H/R模型;通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低HK-2细胞的PUM1表达;细胞等量随机法分为对照(Control)组、H/R组、H/R+siRNA组。蛋白质印迹法用以检测PUM1蛋白表达水平;细胞计数试剂盒8用以检测细胞活力;过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)评估氧化应激水平;流式细胞术用以检测细胞凋亡水平。结果与Control组相比,H/R 3 h组(1.76±0.11比0.98±0.05)、H/R 6 h组(2.89±0.14比0.98±0.05)、H/R 12 h组(3.78±0.08比0.98±0.05)PUM1的蛋白表达水平随着缺氧时间的延长逐渐增高(均P<0.05)。与H/R组相比,H/R+si-PUM1组敲低PUM1的表达能够显著改善H/R后HK-2细胞的细胞活力(73.67±3.42比29.60±2.94)、氧化应激[H_(2)O_(2):(13.53±0.85)μmol/L比(22.43±1.12)μmol/L、MDA:(16.03±0.70)μmol/L比(31.20±1.50)μmol/L、SOD:(34670±1800)U/L比(5730±1220)U/L]及凋亡水平[(14.89±1.65)%比(39.71±1.94)%](均P<0.05)。结论PUM1在H/R诱导的HK-2细胞中上调,抑制PUM1的表达可以减少氧化应激及细胞凋亡水平,从而减轻H/R损伤。 展开更多

关键词 山松醇同源物1 人肾小管上皮细胞 缺氧/复氧 氧化应激 细胞凋亡

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人重组骨形态发生蛋白7通过下调半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D信号通路抑制高糖诱导的近曲小管上皮细胞的焦亡

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作者 魏凯悦 米焱 +3 位作者 王彩丽 吴雅茹 张丁予 高和平 《临床肾脏病杂志》 2023年第5期403-411,共9页

目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞... 目的 观察人重组骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)对高糖诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)的焦亡和炎症反应的作用。方法 体外培养高糖(high glucose,HG)刺激的HK-2细胞模拟糖尿病肾病模型。分为正常浓度葡萄糖对照组(Control)、高浓度葡萄糖组(HG)、Control+rhBMP-7组、HG+rhBMP-7组。采用免疫荧光方法检测HK-2细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SAM)、焦孔素D(gasderminD, GSDMD)蛋白和焦孔素E(gasderminE, GSDME)蛋白;TUNEL染色检测细胞死亡情况;蛋白质印迹法检测各组HK-2细胞中焦亡相关蛋白半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、半胱氨酸蛋白酶-4(caspase-4)、半胱氨酸蛋白酶-5(caspase-5)、 N-GSDMD和GAPDH的表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组HK-2细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果 与Control组相比,高糖组HK-2细胞Tunel染色的阳性率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.000 1),α-SMA蛋白和α-SMA mRNA表达量也显著增加(P<0.000 1),E-cadherin蛋白和Ecadherin mRNA表达量显著下降(P=0.000 6,P<0.000 1);HG组添加rhBMP-7后α-SMA蛋白和m RNA水平显著下降(P=0.011 7, P=0.002), E-cadherin蛋白和m RNA水平明显升高(P=0.001 5,P<0.000 1)。与对照组比较,HG组HK-2细胞GSDME/GSDMD蛋白的荧光信号明显增强。进而,HG组添加rhBMP-7后GSDME/GSDMD蛋白荧光信号显著减弱。同样,HG组HK-2细胞中焦亡相关蛋白caspase-1、caspase-4、caspase-5以及GSDMD的表达量显著高于对照组,差异明显(均P<0.001)。HG组添加rhBMP-7后焦亡相关蛋白的表达明显下降(分别P<0.001,P=0.002,P<0.001)。与对照组比较,HG组HK-2细胞培养上清液中IL-1β和IL-18蛋白浓度显著增加(均P<0.001)。进而导致rhBMP-7干预后HG组细胞上清液中IL-10和IL-1β蛋白� 展开更多

关键词 人肾皮质近曲小管上皮细胞 人重组骨形态发生蛋白-7 细胞焦亡 半胱氨酸蛋白酶-1/焦孔素D

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丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响 被引量：1

5

作者 蒋丽琼 卢国元 《临床肾脏病杂志》 2013年第7期325-328,共4页

目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响，初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养，将细胞接种在培养瓶中，待细胞融合至80％～90％时，更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0．1、0．5、1．0、... 目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响，初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养，将细胞接种在培养瓶中，待细胞融合至80％～90％时，更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0．1、0．5、1．0、2．0mg／L的培养基，培养24h后，收集人肾小管上皮细胞并提取mRNA，转化为CDNA，用实时定量荧光聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶mRNA的表达，并经凝胶成像行半定量分析。结果以空白对照人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA量为参照1，则0．1、0．5、1．0、2．0mg／L浓度丹参多酚酸盐共培养后的人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA依次为2．39、3．05、4．65和6．65，数据为重复2次实验的平均值。结论人肾小管上皮细胞可表达血管性血友病因子裂解酶mRNA，丹参多酚酸盐能增加人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的表达。丹参多酚酸盐对肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的调节可能会影响肾脏局部循环的出血、凝血状态，可能是丹参多酚酸盐的药理机制之一。 展开更多

关键词 血管性血友病因子裂解酶 丹参多酚酸盐 人近端肾小管上皮细胞

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丹参酮ⅡA对缺氧/复氧损伤肾小管上皮细胞的作用及机制研究 被引量：6

6

作者 杨紫依 陈刚 +4 位作者 朱芸霄 熊超玉 陈函 文爽 李毅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1427-1432,共6页

目的:探讨丹参酮磺酸钠ⅡA(TanshinoneⅡA,TSNⅡA)对缺氧/复氧(hypoxia/reperfusion,H/R)肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)氧化应激和凋亡的影响。方法:取传代培养的HK-2细胞建立H/R诱导细胞模型,实验分为正常对照组,单纯H/R组,H/R... 目的:探讨丹参酮磺酸钠ⅡA(TanshinoneⅡA,TSNⅡA)对缺氧/复氧(hypoxia/reperfusion,H/R)肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2)氧化应激和凋亡的影响。方法:取传代培养的HK-2细胞建立H/R诱导细胞模型,实验分为正常对照组,单纯H/R组,H/R+20μg/mL TSNⅡA组,H/R+10μg/mL TSNⅡA组,H/R+5μg/mL TSNⅡA组共5组。光镜下观察各组细胞的形态变化;CCK-8法测定H/R HK-2细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光显微镜观察细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:与正常对照组比较,单纯H/R组HK-2细胞增殖活性明显减少,为(43.6±10.1)%;中低浓度TSN可提高H/R HK-2细胞的增殖活性,10μg/mL浓度的TSNⅡA对H/R HK-2细胞的增殖具有最明显的保护作用,为(79.1±11.1)%,与单纯H/R组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。20μg/mL浓度TSNⅡA组相对于10μg/mL浓度组对细胞增殖有一定的抑制作用,为(51.0±10.4)%(P<0.05)。与H/R组比较,共聚焦荧光显微镜下TSNⅡA减少细胞内活性氧产生。流式细胞术检测发现各浓度TSNⅡA均对H/R HK-2细胞凋亡有一定抑制作用,其中以20μg/mL最为明显(P<0.05)。Western blot结果提示TSNⅡA作用H/R HK-2细胞后凋亡抑制蛋白Bcl-2上调,而促凋亡蛋白Bax下调。结论:TSNⅡA可能通过抑制氧化应激反应减少细胞凋亡,对H/R HK-2细胞产生保护作用。 展开更多

关键词 丹参酮磺酸钠ⅡA 肾小管上皮细胞 缺氧/复氧损伤 缺血 再灌注损伤

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氯化镉对离体培养人肾小管上皮细胞肾损伤分子1表达影响 被引量：4

7

作者 李芳林 张凝宇 +3 位作者 邓立华 司徒洁 王金林 李智民 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2016年第1期37-41,共5页

目的探讨氯化镉对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响。方法取对数生长期的HK-2细胞分为对照组和5个氯化镉处理组,分别以终浓度为0.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μmol/L(以磷酸盐缓冲液为溶剂)的氯化镉处理... 目的探讨氯化镉对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)肾损伤分子-1(KIM-1)表达的影响。方法取对数生长期的HK-2细胞分为对照组和5个氯化镉处理组,分别以终浓度为0.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0μmol/L(以磷酸盐缓冲液为溶剂)的氯化镉处理。培养24 h后进行细胞病理学观察,采用噻唑蓝实验检测HK-2细胞存活率,分别以逆转录聚合酶链反应法、免疫印迹法检测KIM-1的mRNA和蛋白表达水平。结果对照组和5.0、10.0μmol/L组HK-2细胞形态无明显变化;20.0和50.0μmol/L组HK-2细胞出现不同程度的肿胀或空泡样改变;100.0μmol/L组HK-2细胞大量死亡。20.0、50.0和100.0μmol/L组HK-2细胞存活率分别低于对照组和5.0、10.0μmol/L组(P<0.05);20.0、50.0和100.0μmol/L组细胞存活率两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。20.0和50.0μmol/L组KIM-1的mRNA和蛋白表达水平分别高于对照组和5.0、10.0μmol/L组(P<0.05);50.0μmol/L组细胞KIM-1的mRNA和蛋白表达水平均高于20.0μmol/L组(P<0.05)。结论一定水平范围的氯化镉可上调HK-2细胞KIM-1的mRNA和蛋白表达;KIM-1可能是镉致肾小管损伤效应的生物标志物之一。 展开更多

关键词 氯化镉 人肾小管上皮细胞 肾损伤分子-1 离体培养

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基于转录组学探讨水蛭素对HK-2细胞的影响机制

8

作者 何华梅 赵应学 +3 位作者 吴林秀 周维海 刘喜华 甄汉深 《华夏医学》 CAS 2024年第2期87-94,共8页

目的采用转录组学技术探讨水蛭素对人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)的影响及机制。方法利用CCK-8法检测水蛭素处理之后的HK-2细胞活力,通过转录组学的技术对溶媒对照组和水蛭素组进行转录组测序;通过RSEM的方法计算不同样品中的基... 目的采用转录组学技术探讨水蛭素对人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)的影响及机制。方法利用CCK-8法检测水蛭素处理之后的HK-2细胞活力,通过转录组学的技术对溶媒对照组和水蛭素组进行转录组测序;通过RSEM的方法计算不同样品中的基因表达水平,差异基因的筛选采用DEseq2方法,筛选标准为|log2FC值|≥1,P<0.05。随后根据差异表达的基因进行富集分析。结果水蛭素5 mg/mL下提高HK-2细胞活力效果最佳,转录组学研究结果表明,与正常HK-2细胞相比,水蛭素处理后的HK-2细胞有1723个基因发生差异表达。GO和KEGG分析结果表明,炎症通路的调控是水蛭素治疗高尿酸血症的主要作用机制。结论水蛭素作用于多条炎症信号通路,进而促进尿酸排泄,促进集体代谢和尿酸排出体外,起到降尿酸的作用,表明水蛭素在治疗高尿酸血症方面效果显著。 展开更多

关键词 水蛭素 人肾皮质近曲小管上皮细胞 转录组

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葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究

9

作者 胡亮 倪培华 +3 位作者 徐洪 赵涵芳 吴洁敏 钱关祥 《诊断学理论与实践》 2008年第1期63-66,共4页

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)内钙离子(Ca2+)浓度的动态变化及其信号转导途径。方法:在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(Hypericin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂... 目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)内钙离子(Ca2+)浓度的动态变化及其信号转导途径。方法:在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(Hypericin)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(Genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME),利用激光共聚焦显微镜(LSCM)观察HK-2细胞内[Ca2+]动态变化。结果:LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca2+]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10-4mmol/LHypericin、10-6mmol/LApopain、10-7mmol/LGenistein、10-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高。结论:葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca2+]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca2+]增高的信号传导过程。 展开更多

关键词 人肾皮质近曲小管上皮细胞 Ca离子浓度 信号传导

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葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡信号传导途径的研究

10

作者 胡亮 倪培华 +3 位作者 徐洪 赵涵芳 吴洁敏 钱关祥 《诊断学理论与实践》 2007年第6期525-529,共5页

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别... 目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别将不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(hypericin)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)抑制剂(apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME)作用于HK-2细胞30min,再加50mmol/L葡萄糖作用48h,后行FCM检测HK-2细胞凋亡情况。结果:50mmol/L葡萄糖作用48h可诱导HK-2细胞发生凋亡,并可通过透射电镜观察到凋亡小体,而FCM检测发现10-4mmol/Lhypericin、10-4mmol/L和10-6mmol/Lapopain、10-7mmol/Lgenistein、10-2mmol/LNAME可明显抑制葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡。结论:蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)都参与了葡萄糖诱导HK-2细胞凋亡的信号传导过程。 展开更多

关键词 人肾皮质近曲小管上皮细胞 细胞凋亡 信号传导

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PM_(2.5)对HK-2细胞氧化损伤和凋亡的影响

11

作者 李柏茹 秦双建 +6 位作者 关岚 李闰冰 蔡颖 蒲桔宁 曾明 肖芳 徐新云 《癌变．畸变．突变》 CAS 2021年第5期360-364,共5页

目的:探讨深圳和太原市PM_(2.5)对人肾上皮细胞(HK-2)氧化损伤和凋亡的影响。方法:用中流量采样器分别采集太原某大学校园和深圳市疾病预防控制中心楼顶空气,将吸附有PM_(2.5)的滤膜洗脱后制备PM_(2.5)混悬液。设置阴性对照组、50μg/m... 目的:探讨深圳和太原市PM_(2.5)对人肾上皮细胞(HK-2)氧化损伤和凋亡的影响。方法:用中流量采样器分别采集太原某大学校园和深圳市疾病预防控制中心楼顶空气,将吸附有PM_(2.5)的滤膜洗脱后制备PM_(2.5)混悬液。设置阴性对照组、50μg/mL深圳PM_(2.5)样品组、50μg/mL太原PM_(2.5)样品组和10μmol/L Cr6+阳性对照组,分别处理HK-2细胞24 h,测定4组细胞氧化损伤指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的变化,并应用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:与阴性对照组相比,深圳PM_(2.5)样品组、太原PM_(2.5)样品组和阳性对照组中MDA含量分别升高8.16%、34.51%和72.23%;SOD活性分别降低7.49%、19.67%和29.55%;GSH含量分别降低10.43%、16.39%和37.43%。太原PM_(2.5)样品组与阴性对照组的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。GSH-PX活性分别降低42.70%、61.62%和60.98%,细胞凋亡率分别升高197.25%、301.22%和399.08%,上述3组与阴性对照组间的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:深圳和太原市PM_(2.5)均可引起HK-2细胞发生氧化损伤和细胞凋亡率增加,且太原市PM_(2.5)的作用更为明显。 展开更多

关键词 大气细颗粒物 人肾上皮细胞 氧化损伤 细胞凋亡

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线粒体未折叠蛋白反应在棕榈酸诱导肾小管上皮细胞脂质聚集中的作用

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作者 温睿智 杜晓刚 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期419-427,共9页

目的探讨线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,UPR^(mt))对肾小管上皮细胞(human kidney 2,HK-2)脂代谢的影响。方法采用棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导HK-2细胞内脂质聚集,分别予siRNA抑制UPR^(mt)或巴多索隆... 目的探讨线粒体未折叠蛋白反应(mitochondrial unfolded protein reaction,UPR^(mt))对肾小管上皮细胞(human kidney 2,HK-2)脂代谢的影响。方法采用棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导HK-2细胞内脂质聚集,分别予siRNA抑制UPR^(mt)或巴多索隆(the 2-cyano-3,12-dioxooleana-1,9-dien-28-oic acid,CDDO)增强UPR^(mt)。油红染色观察细胞内脂质聚集情况,线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP),Mito-SOX测定线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,Western blotting检测HSP60、LONP1、CLPP、ACOX1、PPARα、PGC1α、CPT1α蛋白表达。结果PA诱导HK-2细胞脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多及UPR^(mt)关键蛋白HSP60、LONP1表达降低;抑制UPR^(mt)可加剧PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多,HSP60、LONP1表达进一步降低;增强UPR^(mt)可缓解PA导致的脂质聚集、MMP降低、ROS产生增多以及HSP60、LONP1表达降低。结论PA诱导的HK-2细胞脂质聚集可能与线粒体功能障碍有关,UPR^(mt)在该过程中对HK-2细胞具有保护作用。 展开更多

关键词 线粒体未折叠蛋白反应(UPR^(mt)) 棕榈酸(PA) 肾小管上皮细胞(HK-2) 脂质聚集 活性氧(ROS)

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