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人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化
被引量：
1
1
作者
李海
黎晓天
+1 位作者
彭宇
吴文言
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期39-42,47,共5页
目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extensio...
目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆入质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化。结果经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的目的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在。蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N-端序列的单克隆抗体发生特异性结合。通过Ni2+亲和层析,目的蛋白的纯度可达95%以上。结论实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础。
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关键词
人趋化因子受体
ccr
5
重叠延伸拼接
原核表达
纯化
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职称材料
外周血CD4^+T淋巴细胞表面CCR5受体表达水平与HIV感染关系的研究
被引量：
1
2
作者
石英
刘宁
+4 位作者
计云霞
魏征
张彤
陈德喜
娄金丽
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第6期711-714,共4页
目的研究人外周血中CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体5(chemokine receptor5,CCR5)的表达,比较健康人群、HIV急性期患者和HIV慢性期患者之间CCR5表达的差异,明确CCR5表达在正常人和HIV感染者之间的差异,以及CCR5表达与HIV病情进展的关系,...
目的研究人外周血中CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体5(chemokine receptor5,CCR5)的表达,比较健康人群、HIV急性期患者和HIV慢性期患者之间CCR5表达的差异,明确CCR5表达在正常人和HIV感染者之间的差异,以及CCR5表达与HIV病情进展的关系,以明确CCR5在HIV患者外周血CD4+T淋巴细胞表面表达的意义,并为CCR5拮抗剂在HIV临床治疗中的作用提供临床标本依据。方法收集来自首都医科大学附属北京佑安医院的260例HIV感染者和60例健康人的外周血标本,其中急性期感染者98例、慢性期感染者162例,利用淋巴细胞分离液分离外周血中PBMC,在显微镜下进行淋巴细胞计数,应用直接荧光标记的单克隆抗体对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表面CD4分子及CCR5进行染色,利用流式细胞术分析CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达;对流式细胞术所得检测结果进行统计学分析。结果检测结果表明:(1)HIV急性期患者和HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于正常人,差异有统计学意义(P<0.01);(2)HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于HIV急性期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论此项研究表明外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的差异与HIV的易感性、疾病进展情况密切相关。外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的检测,将对HIV患者的早期诊断、治疗和判断预后具有一定的临床意义。
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关键词
人类免疫缺陷病毒
ccr
5
急性感染期
慢性期
表达
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职称材料
题名
人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化
被引量：
1
1
作者
李海
黎晓天
彭宇
吴文言
机构
中山大学生命科学院生物医药中心
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第1期39-42,47,共5页
基金
广东省科技攻关项目(2005B10401046
2006B35501002)
广州市科技攻关项目(2006Z3-E4101)
文摘
目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆入质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化。结果经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的目的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在。蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N-端序列的单克隆抗体发生特异性结合。通过Ni2+亲和层析,目的蛋白的纯度可达95%以上。结论实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础。
关键词
人趋化因子受体
ccr
5
重叠延伸拼接
原核表达
纯化
Keywords
human
chemokine
receptor
ccr
5
splicing
by
overlapping
extention
prokaryotic
expression
purification
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
外周血CD4^+T淋巴细胞表面CCR5受体表达水平与HIV感染关系的研究
被引量：
1
2
作者
石英
刘宁
计云霞
魏征
张彤
陈德喜
娄金丽
机构
首都医科大学附属北京佑安医院性病艾滋病实验室
首都医科大学附属北京佑安医院肝炎研究所
出处
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010年第6期711-714,共4页
基金
北京市自然科学基金(7092045)
北京市科技计划(D09050703590901)
北京市教育委员会(10920136101)~~
文摘
目的研究人外周血中CD4+T淋巴细胞表面趋化因子受体5(chemokine receptor5,CCR5)的表达,比较健康人群、HIV急性期患者和HIV慢性期患者之间CCR5表达的差异,明确CCR5表达在正常人和HIV感染者之间的差异,以及CCR5表达与HIV病情进展的关系,以明确CCR5在HIV患者外周血CD4+T淋巴细胞表面表达的意义,并为CCR5拮抗剂在HIV临床治疗中的作用提供临床标本依据。方法收集来自首都医科大学附属北京佑安医院的260例HIV感染者和60例健康人的外周血标本,其中急性期感染者98例、慢性期感染者162例,利用淋巴细胞分离液分离外周血中PBMC,在显微镜下进行淋巴细胞计数,应用直接荧光标记的单克隆抗体对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)表面CD4分子及CCR5进行染色,利用流式细胞术分析CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达;对流式细胞术所得检测结果进行统计学分析。结果检测结果表明:(1)HIV急性期患者和HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于正常人,差异有统计学意义(P<0.01);(2)HIV慢性期患者外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5的表达显著高于HIV急性期患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论此项研究表明外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的差异与HIV的易感性、疾病进展情况密切相关。外周血中CD4+T淋巴细胞表面CCR5表达的检测,将对HIV患者的早期诊断、治疗和判断预后具有一定的临床意义。
关键词
人类免疫缺陷病毒
ccr
5
急性感染期
慢性期
表达
Keywords
human
immunodeficiency
virus
CD4＋T
cell
surface
chemokine
receptor
5
（
ccr
5
）
acute
infection
chronic
phase
expression
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化
李海
黎晓天
彭宇
吴文言
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
下载PDF
职称材料
2
外周血CD4^+T淋巴细胞表面CCR5受体表达水平与HIV感染关系的研究
石英
刘宁
计云霞
魏征
张彤
陈德喜
娄金丽
《首都医科大学学报》
CAS
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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