红景天苷抑制动脉平滑肌细胞增殖、迁移、分泌表型的分子机制研究

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作者 张永杰 闫志刚 +2 位作者 林飞 刘慧兵 赵国安 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期3356-3364,共9页

探讨红景天苷(salidroside, SAL)抗血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)表型转化,并对其药理机制进行探析。应用乳酸脱氢酶释放实验筛... 探讨红景天苷(salidroside, SAL)抗血小板源性生长因子-BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导人主动脉平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells, HASMC)表型转化,并对其药理机制进行探析。应用乳酸脱氢酶释放实验筛选SAL的安全有效浓度。应用PDGF-BB诱导HASMC建立细胞表型转化体外模型。分为对照组、模型组、SAL组。应用CCK-8法检测细胞增殖率,Transwell检测细胞迁移,荧光标记的鬼笔环肽对F-肌动蛋白(fibrous actin, F-actin)染色观察细胞骨架结构,Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、迁移相关蛋白基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP-9)、纤维粘连蛋白(Fibronectin)、表型转换标志物α-肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin, OPN)。由结果可知造模使HASMC增殖明显、迁移增加并促使HASMC由收缩表型转变成分泌表型,使其细胞骨架结构排列紊乱。加入SAL后HASMC增殖、迁移能力减弱,“收缩表型标志物”α-SMA表达增加,“分泌表型标志物”OPN表达减少、细胞骨架结构排列紊乱改善。机制研究细胞信号相关通路Akt、mTOR,以及Akt/mTOR信号通路上下游相关蛋白磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue, PTEN)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor β,PDGFR-β)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达。模型组HASMC信号通路Akt、mTOR蛋白磷酸增加,PTEN、HIF-1α、PDGFR-β相对表达量显著增高。SAL组磷酸化Akt、mTOR表达减少,PTEN、PDGFR-β、HIF-1α蛋白的表达降低。综上所述,SAL对PDGF-BB诱导的HASMC具有保护作用,可能与HASMC的PDGFR-β/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路相关。 展开更多

关键词 红景天苷 血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB) 人主动脉血管平滑肌细胞 细胞表型转化 支架内再狭窄

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油酸调节人血管平滑肌细胞TLR4的增殖活性及炎性因子的表达 被引量：6

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作者 杨海静 陈卫 +3 位作者 权金星 李伟华 刘静 邱明才 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第1期44-48,共5页

目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进... 目的探讨油酸对人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子表达的调节作用。方法 MTT法检测细胞增殖活性;实时荧光定量PCR法检测TLR4及炎性因子mRNA的表达;Western blot法检测细胞TLR4蛋白表达,ELISA法检测炎性因子蛋白含量。结果油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞增殖活性,增加油酸浓度,抑制细胞增殖。油酸上调TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1 mRNA表达最大幅度为6.5、7.4、7.4和7.1倍。IL-6、IL-8和MCP-1蛋白表达最大上调幅度为2.16、1.93和2.06倍。200μmol/L组TLR4蛋白表达的吸光度值为(1.70±0.62),与对照组(0.29±0.22)比较P<0.05。LPS组TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1的表达明显增加(P<0.05)。结论油酸促进人主动脉血管平滑肌细胞TLR4及炎性因子mRNA及蛋白表达。 展开更多

关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 油酸 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达

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氧化型低密度脂蛋白对人血管平滑肌细胞透明质酸表达的影响及机制 被引量：6

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作者 梁雅林 张慧 宁雕 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2019年第6期489-494,共6页

目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人主动脉血管平滑肌细胞透明质酸(HA)合成的影响,并初步探究其分子机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞T/GHAVSMC,使用不同浓度(10、25、50、75、100mg/L)ox-LDL对T/GHAVSMC细胞进行干预,使... 目的观察氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人主动脉血管平滑肌细胞透明质酸(HA)合成的影响,并初步探究其分子机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞T/GHAVSMC,使用不同浓度(10、25、50、75、100mg/L)ox-LDL对T/GHAVSMC细胞进行干预,使用CCK-8法检测细胞存活率,并进行分组分析。采用浓度为25和50mg/L的ox-LDL干预T/GHAVSMC细胞48h,并设置天然LDL(native-LDL,N-LDL)组(50mg/L的N-LDL)和对照组,使用HPLC法测定HA含量,使用实时定量PCR检测透明质酸合成酶2(HAS2)和透明质酸合成酶3(HAS3)的mRNA表达,使用Westernblot法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP-1)、氧化脂蛋白的清道夫受体(SR-PSOX)以及脂肪酸转位酶(CD36)的表达。结果低于100mg/L的ox-LDL对T/GHAVSMC细胞无明显细胞毒性。25mg/L和50mg/Lox-LDL组HA含量、HAS2和HAS3的mRNA表达量明显高于N-LDL组和对照组(P<0.05),N-LDL组与对照组组间差异无显著性(P>0.05)。25mg/L和50mg/Lox-LDL组LOX-1表达明显高于N-LDL组和对照组(P<0.05),而LRP-1、SR-PSOX和CD36表达无明显变化(P>0.05)。结论ox-LDL能够诱导人主动脉平滑肌细胞中HA的合成,其机制可能与结合LOX-1有关。 展开更多

关键词 氧化型低密度脂蛋白 人主动脉血管平滑肌细胞 透明质酸 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1

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果蝇样受体4介导游离脂肪酸调节人血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白-1的表达 被引量：4

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作者 高啸波 权金星 +4 位作者 杨海静 陈卫 李伟华 李永红 刘静 《中华糖尿病杂志》 CAS CSCD 2013年第2期108-113,共6页

目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h，采用实时荧光定量... 目的探讨软脂酸对人主动脉血管平滑肌细胞（HA—VSMC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因表达的调节及果蝇样受体4（TLR4）信号通路的作用。方法采用不同剂量的软脂酸（100、200、400μmol/L）处理HA—VSMC6、12、24h，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测细胞MCP．1mRNA表达，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测MCP-1蛋白表达，观察软脂酸调节MCP-1表达的剂量依赖关系和时间效应；采用蛋白激酶C（PKC）抑制剂白屈菜红碱、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）抑制剂wortmannin、神经酰胺抑制剂myriocin和核因子KB（NF—KB）抑制剂parthenolide分别处理细胞30min，再加入软脂酸（400μmol/L）处理细胞6h后，实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA的表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平，研究软脂酸调节MCP-1表达依赖的信号通路；构建TLR4短发夹RNA（shRNA）腺病毒pGSadeno-TLR4并感染HA—VSMC沉默TLR4基因表达，实验同时设空白对照组（PBS缓冲液）和对照病毒（pGSadeno-GFP）组。细胞感染96h后更换培养基，再加入软脂酸（400μmoL／L）处理细胞6h，采用实时荧光定量PCR检测MCP-1mRNA表达水平，ELISA检测MCP-1的蛋白表达水平。提取细胞核蛋白，采用ELISA检测NF—KBp65亚基活性，观察TLR4／NF-KB通路在软脂酸调节HA-VSMCMCP-1基因表达中的作用。组间均数比较采用单因素方差分析。结果采用软脂酸处理细胞6h后，对照组及100、200和400μmoVL软脂酸组MCP-1mRNA表达分别为1．00±0．02、3．30±2．84、8．21±4．31和11．25±2．73（F=7．57，P〈0．05）；MCP-1蛋白表达分别为（127±10）、（147±10）、（163±18）和（194±14）ng／L（F=7．81，P〈0．05）。软脂酸可促进HA-VSMCMCP-1mRNA和蛋白表达且具有明显的剂量依赖关系。细胞培养12h和24h后，随着软脂酸浓度的增加，MCP-1mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增加趋势，但时间效应则不明显。采用不同� 展开更多

关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 果蝇样受体4 单核细胞趋化蛋白-1

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中介素1-53对高磷诱导人主动脉血管平滑肌细胞ERS-线粒体凋亡通路及钙化的影响

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作者 刘鹏 曹露 +2 位作者 徐一君 陈志强 温文 《现代生物医学进展》 CAS 2023年第12期2240-2246,共7页

目的:探讨中介素1-53(IMD1-53)对高磷诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)内质网应激(ERS)-线粒体凋亡通路及钙化的影响。方法:体外培养HA-VSMC,MTT法检测IMD1-53对HA-VSMC的毒性作用。HA-VSMC中添加10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐进行高磷诱... 目的:探讨中介素1-53(IMD1-53)对高磷诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)内质网应激(ERS)-线粒体凋亡通路及钙化的影响。方法:体外培养HA-VSMC,MTT法检测IMD1-53对HA-VSMC的毒性作用。HA-VSMC中添加10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐进行高磷诱导,使用0.1 nmol/L或0.5 nmol/L IMD1-53干预,并在0.5 nmol/L IMD1-53干预基础上添加ERS诱导剂衣霉素(TM),流式细胞仪检测HA-VSMC凋亡率,茜素红S染色观察HA-VSMC中钙盐沉积,酞络合酮比色法测定HA-VSMC中钙含量,分光光度法检测HA-VSMC中碱性磷酸酶(ALP)活性,蛋白质印迹法(Western blot)检测HA-VSMC中钙化以及ERS--线粒体凋亡通路相关蛋白表达。结果:IMD1-53浓度≤2.5 nmol/L时,对HA-VSMC细胞活力无明显影响(P>0.05),故选择对细胞无明显毒副作用的低、高2个剂量(0.1、0.5 nmol/L)进行后续实验。高磷诱导后,HA-VSMC凋亡率、钙含量、ALP活性以及Runt相关转录因子-2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、感受器活化转录因子6(ATF6)、p-需肌醇酶1(IRE1)/IRE1蛋白表达水平升高(P<0.05),橘红色结节明显增多,骨保护素(OPG)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白表达水平降低(P<0.05)。0.1 nmol/L和0.5 nmol/L IMD1-53干预处理均可降低HA-VSMC凋亡率、钙含量、ALP活性以及Runx2、OPN、Bax、cleaved caspase-3、GRP78、CHOP、ATF6、p-IRE1/IRE1蛋白表达水平(P<0.05),明显减少橘红色结节,升高OPG、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05)。ERS诱导剂TM可升高HA-VSMC中GRP78、CHOP、ATF6、p-IRE1/IRE1蛋白表达水平,并减弱IMD1-53抑制高磷诱导的HA-VSMC ERS、凋亡和钙化的作用。结论:IMD1-53可减轻高磷诱导的HA-VSMC钙化,其作用机制可能与抑制ERS-线粒体凋亡通路激活,减少细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 中介素1-53 人主动脉血管平滑肌细胞 内质网应激-线粒体凋亡通路 钙化

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新型大豆苷元苯磺酸酯的药学性质与细胞吸收利用研究 被引量：3

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作者 干丽君 黄华南 +2 位作者 王晓波 胡华南 彭游 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1387-1395,共9页

目的:考察新型大豆苷元苯磺酸酯衍生物(D3、D4)的药学性质和细胞吸收变化,分析其构性关系。方法:利用药动团变换原理对大豆苷元(DA1)进行结构修饰,采用微波法高产率合成DA1苯磺酸酯衍生物,采用HPLC对D3、D4的药学性质进行考察,并采用软... 目的:考察新型大豆苷元苯磺酸酯衍生物(D3、D4)的药学性质和细胞吸收变化,分析其构性关系。方法:利用药动团变换原理对大豆苷元(DA1)进行结构修饰,采用微波法高产率合成DA1苯磺酸酯衍生物,采用HPLC对D3、D4的药学性质进行考察,并采用软件ChemAxon16.1.18对D3、D4的部分药学性质进行计算,利用HPLC考察DA1及衍生物D3、D4在人主动脉血管平滑肌细胞(HAVSMCs)中的吸收利用率。结果:D3、D4相对DA1在乙酸乙酯中的溶解度分别提高4.73×10^5和1.09×10^5倍,表观脂水分配系数(lgP)分别为2.73±0.45和2.19±0.12,D3的水溶性相对于DA1也得以提高,D3在HAVSMCs中的吸收率达74.3%,细胞最大吸收率:D3>DA1>D4。结论:构性关系研究表明,药物的吸收利用与其理化性质密切相关,适宜的脂溶性和水溶性可使药物的细胞吸收利用得以提高。 展开更多

关键词 大豆苷元苯磺酸酯 表观脂水分配系数 主动脉血管平滑肌细胞 细胞吸收 构性关系

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黄连素对人主动脉血管平滑肌细胞钙化的作用及其机制 被引量：2

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作者 张鑫鹏 曾存良 +5 位作者 孙晓磊 何虎强 胥雄飞 曾宏 施森 刘勇 《山东医药》 CAS 2018年第33期1-4,共4页

目的探讨黄连素影响人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化的作用及机制。方法利用糖基化终末产物(AGEs)建立HASMCs钙化模型,予以不同浓度(10、25、50μmol/L)的黄连素干预。用冯库萨、茜素红染色观察细胞钙化程度,采用细胞内钙含量试剂... 目的探讨黄连素影响人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)钙化的作用及机制。方法利用糖基化终末产物(AGEs)建立HASMCs钙化模型,予以不同浓度(10、25、50μmol/L)的黄连素干预。用冯库萨、茜素红染色观察细胞钙化程度,采用细胞内钙含量试剂盒测定钙含量,Western blotting检测各组细胞骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)及骨形成蛋白2(BMP2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38蛋白表达。结果与对照组比较,AGEs组钙化程度、细胞内钙含量升高(P均<0.05),不同浓度黄连素干预HASMCs钙含量呈浓度依赖性减少(P均<0.05);AGEs组OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量较对照组明显增高(P均<0.05),不同浓度黄连素呈浓度依赖性地减少HASMCs的OPG、BMP2、OPN、ERK、p38蛋白表达量(P均<0.05)。结论黄连素可抑制AGEs诱导的HASMCs钙化,其机制可能与下调ERK、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路导致OPG、OPN、BMP2表达减少有关。 展开更多

关键词 黄连素 人主动脉血管平滑肌细胞 血管钙化 糖基化终末产物 丝裂原活化蛋白激酶通路

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LINC00205靶向miR-514a-3p/NF-κB对血管平滑肌细胞生物学功能的作用 被引量：2

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作者 张闻伯 高新梅 +2 位作者 王喆 和传波 赵强 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第8期807-814,共8页

目的LINC00205是否通过调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与动脉粥样硬化发生过程尚未清楚。文章旨在探讨LINC00205对血管紧张素II(AngII)诱导的血管平滑肌细胞(HA-VSMC)增殖、凋亡、迁移的影响及其对miR-514a-3p/NF-κB通路的调控作用。... 目的LINC00205是否通过调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与动脉粥样硬化发生过程尚未清楚。文章旨在探讨LINC00205对血管紧张素II(AngII)诱导的血管平滑肌细胞(HA-VSMC)增殖、凋亡、迁移的影响及其对miR-514a-3p/NF-κB通路的调控作用。方法采用AngII诱导的HA-VSMC细胞建立动脉粥样硬化模型为AngII组。将正常培养的细胞作为正常组,将si-con、si-LINC00205、miR-con、miR-514a-3p mimics、anti-miR-con、anti-miR-514a-3p及si-LINC00205与anti-miR-con、si-LINC00205、anti-miR-514a-3p转染至AngII诱导的HA-VSMC细胞,分别为si-con组、si-LINC00205组、miR-con组、miR-514a-3p组、anti-miR-con组、anti-miR-514a-3p组、si-LINC00205+anti-miR-con组、si-LINC00205+anti-miR-514a-3p组。采用qRT-PCR法检测LINC00205、miR-514a-3p的表达量;采用MTT实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测LINC00205与miR-514a-3p的靶向关系;Western blot法检测CyclinD1、MMP2、MMP9、Cleaved-caspase-3、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα蛋白表达量。将20只大鼠随机分为对照组(普通喂养)及AS组(蛋氨酸喂养,建立AS模型),检测颈动脉LINC00205、miR-514a-3p、p-p65、p-IкBα、p65、IкBα各蛋白表达。结果与正常组凋亡率比较,AngII组明显降低(P<0.05);与si-con组凋亡率比较,si-LINC00205组明显升高(P<0.05)。AngII组HA-VSMC细胞迁移数较正常组明显升高[(153±14)vs(67±6),P<0.05],si-LINC00205组较si-con组明显降低[(72±7)vs(158±15),P<0.05]。与正常组比较,AngII组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显升高(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显降低(P<0.05);与si-con组比较,si-LINC00205组CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平明显降低(P<0.05),Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05)。miR-514a-3p组A值、迁移数、CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平较miR-con组明显降低(P<0.05),凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白水平明显升高(P<0.05);anti-miR- 展开更多

关键词 LINC00205 miR-514a-3p NF-ΚB 血管紧张素II 血管平滑肌细胞

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丹酚酸B对血小板源性生长因子-BB诱导的人主动脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用研究 被引量：1

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作者 曹正旺 喻田甜 +1 位作者 刘坤 郑山根 《华南国防医学杂志》 CAS 2022年第12期954-958,1005,共6页

目的探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cells,HAVSMCs)增殖和迁移的影响及可能机制。方... 目的探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对血小板源性生长因子BB(platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(human aortic vascular smooth muscle cells,HAVSMCs)增殖和迁移的影响及可能机制。方法本研究采用20 ng/ml PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞建立细胞增殖模型,将传代培养的HAVSMCs随机分为4组:对照组、Sal B组、PDGF-BB组、PDGF-BB+Sal B组(提前1 h加入Sal B),通过不同浓度的Sal B(12.5、25、50和100μmol/L)进行干预。采取细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性和增殖能力,筛选Sal B抑制血管平滑肌细胞增殖的最适浓度,通过划痕试验和Transwell迁移实验评估Sal B对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响。Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)表达及磷酸化水平。结果与对照组比较,不同剂量Sal B处理后细胞活力差异无统计学意义(P>0.05)。与PDGF-BB组相比,50μmol/L Sal B能显著抑制PDGF-BB刺激血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力,显著下调细胞周期相关蛋白PCNA、cyclin D1和CDK2蛋白表达,显著降低MMP-2、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylatedprotein kinase B,p-Akt)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(phosphorylatedextracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)的表达水平(P<0.05),对PDGF-BB诱导的MMP-9蛋白表达则无明显抑制作用(P>0.05)。结论Sal B可显著抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移,其机制可能与下调MMP-2蛋白表达及p-Akt、p-ERK1/2水平有关。 展开更多

关键词 丹酚酸B 血小板源性生长因子-BB 人主动脉血管平滑肌细胞 增殖 迁移

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TLR4通路在软脂酸诱导人血管平滑肌细胞IL-6基因表达中的作用 被引量：1

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作者 权金星 高啸波 +4 位作者 杨海静 陈卫 李伟华 李永红 刘静 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期75-78,共4页

构建Toll样受体4（TLR4）shRNA腺病毒表达载体（pGSadeno—TLR4）并感染人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMC），采用软脂酸和不同的信号通路阻断剂处理HA—VSMC，以实时定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）mRNA的表达，酶联免疫吸附法（ELISA... 构建Toll样受体4（TLR4）shRNA腺病毒表达载体（pGSadeno—TLR4）并感染人主动脉血管平滑肌细胞（HA-VSMC），采用软脂酸和不同的信号通路阻断剂处理HA—VSMC，以实时定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）mRNA的表达，酶联免疫吸附法（ELISA）检测NF—KBp65活性和IL-6的蛋白水平。结果显示，软脂酸增加HA—VSMCIL-6mRNA和蛋白水平，且具有明显的剂量依赖关系，软脂酸（400μmol／L）处理6h作用最明显。IL-6mRNA的表达水平为对照组的10．43倍（P〈0．01）。IL-6蛋白水平在软脂酸作用24h时达到峰值，约为对照组的2．18倍（P〈0．01）。NF．KB阻断剂parthenolide下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为65％和59％（均P〈0．01），蛋白激酶C（PKC）阻断剂白屈菜红碱下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为24％和28％（均P〈0．05）。而细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059和磷酸肌醇3激酶抑制剂wortmannin对软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达均无明显作用（均P〉0．05）。pGSadeno．TLR4下调软脂酸诱导的IL-6mRNA和蛋白表达分别为72％和75％（均P〈0．01），下调软脂酸刺激的NF—KBv65活性约62％（P〈0．01）。这些结果提示TLR-4／NF—KB和PKC信号通路介导了软脂酸诱导的人主动脉血管平滑肌细胞IL-6基因表达。 展开更多

关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 软脂酸 TOLL样受体4 白细胞介素6

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miR-145与MyoCD调控VSMCs脂质蓄积的研究

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作者 龚勇珍 贺卫和 +2 位作者 钱荣华 谭峰 黄小龙 《吉林医学》 CAS 2022年第7期1741-1744,共4页

目的:研究miR-145与心肌素(MyoCD)对人主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)脂质蓄积的影响。方法:ox-LDL孵育细胞,油红O染色观察细胞成脂,ELISA检测细胞内胆固醇含量;miR-145 siRNA及MyoCD过表达观察miR-145和MyoCD对血管平滑肌细胞脂质蓄积的... 目的:研究miR-145与心肌素(MyoCD)对人主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)脂质蓄积的影响。方法:ox-LDL孵育细胞,油红O染色观察细胞成脂,ELISA检测细胞内胆固醇含量;miR-145 siRNA及MyoCD过表达观察miR-145和MyoCD对血管平滑肌细胞脂质蓄积的影响,荧光定量PCR检测三磷酸腺苷结合盒转运体(ABCA)1的表达。结果:与对照组相比,MyoCD过表达组MyoCD蛋白及mRNA表达量均明显升高(P<0.05),miR-145 inhibitor组miR-145表达量下调(P<0.05)。ELISA检测结果表明,与空载+miR-145 inhibitor组相比,miR-145通过MyoCD过表达降低胆固醇含量。油红O染色结果显示,与空载组相比,抑制miR-145以及MyoCD+miR-145 inhibitor组均可使细胞内脂滴数量较少。PCR结果显示,抑制miR-145对ABCA1水平无显著影响。结论:miR-145低表达和MyoCD过表达可抑制VSMC细胞脂质蓄积。 展开更多

关键词 心肌素 MIR-145 人主动脉血管平滑肌细胞 脂质蓄积

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体外缺血缺氧条件下人主动脉平滑肌细胞中1-磷酸鞘胺醇的表达变化 被引量：1

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作者 汤华 陈少军 +1 位作者 赵东刚 闫俊 《神经损伤与功能重建》 2020年第3期129-133,共5页

目的:探讨缺血缺氧条件下1-磷酸鞘胺醇(S1P)在人主动脉血管平滑肌细胞(T/G HA-VSMC)收缩中的作用机制。方法:将传代培养的T/G HA-VSMC分为正常对照组和缺血缺氧组。缺血缺氧组采用低氧条件培养T/G HA-VSMC细胞来模拟蛛网膜下腔出血(SAH... 目的:探讨缺血缺氧条件下1-磷酸鞘胺醇(S1P)在人主动脉血管平滑肌细胞(T/G HA-VSMC)收缩中的作用机制。方法:将传代培养的T/G HA-VSMC分为正常对照组和缺血缺氧组。缺血缺氧组采用低氧条件培养T/G HA-VSMC细胞来模拟蛛网膜下腔出血(SAH)所致的缺血缺氧环境;采用QT-PCR检测人鞘胺醇激酶1(SphK1)基因的m RNA表达;Western-blot法检测人SphK1基因的蛋白表达;ELISA法测定T/G HAVSMC细胞上清液和细胞内S1P浓度;慢病毒载体shRNA介导的T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达沉默;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测T/G HA-VSMC细胞内Ca2+浓度。结果:与正常对照组相比,缺血缺氧条件下人T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,且缺血缺氧组细胞培养液和细胞裂解液中S1P浓度均显著升高。缺血缺氧可诱导T/G HA-VSMC细胞内Ca2+离子浓度增加,并且外源性S1P显著上调T/G HA-VSMC细胞内Ca2+浓度;与正常对照组相比,shRNA干扰技术沉默SphK1基因表达和SphK1特异性抑制剂二甲基鞘胺醇(DMS)均显著抑制低氧诱导的T/G HA-VSMC细胞内S1P和Ca2+浓度上调。结论:缺血缺氧可导致T/G HA-VSMC细胞内SphK1基因表达上调,进而促进S1P的合成代谢,而高浓度的S1P通过某种机制导致细胞内Ca2+浓度水平增加导致血管收缩。 展开更多

关键词 1-磷酸鞘胺醇 缺氧 人主动脉平滑肌细胞

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lncRNA OSER1-AS1和miR-373-3p在动脉粥样硬化患者中的表达及对AngⅡ诱导血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

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作者 黄岚 张洪波 庄红 《解放军医药杂志》 CAS 2022年第8期1-6,共6页

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(OSER1-AS1)和miR-373-3p在动脉粥样硬化(AS)患者血清、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)中的表达及其对AngⅡ诱导HASMCs增殖与迁移的影响。方法... 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(OSER1-AS1)和miR-373-3p在动脉粥样硬化(AS)患者血清、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)中的表达及其对AngⅡ诱导HASMCs增殖与迁移的影响。方法以41例体检健康者为对照,采用RT-qPCR法测定41例AS血清中OSER1-AS1、miR-373-3p表达。体外培养HASMCs,经1×10^(-7)mol/L AngⅡ干预24 h后,采用RT-qPCR法测定细胞中OSER1-AS1、miR-373-3p表达。分别转染OSER1-AS1小干扰RNA、miR-373-3p模拟物或共转染OSER1-AS1小干扰RNA与miR-373-3p抑制剂至HASMCs,再用1×10^(-7)mol/L AngⅡ干预24 h,采用CCK-8法、Transwell小室实验分别测定细胞增殖活性和迁移情况,采用Western blot法测定增殖、迁移相关蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因实验测定OSER1-AS1与miR-373-3p的靶向关系。结果AS患者血清中OSER1-AS1表达较体检健康者升高,miR-373-3p表达较体检健康者降低(P<0.05)。HASMCs经AngⅡ干预后,OSER1-AS1表达升高,miR-373-3p表达降低(P<0.05)。干扰OSER1-AS1或miR-373-3p过表达均可降低AngⅡ诱导HASMCs的增殖活性、迁移数及Ki-67、基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9蛋白表达。OSER1-AS1靶向结合并负调控miR-373-3p;下调miR-373-3p可干扰OSER1-AS1对AngⅡ诱导HASMCs增殖、迁移的影响。结论OSER1-AS1在AS患者血清、AngⅡ诱导的HASMCs中表达上调,miR-373-3p表达下调;OSER1-AS1可能通过靶向下调miR-373-3p促进AngⅡ诱导HASMCs的增殖和迁移。 展开更多

关键词 动脉粥样硬化 人主动脉血管平滑肌细胞 OSER1-AS1 miR-373-3p 细胞增殖 细胞运动

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myocardin通过激活miR-93-5p促进人主动脉血管平滑肌细胞分化 被引量：1

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作者 史丹阳 刘美玲 +3 位作者 刘翔 张建 张同存 王楠 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第2期19-24,共6页

myocardin是促进平滑肌细胞分化的重要转录因子.微小RNA(microRNAs,miRNA)在近年来已经证实参与多种生物学过程,包括平滑肌的表型转化.然而在平滑肌分化过程中myocardin与哪些microRNA具有相关性仍有待于阐明.通过将外源性myocardin转... myocardin是促进平滑肌细胞分化的重要转录因子.微小RNA(microRNAs,miRNA)在近年来已经证实参与多种生物学过程,包括平滑肌的表型转化.然而在平滑肌分化过程中myocardin与哪些microRNA具有相关性仍有待于阐明.通过将外源性myocardin转入人主动脉血管平滑肌细胞(human aortal vascular smooth muscle cells,HA-VSMCs)中,利用免疫印迹(Western blot)检测分化标志基因肌动蛋白α2(actin alpha2,ACTA2)和肌动蛋白相关蛋白(smooth muscle 22 alpha,SM22α)的表达;利用实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测过表达或敲低myocardin对miR-93-5p水平的影响;构建miR-93-5p启动子的荧光素酶报告质粒,利用荧光素酶报告分析证实myocardin对mi R-93-5p启动子的转录激活作用.上述结果证实myocardin可能通过激活miR-93-5p的转录,上调其表达,进而促进血管平滑肌细胞的分化. 展开更多

关键词 MYOCARDIN 人主动脉血管平滑肌细胞 表型转化 miR-93-5p

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微小RNA-381靶向调控HMGB1基因对人主动脉血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

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作者 陈鹏 刘永胜 +1 位作者 周登明 王萍 《内科急危重症杂志》 2020年第4期335-339,共5页

目的:探讨微小RNA-381(mi R-381)对人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi R-381的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)和Transwell小室实验检测HA-VSMC... 目的:探讨微小RNA-381(mi R-381)对人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMCs)增殖和迁移的影响及其机制。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测mi R-381的表达水平,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)和Transwell小室实验检测HA-VSMCs细胞增殖和迁移能力,采用双荧光素酶报告基因实验检测mi R-381与高迁移率族蛋白(HMGB1)的靶向关系,采用Western blot检测HMGB1蛋白表达水平。结果:血小板衍生生长因子(PDGF)能够促进HA-VSMCs增殖和迁移,下调mi R-381表达水平;上调mi R-381表达可抑制PDGF诱导的HAVSMCs增殖和迁移;双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是mi R-381的靶基因;上调HMGB1表达能够逆转mi R-381对HA-VSMCs增殖和迁移的抑制作用。结论:mi R-381可通过靶向HMGB1抑制HA-VSMCs细胞增殖和迁移。 展开更多

关键词 miR-381 人主动脉血管平滑肌细胞 高迁移率族蛋白 增殖 迁移

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1,25(OH)_2D_3对人血管平滑肌细胞TLR4基因及炎症因子表达的抑制作用

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作者 杨海静 陈卫 +1 位作者 高啸波 权金星 《中国现代医药杂志》 2012年第3期4-6,共3页

目的探讨1,25（OH）2D3（1,25-dihydroxyvitamin D3）对人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC）果蝇样受体（Toll like receptor 4,TLR4）基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用... 目的探讨1,25（OH）2D3（1,25-dihydroxyvitamin D3）对人主动脉血管平滑肌细胞（human aortic vascular smooth muscle cell,HA-VSMC）果蝇样受体（Toll like receptor 4,TLR4）基因及其下游炎症因子IL-6、IL-8和MCP-1表达的调节作用。方法不同浓度1,25（OH）2D3干预HA-VSMC后,采用实时荧光定量PCR法检测细胞TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mR-NA的表达水平。结果 1,25（OH）2D3在浓度为1-20nmol/L之间抑制TLR4、IL-6、IL-8、MCP-1mRNA水平的表达且具有明显的剂量依赖关系。在浓度为1nmol/L时1,25（OH）2D3下调TLR4和MCP-1mRNA表达的作用最明显,浓度为10nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-6mRNA表达的作用最明显,浓度为20nmol/L时,1,25（OH）2D3下调IL-8mRNA表达的作用最明显。TLR4、IL-6、IL-8和MCP-1mRNA表达的最大下调幅度分别为对照组的3.08、2.39、3.19、2.23倍（均P〈0.05）。结论 1,25（OH）2D3通过下调TLR-4信号抑制了人主动脉血管平滑肌细胞的炎症反应。 展开更多

关键词 人主动脉血管平滑肌细胞 1 25(OH)2D3 果蝇样受体4 细胞因子 基因表达

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