经LED黄光照射的人间充质干细胞旁分泌效应对成纤维细胞光老化的作用研究

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作者 曹佼佼 王金涛 蔡宏 《实用皮肤病学杂志》 2024年第5期262-268,286,共8页

目的研究经LED黄光照射的人脂肪间充质干细胞(hADSCs)旁分泌效应对人真皮成纤维细胞(HDFs)光老化的影响。方法利用中波紫外线(UVB)照射HDFs构建光老化模型,并进行细胞增殖、细胞衰老、细胞迁移实验。使用不同能量梯度(2.5、5.0、7.5、10... 目的研究经LED黄光照射的人脂肪间充质干细胞(hADSCs)旁分泌效应对人真皮成纤维细胞(HDFs)光老化的影响。方法利用中波紫外线(UVB)照射HDFs构建光老化模型,并进行细胞增殖、细胞衰老、细胞迁移实验。使用不同能量梯度(2.5、5.0、7.5、10.0 J/cm^(2))LED黄光照射hADSCs进行细胞增殖实验,确定最佳照射能量(10 J/cm^(2))。实验组用LED黄光10 J/cm^(2)照射的hADSCs上清液培养光老化HDFs,对照组用未经照射的hADSCs上清液培养光老化HDFs,用CCK-8法检测2组细胞增殖能力,用β-半乳糖苷酶染色检测2组细胞衰老水平,用微丝绿色荧光探针标记细胞骨架,用流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)含量,并进行转录组测序,对测序发现的显著差异基因进行实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)验证、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果与未照射组比较,UVB照射组HDFs增殖能力下降,衰老细胞(蓝染细胞)明显增多,HDFs迁移受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,经LED黄光照射的hADSCs上清液干预的实验组光老化HDFs增殖能力较强、蓝染细胞较少、细胞形态较为细长、ROS含量较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。转录组测序发现6个有意义的差异表达基因:驱动蛋白家族成员20B(KIF20B)、异常纺锤体样小头畸形相关蛋白(ASPM)、A型激酶锚定蛋白9(AKAP9)、着丝粒蛋白F(CENPF)、着丝粒蛋白E(CENPE)、RB1的诱导卷曲蛋白1(RB1CC1)。qRTPCR结果显示,实验组KIF20B、ASPM、AKAP9、CENPF、CENPE、RB1CC1 mRNA表达高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),与转录组测序结果一致。KEGG通路富集分析显示,显著差异基因富集在长寿调节通路(longevity regulating pathway)。结论经LED黄光照射的hADSCs旁分泌效应对HDFs的光老化具有抑制作用,可能与激活长寿调节通路有关。 展开更多

关键词 光老化 成纤维细胞 紫外线 人脂肪间充质干细胞

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microRNA-132对人脂肪源性间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：2

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作者 黎裕明 雷爱凤 +5 位作者 赵晓晓 戴海 庞俊峰 陈伟旭 刘会江 黄宗贵 《广西医科大学学报》 CAS 2019年第2期187-191,共5页

目的:探讨microRNA-132(miR-132)对人脂肪源性间充质干细胞(hADSCs)成骨分化的影响。方法:分离培养hAD-SCs,转染过表达或抑制miR-132(miR-132mimics或miR-132inhibitors),分别采用qPCR法和western blotting法检测细胞中成骨相关基因碱... 目的:探讨microRNA-132(miR-132)对人脂肪源性间充质干细胞(hADSCs)成骨分化的影响。方法:分离培养hAD-SCs,转染过表达或抑制miR-132(miR-132mimics或miR-132inhibitors),分别采用qPCR法和western blotting法检测细胞中成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Osterix mRNA和蛋白相对表达量。结果:miR-132在hADSCs的表达随着成骨诱导时间延长逐渐升高(P<0.05),转染miR-132 mimics后,hADSCs成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA和蛋白的表达显著升高,而转染miR-132inhibitors后,ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA和蛋白的表达显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:miR-132通过正向调控hADSCs成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix表达进而影响hADSCs的成骨分化进程。 展开更多

关键词 人脂肪源性间充质干细胞 成骨分化 miR-132

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人脂肪源性间充质干细胞对乳腺癌转移的影响 被引量：2

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作者 王凊 张博 车绪春 《中国医药导报》 CAS 2016年第18期25-28,共4页

目的研究人脂肪源性间充质干细胞(h AD-MSC)的基本生物学特征及对乳腺癌转移的影响。方法贴壁法从人脂肪组织分离获得h AD-MSC,完成鉴定;分别用脂肪诱导培养基和成骨诱导培养基诱导其向脂肪和成骨细胞分化;h AD-MSC与人乳腺癌细胞MDA-MB... 目的研究人脂肪源性间充质干细胞(h AD-MSC)的基本生物学特征及对乳腺癌转移的影响。方法贴壁法从人脂肪组织分离获得h AD-MSC,完成鉴定;分别用脂肪诱导培养基和成骨诱导培养基诱导其向脂肪和成骨细胞分化;h AD-MSC与人乳腺癌细胞MDA-MB-231共培养,Transwell小室法观察肿瘤细胞的形态和迁移、侵袭能力。结果从人脂肪组织中成功培养出间充质干细胞,其具有较强的体外增殖和自我更新能力。共培养之后的MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力增强。结论从人脂肪组织中可分离培养出具有多分化潜能的间充质干细胞,并可促进乳腺癌细胞的转移。 展开更多

关键词 人脂肪源性间充质干细胞 乳腺癌 共培养 转移

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microRNA-346对脂肪源性间充质干细胞成骨分化的影响 被引量：2

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作者 严斌 王春梅 +1 位作者 彭秀银 何沛恒 《医学理论与实践》 2018年第23期3481-3484,3487,共5页

目的:探讨microRNA-346(miR-346)对脂肪源性间充质干细胞(h ADSCs)成骨分化的影响。方法:离体培养大鼠脂肪源性间充质干细胞,通过转染过表达或者抑制miR-346,qRT-PCR检测各组成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因... 目的:探讨microRNA-346(miR-346)对脂肪源性间充质干细胞(h ADSCs)成骨分化的影响。方法:离体培养大鼠脂肪源性间充质干细胞,通过转染过表达或者抑制miR-346,qRT-PCR检测各组成骨相关基因碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Osterix mRNA的表达。结果:miR-346在h ADSCs的表达随着成骨诱导时间延长逐渐升高(P <0. 05)。转染miR-346 mimics后的h ADSCs内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著升高。相反,细胞转染miR-346 inhibitors后,其成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix mRNA的表达显著降低,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论:miR-346通过正向调控h ADSCs细胞内成骨相关基因ALP、OCN、Runx2、Osterix表达进而影响h ADSCs细胞的成骨分化进程。 展开更多

关键词 脂肪源性间充质干细胞 成骨分化 miR-346

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miR-424在人脂肪来源间充质干细胞成骨分化中的调控作用 被引量：1

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作者 余章 黄雅琢 +1 位作者 杨潇璇 肖彩雯 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期962-968,共7页

目的探讨miR-424在人脂肪来源间充质干细胞(h ASC)成骨分化中的表达及miR-424对h ASC体外成骨分化的生物学作用。方法 q PCR检测miR-424在h ASC成骨分化不同阶段的表达水平。通过慢病毒颗粒在体外感染h ASC,使miR-424过表达或抑制其表达... 目的探讨miR-424在人脂肪来源间充质干细胞(h ASC)成骨分化中的表达及miR-424对h ASC体外成骨分化的生物学作用。方法 q PCR检测miR-424在h ASC成骨分化不同阶段的表达水平。通过慢病毒颗粒在体外感染h ASC,使miR-424过表达或抑制其表达,进行Western blotting、细胞免疫荧光试验及碱性磷酸酶(ALP)和茜素红(ARS)染色试验,研究miR-424对骨形态发生蛋白2(BMP-2)及成骨诱导液诱导h ASC成骨分化过程的影响。预测miR-424的靶基因,并利用q PCR及Western blotting验证。结果 q PCR结果显示miR-424在h ASC的表达量随着成骨诱导时间延长逐渐下降(P<0.05)。在BMP-2诱导下,过表达组的碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)蛋白水平均下降,而抑制组的表达增加(P<0.05)。细胞免疫荧光显示,过表达miR-424的细胞骨唾液酸蛋白(BSP)阳性率显著下降(P<0.05)。ALP和ARS染色显示,过表达组ALP活性降低,钙盐沉积下降,而抑制组ALP活性升高,矿化能力增强。过表达miR-424能降低h ASC中Smad5的mRNA和蛋白水平,而抑制miR-424则使其水平升高(P<0.05)。结论 miR-424在h ASC成骨分化中表达下调,其在hASC体外成骨分化过程中起抑制作用。 展开更多

关键词 人脂肪来源间充质干细胞 miR-424 SMAD5 成骨分化

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白细胞介素8对高糖诱导的人脂肪间充质干细胞损伤的保护作用 被引量：1

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作者 沈雷 沙峰 +5 位作者 孙权 张鹏 孙石柱 张晓东 姚立杰 李静平 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第16期18-22,共5页

目的探讨白细胞介素8(IL-8)对高糖诱导人脂肪间充质干细胞(h Ad MSC)损伤的保护作用。方法含250 mmol/L葡萄糖的培养基建立细胞高糖模型;P65质粒转染人IL-8基因到h Ad MSC为IL-8转染组,仅转染P65质粒者为P65对照组,在IL-8转染组中添加PD... 目的探讨白细胞介素8(IL-8)对高糖诱导人脂肪间充质干细胞(h Ad MSC)损伤的保护作用。方法含250 mmol/L葡萄糖的培养基建立细胞高糖模型;P65质粒转染人IL-8基因到h Ad MSC为IL-8转染组,仅转染P65质粒者为P65对照组,在IL-8转染组中添加PD98059为Erk抑制剂组。利用MTT细胞增殖实验、ELISA或流式细胞技术检测各组h Ad MSC增殖的光密度值(OD值)、Caspase-3、Erk或VEGF等蛋白的表达。结果与P65对照组比较,IL-8转染组h Ad MSC增殖OD值明显升高,Caspase-3蛋白表达下降(P<0.01);IL-8转染组Erk蛋白活性和VEGF蛋白含量明显高于P65对照组(P<0.01);但与IL-8转染组比较,Erk抑制剂组h Ad MSC增殖的OD值降低,Caspase-3蛋白表达升高(P<0.01)。结论 IL-8在高糖环境下,通过Erk通路,发挥对h Ad MSC的保护作用。 展开更多

关键词 高糖 白细胞介素8 人脂肪间充质干细胞 ERK通路

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人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植的免疫调节作用

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作者 华红 解童玲 郝贵亮 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2021年第1期73-77,共5页

背景:皮肤移植是治疗大面积烧烫伤最有效的方法之一,如何有效抑制异体皮肤移植后的免疫排斥反应,是目前亟待解决的问题。目的:探讨人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植免疫调节作用的影响。方法:取抽脂减肥术后人脂肪组织分离出人... 背景:皮肤移植是治疗大面积烧烫伤最有效的方法之一,如何有效抑制异体皮肤移植后的免疫排斥反应,是目前亟待解决的问题。目的:探讨人脂肪间充质干细胞对异种小鼠间皮肤移植免疫调节作用的影响。方法:取抽脂减肥术后人脂肪组织分离出人脂肪间充质干细胞并培养至第3代,将60只2-4 d龄ICR小鼠随机分为4组,取其皮肤移植至C57BL/6小鼠背部建立皮肤移植免疫排斥模型,术后30 min内通过尾静脉将PBS(PBS组)和5×10^4,10×10^4,20×10^4个人脂肪间充质干细胞(脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组)注射至受体小鼠体内,记录皮肤存活时间;术后第7天每组随机取5只小鼠,分离出脾脏及血清,采用RT-PCR及ELISA法检测白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、干扰素γ水平,取移植部位皮肤制作病理切片观察淋巴细胞浸润情况。结果与结论:①与PBS组比较,脂肪间充质干细胞低剂量组皮肤存活时间延长但差异无显著性意义(P>0.05);与PBS组及脂肪间充质干细胞低剂量组比较,脂肪间充质干细胞中、高剂量组皮肤存活时间均延长(P<0.01),中剂量组与高剂量组间差异无显著性意义(P>0.05);②与PBS组比较,脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组脾脏中肿瘤坏死因子α和干扰素γ的相对表达量均明显降低(P<0.05);③与PBS组比较,脂肪间充质干细胞低、中、高剂量组血清中肿瘤坏死因子α和干扰素γ水平均降低(P<0.05),脂肪间充质干细胞中、高剂量组白细胞介素10水平升高(P<0.05);④结果表明,适当剂量的人脂肪间充质干细胞可以明显延长异种小鼠间移植皮肤的存活时间,与其调节受体小鼠体内相关免疫因子的表达有关。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 异种 ICR小鼠 C57BL/6小鼠 皮肤移植 免疫排斥

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人脂肪源性间充质干细胞修复放化疗所致胸腺损伤机制研究

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作者 张伟东 张伟威 +4 位作者 党晓健 魏颖 王莉 李静 王娜 《河北医药》 CAS 2022年第14期2111-2114,2119,共5页

目的观察体外人脂肪源性间充质干细胞对放化疗损伤胸腺上皮细胞增殖作用并进行机制探索。方法无菌环境下分离提取人脂肪源性间充质干细胞;以20、30、50及100μmol/L KGF-si RNA作用于脂肪源间充质干细胞,筛选最佳KGF-siRNA基因沉默作用... 目的观察体外人脂肪源性间充质干细胞对放化疗损伤胸腺上皮细胞增殖作用并进行机制探索。方法无菌环境下分离提取人脂肪源性间充质干细胞;以20、30、50及100μmol/L KGF-si RNA作用于脂肪源间充质干细胞,筛选最佳KGF-siRNA基因沉默作用浓度;比较KGF基因沉默干预与非KGF基因沉默干预对胸腺上皮增殖影响。结果人脂肪源性间充质干细胞培养6~8 d呈典型纤维状,流式细胞检测细胞表面抗原CD44阳性93.7%,CD34阳性率0.405%。不同浓度20、30、50及100μmol/L的KGF-siRNA转染作用48 h后人脂肪源间充质干细胞mRNA水平下降33.22%、46.40%、81.06%及42.35%,50μmol/L作用48 h效果明显,差异有统计学意义(P<0.05)。48 h基因沉默组、空白对照组及空质粒组角质细胞生长因子表达发现沉默组与空白对照及空质粒组存在显著差异(P<0.05),后二者间无显著差异(P>0.05)。应用Brdu增殖实验连续3 d分别测定基因沉默组、正常组、单纯人胸腺上皮细胞增殖情况及基因沉默组、正常组及单纯鼠胸腺上皮细胞增殖情况发现基因正常组显著高于基因干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。应用PI单染测定基因沉默组、正常组、单纯人胸腺上皮细胞及基因沉默组、正常组、单纯鼠胸腺上皮细胞周期计算细胞增殖密切相关S期细胞所占比,证实正常对照组增殖显著高于况默组及单纯小鼠胸腺上皮细胞组增殖,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂肪源性间充质干细胞可通过分泌角质细胞生长因子完成胸腺上皮细胞增殖;脂肪源性间充质干细胞对放化疗损伤胸腺有促进修复的作用。 展开更多

关键词 人脂肪源性间充质干细胞 角质细胞生长因子 siRNA 基因沉默 增殖

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hADMSCs影响TLR4-TRIF信号通路诱导小鼠小胶质细胞表型极化的实验研究 被引量：2

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作者 孙静 刘漪沦 +3 位作者 李灿 马燕 严伟恒 苏炳银 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期164-170,共7页

目的研究人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADMSCs)对小胶质细胞表型极化的影响及机制。方法取C57/BL6小鼠BV-2小胶质细胞,以hADMSCs+脂多糖(LPS)间接共培养,或以单纯LPS培养。倒置显微镜下观察细胞... 目的研究人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADMSCs)对小胶质细胞表型极化的影响及机制。方法取C57/BL6小鼠BV-2小胶质细胞,以hADMSCs+脂多糖(LPS)间接共培养,或以单纯LPS培养。倒置显微镜下观察细胞形态。CCK-8法检测小胶质细胞增殖能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小胶质细胞M1/M2表型标记物的影响,Western blot检测小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)-β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路相关蛋白的表达。结果与单纯LPS培养相比,hADMSCs加入后,小胶质细胞镜下形态相似,细胞增殖活性被抑制(P<0.05),M1表型标记物的基因表达减少(P<0.05), M2表型标记物的基因表达增加(P<0.05),TRIF、TLR4、干扰素调节因子3 (IRF3)和磷酸化IRF3 (P-IRF3)蛋白的表达水平降低(P<0.05)。结论 hADMSCs可抑制脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞M1促炎表型的极化,从而诱导其向保护型M2表型极化,此作用可能与其对TLR4-TRIF信号通路活化的抑制有关。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 表型 TOLL样受体

原文传递

脂肪源性间充质干细胞外泌体在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的机制研究 被引量：4

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作者 付文 王向臣 +1 位作者 王延桂 孙绍韶 《组织工程与重建外科》 CAS 2023年第4期342-351,379,共11页

目的探究脂肪源性间充质干细胞外泌体(hADSC-Exo)在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的作用机制。方法分离并鉴定hADSC与hADSC-Exo。将人真皮微血管内皮细胞(hMECs)分为对照组、200μg/L重组人表皮生长因子处理的阳性对照组与100μg/mL hADSC... 目的探究脂肪源性间充质干细胞外泌体(hADSC-Exo)在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的作用机制。方法分离并鉴定hADSC与hADSC-Exo。将人真皮微血管内皮细胞(hMECs)分为对照组、200μg/L重组人表皮生长因子处理的阳性对照组与100μg/mL hADSC-Exo处理的hADSC-Exo组,通过CCK-8、划痕实验、血管形成实验,检测hMECs增殖、迁移与血管形成能力。60只大鼠随机分为对照组、阳性对照组、hADSC组与hADSC-Exo组,每组15只。所有大鼠于背部制备全层皮肤缺损创面,每组分别于大鼠尾静脉注射200μL 1×PBS、100μg/kg重组人表皮生长因子、200μL约含1×10^(6)个hADSC的1×PBS、200μL含200μg hADSC-Exo的1×PBS。每组随机保留3只大鼠,分别于0、3、7、10、12 d拍摄创面图像并计算创面面积。每组其余大鼠随机分为4组,每组3只,分别于3、7、10、12 d采集未愈合创面组织并制成石蜡切片,HE、Masson染色观察创面愈合情况,免疫组化检测炎症与创面愈合相关蛋白表达情况。结果细胞实验结果显示,与对照组相比,阳性对照组、hADSC-Exo组细胞增殖活性、细胞迁移率升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量增加(P<0.05);与阳性对照组相比,hADSC-Exo组细胞增殖活性、细胞迁移率进一步升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量进一步增加(P<0.05)。动物试验结果显示,与对照组相比,阳性对照组、hADSC组与hADSC-Exo组皮肤创面愈合率、CD206、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、CollagenⅢ、水通道蛋白3(AQP3)表达水平升高(P<0.05),肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、CD68、角蛋白1(KRT1)表达水平与CollagenⅠ/CollagenⅢ比例下降(P<0.05),新生表皮组织更为完整,厚度增加,表皮下可见成纤维细胞增殖,创面新生胶原沉积明显增加;与阳性对照组相比,hADSC组与hADSC-Exo组CD206、CollagenⅠ、CollagenⅢ、AQP3表达水平进一步升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、CD68、KRT1表达水平进一步下降(P<0.05) 展开更多

关键词 脂肪源性间充质干细胞 外泌体 全层皮肤缺损 创面愈合

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和厚朴酚抑制人脂肪间充质干细胞增殖

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作者 李娜 李涛 +1 位作者 杨冬梨 姚媛 《基础医学与临床》 CAS 2024年第4期483-488,共6页

目的 研究厚朴酚对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)增殖和凋亡的影响,以此细胞模型初探该药物对肿瘤微环境的影响。方法 用不同浓度的和厚朴酚处理hADSCs,分别采用MTS法和台盼蓝染色法检测细胞的增殖能力,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的... 目的 研究厚朴酚对人脂肪间充质干细胞(hADSCs)增殖和凋亡的影响,以此细胞模型初探该药物对肿瘤微环境的影响。方法 用不同浓度的和厚朴酚处理hADSCs,分别采用MTS法和台盼蓝染色法检测细胞的增殖能力,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡的改变,qPCR和Western blot检测细胞增殖、凋亡相关基因的mRNA和蛋白质表达,Western blot检测MEK-ERK1/2信号通路中总MEK、磷酸化MEK、总ERK和磷酸化ERK蛋白的表达水平。结果 随着浓度增加,和厚朴酚抑制hADSCs增殖、促进其凋亡的作用显著增强。增殖相关基因CCND1、MKI67和PCNA表达下调,促凋亡相关基因BAX和TP53表达上调,抗凋亡基因BCL2表达下调。和厚朴酚呈浓度依赖性抑制MEK和ERK1/2的磷酸化。结论 和厚朴酚抑制hADSCs增殖,促进其凋亡,作用机制可能与抑制MEK-ERK1/2通路活性有关。 展开更多

关键词 和厚朴酚 人脂肪间充质干细胞 细胞增殖 细胞凋亡 MEK-ERK1/2

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人ADSCs移植对大鼠急性重症胰腺炎的治疗作用及其机制 被引量：3

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作者 唐楠 谭雪莹 +2 位作者 张德国 黄飞 史光军 《山东医药》 CAS 2019年第19期42-45,49,共5页

目的探讨人脂肪间充质干细胞(ADSCs)移植对大鼠急性重症胰腺炎(SAP)的治疗作用及其可能的作用机制。方法选择雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、模型组、移植组,每组15只。模型组、移植组按胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法建立SAP模型,当观... 目的探讨人脂肪间充质干细胞(ADSCs)移植对大鼠急性重症胰腺炎(SAP)的治疗作用及其可能的作用机制。方法选择雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、模型组、移植组,每组15只。模型组、移植组按胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法建立SAP模型,当观察到胰腺充血、水肿时,移植组于胰腺被膜下注射人ADSCs,模型组不予处理。假手术组开腹后经胰胆管逆行注射台式液。移植6、12、24h,各组分别取5只,记录腹水量,采用ELISA法检测血清淀粉酶、TNF-α;取胰头组织,HE染色,观察胰腺组织形态学变化;分别采用RT-PCR法、Western blotting法检测胰头组织磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)mRNA与蛋白表达。结果随着移植时间延长,移植组和模型组腹水量较假手术组均逐渐增多(P均<0.05),且移植组各时间腹水量均低于模型组,但差异无统计学意义(P均>0.05);移植组和模型组各时间血清淀粉酶、TNF-α水平均明显高于对照组,但移植组血清淀粉酶、TNF-α水平较模型组同期均明显降低(P均<0.05)。移植组胰头组织水肿、坏死及炎性细胞浸润情况均较模型组轻微。模型组p-AKT、p-NF-κBmRNA与蛋白相对表达量均明显高于假手术组,而移植组p-AKT、p-NF-κBmRNA与蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05)。结论人ADSCs移植对大鼠SAP具有一定治疗作用,其作用机制可能与抑制AKT磷酸化进而抑制NF-κB激活,继而产生弱化“二次打击”扳机点作用有关。 展开更多

关键词 急性重症胰腺炎 干细胞移植 人脂肪间充质干细胞

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人脂肪间充质干细胞体外诱导为肝脏样细胞的试验研究 被引量：3

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作者 张云巍 徐丽娟 +1 位作者 王淑芳 阎丽 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第5期608-616,共9页

目的探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法。方法采用胶原酶Ⅰ消化离心法获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培养并采用流式细胞仪检测干细胞相关表面... 目的探讨人脂肪间充质干细胞体外分离、培养、鉴定及向肝脏样细胞分化的方法。方法采用胶原酶Ⅰ消化离心法获得人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培养并采用流式细胞仪检测干细胞相关表面抗原白细胞分化抗原13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45和人类白细胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)的表达,采用诱导培养基将hADSCs向成脂及成骨方向诱导。采用两阶段细胞因子诱导法诱导hADSCs,并观察其形态变化;采用实时聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法及细胞免疫组化法检测肝细胞相关基因甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18抗体(cytokeratin18,CK18)、细胞角蛋白19抗体(cytokeratin19,CK19)等在肝脏样细胞中的表达;采用糖元染色法(Periodic acid-Schiff stain,PAS)检测肝脏样细胞糖原合成情况。结果用消化离心法获取的hADSCs大小均匀,呈梭形的成纤维细胞样,体外能长期培养存活,并保持不分化状态;流式细胞仪检测显示hADSCs高表达CD13、CD73,低表达CD34、CD45及HLA-DR;hADSCs体外可被诱导成脂肪细胞及成骨细胞。hADSCs经成肝诱导后,细胞形态由梭形变为多角形的肝脏样细胞,这些肝脏样细胞高表达血清白蛋白(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4等基因,并表达肝细胞相关性蛋白HepPar-1、AFP、CK18、CK19。PAS染色显示肝脏样细胞胞质呈红色表现。结论利用消化离心法在体外成功构建了人原代脂肪干细胞系,可长期存活,反复传代,经诱导后可转化为有功能的肝脏样细胞,为脂肪间充质干细胞作为生物人工肝及肝组织工程的种子细胞提供理论依据。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 分离 鉴定 诱导 肝脏样细胞

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人脂肪间充质干细胞体外分离、培养的方法研究 被引量：3

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作者 张云巍 徐丽娟 +2 位作者 王淑芳 喻红彬 阎丽 《肝脏》 2014年第10期752-755,共4页

目的探讨人脂肪间充质干细胞体外分离及培养方法。方法用消化离心的方法获得人脂肪间充质干细胞,以1×104/cm2接种于体积分数为0.1%胎牛血清的LG-DMEM培养基中,并进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原,... 目的探讨人脂肪间充质干细胞体外分离及培养方法。方法用消化离心的方法获得人脂肪间充质干细胞,以1×104/cm2接种于体积分数为0.1%胎牛血清的LG-DMEM培养基中,并进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原,行成脂及成骨诱导检测其多向分化潜能。结果获取的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形的成纤维细胞样,细胞增殖良好;细胞生长曲线测定表明接种后第4天细胞进入指数增长期,第8天后生长进入平台期,体外能长期培养存活,并保持不分化状态;流式细胞仪检测表明细胞高表达CD13、CD73,低表达CD34、CD45及HLA-DR;能诱导成脂及成骨细胞。结论利用消化离心法在体外能分离得到脂肪间充质干细胞,细胞生长良好,可作为组织工程的种子细胞。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 分离 培养 鉴定

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低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响 被引量：2

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作者 李兴天 李小战 +3 位作者 马红 许辉 李淑 李遇梅 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2014年第3期190-194,共5页

目的:比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法:采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增... 目的:比较人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs)冻存前和复苏后的生物学特性,为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法:采用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织中分离hADSCs,体外培养扩增,将处于均一稳定生长状态的第3代hADSCs置于液氮中分别冻存1、3和6个月,复苏后台盼蓝染色检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面抗原,成脂成骨诱导后鉴定多向分化能力,RT-PCR检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ-2(peroxisome proliferator-activated receptorγ-2,PPARγ-2)和成骨特异性基因骨钙素(osteocalcin,OC)的表达情况。结果:随冻存时间的延长细胞存活率略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05)。MTT结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻存前后细胞均高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166,低表达CD45和HLA-DR。冻存前后hADSCs均具有向脂肪细胞和骨细胞分化潜能,且RT-PCR结果显示,PPARγ-2和骨钙素mRNA的表达冻存前后差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:经液氮冻存后的hADSCs具有高存活率,生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 冻存 生物学特性 干细胞库

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1-磷酸鞘氨醇促进间充质干细胞向心肌分化 被引量：1

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作者 姜丽丽 刘天庆 +3 位作者 宋克东 关水 李香琴 葛丹 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1617-1628,共12页

为研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)对脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和脂肪间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)向心肌分化的影响,探索其适宜的作用时间... 为研究1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)对脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)和脂肪间充质干细胞(Adipose derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)向心肌分化的影响,探索其适宜的作用时间和浓度,将UC-MSCs和AD-MSCs接种到培养板,用添加不同浓度S1P的心肌细胞培养液诱导两种干细胞向心肌分化,诱导时间分为7 d、14 d和28 d。采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白,α-肌动蛋白(α-actin)、缝隙连接蛋白(Connexin-43)以及肌球蛋白重链(MYH-6)的表达,并通过共聚焦显微镜和荧光显微镜进行观察;采用MTT分析细胞的活性;膜片钳检测分化细胞的钙瞬变(此为心肌细胞的功能性指标)。结果表明,S1P与心肌细胞培养液协同作用,能够促进UC-MSCs和AD-MSCs向心肌细胞的分化。并且,随着S1P浓度的增加,促分化作用增强,但细胞活性降低。S1P在心肌细胞培养液中的适宜作用时间为14 d,适宜作用浓度为0.5μmol/L。而且联合心肌细胞培养液可以使UC-MSCs和AD-MSCs的心肌分化细胞产生钙瞬变,具有类似心肌细胞的功能性。S1P能够与心肌细胞培养液协同作用,促进UC-MSCs和AD-MSCs的心肌功能性分化。 展开更多

关键词 脐带间充质干细胞 脂肪间充质干细胞 心肌分化 1-磷酸鞘氨醇 心肌细胞

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敲降ZEB1基因表达对人脂肪间充质干细胞增殖、周期与凋亡的影响 被引量：2

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作者 刘妍 李红凌 赵春华 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第3期335-340,共6页

目的探讨敲降ZEB1基因表达对人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)增殖、周期和凋亡的影响。方法胶原酶消化法提取人脂肪组织中原代间充质干细胞,对其进行免疫学表型、成骨和成脂分化能力鉴定后用于实验。脂质体转染法将siRNA转入h ADSCs,实时定... 目的探讨敲降ZEB1基因表达对人脂肪间充质干细胞(h ADSCs)增殖、周期和凋亡的影响。方法胶原酶消化法提取人脂肪组织中原代间充质干细胞,对其进行免疫学表型、成骨和成脂分化能力鉴定后用于实验。脂质体转染法将siRNA转入h ADSCs,实时定量PCR和Western blot检测ZEB1、细胞增殖、周期和凋亡相关基因mRNA和蛋白的表达。MTS法检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果与si-NC转染组相比,si-ZEB1转染组可使ZEB1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),增殖相关基因CCND1、MKI67、MYC和PCNA表达显著下调(P<0.05或P<0.01);G1期细胞比例从50.71%增加到58.94%(P<0.01),S期和G2期细胞比例分别减少了6.16%和2.07%;细胞凋亡率上升了10.2%,促凋亡相关基因TP53和BAX表达上调,抗凋亡基因MCL1和BCL2表达下调(P<0.05或P<0.01)。结论 ZEB1具有促进h ADSCs增殖和周期进展,抑制细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 ZEB1 增殖 周期 凋亡

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金属硫蛋白修饰的间充质干细胞治疗铅中毒 被引量：2

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作者 张芸 纪惜銮 +3 位作者 罗朝霞 杨顺 刘晓雷 姜舒 《泰山医学院学报》 CAS 2015年第12期1353-1355,共3页

目的研究过表达金属硫蛋白的人脂肪间充质干细胞(MT-h ADSCs)对铅中毒小鼠排铅的作用及机制。方法实验分为空白对照组、铅中毒模型组、单纯细胞组、空载病毒组和病毒感染组,空白对照组小鼠给予生理盐水,其他组小鼠给予1 mg/kg醋酸铅连... 目的研究过表达金属硫蛋白的人脂肪间充质干细胞(MT-h ADSCs)对铅中毒小鼠排铅的作用及机制。方法实验分为空白对照组、铅中毒模型组、单纯细胞组、空载病毒组和病毒感染组,空白对照组小鼠给予生理盐水,其他组小鼠给予1 mg/kg醋酸铅连续于实验第1-10 d腹腔注射,第11 d各组分别给予生理盐水、h ADSCs、空载慢病毒感染的h ADSCs、MT-h ADSCs注射,观察14 d后处死小鼠,检测血铅浓度、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、脑组织Caspases 3和Bcl-2蛋白表达。结果铅中毒小鼠血铅显著升高,血清SOD活性显著下降,血清MDA含量显著升高。病毒感染组与铅中毒模型组相比,血铅显著下降,血清SOD活性显著升高,血清MDA含量显著下降,脑海马DG区细胞actived caspase 3表达明显下降。结论 MT–h ADSCs能促进铅中毒小鼠排铅,提高其SOD活性和降低MDA含量及Caspases 3蛋白表达,从而减少细胞氧化损伤和凋亡。 展开更多

关键词 金属硫蛋白 人脂肪来源间充质干细胞 铅中毒

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体外分离培养人脂肪间充质干细胞及鉴定 被引量：2

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作者 李兴天 黄彬 +2 位作者 黄海霞 陈军 李遇梅 《临床和实验医学杂志》 2015年第18期1489-1491,共3页

目的建立体外分离培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的方法。方法采用酶消化法分离培养hADSCs,流式细胞仪检测细胞免疫表型,台盼蓝染色计数绘制细胞生长曲线并计算倍增时间,油红和Von Kossa鉴定成脂成骨多向分化能力。结果成功从脂肪中分... 目的建立体外分离培养人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的方法。方法采用酶消化法分离培养hADSCs,流式细胞仪检测细胞免疫表型,台盼蓝染色计数绘制细胞生长曲线并计算倍增时间,油红和Von Kossa鉴定成脂成骨多向分化能力。结果成功从脂肪中分离纯化得到hADSCs,呈放射状、河流状的梭形细胞。流式结果显示hADSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD166等,低表达或不表达CD45和HLA-DR。生长曲线和倍增时间显示自我更新及增殖能力强。成脂和成骨染色显示其有多向分化能力。结论实验表明建立了一种有效的hADSCs体外分离培养方法。 展开更多

关键词 人脂肪间充质干细胞 体外 分离 培养

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人脂肪间充质干细胞移植结合跑台训练对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及机制 被引量：2

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作者 张鑫 陈银海 《中国康复医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期504-510,共7页

目的:探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)结合跑台训练对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响。方法:成年雄性SD大鼠60只,采用改良Allen打击法制作T10不完全SCI模型。术后随机分为损伤组(模型组,未行处理)、细胞移植组(细胞组,行细胞移植)、... 目的:探讨人脂肪间充质干细胞(hADSCs)结合跑台训练对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能的影响。方法:成年雄性SD大鼠60只,采用改良Allen打击法制作T10不完全SCI模型。术后随机分为损伤组(模型组,未行处理)、细胞移植组(细胞组,行细胞移植)、跑台训练组(训练组,行跑台训练)和跑台训练结合细胞移植组(联合组,行跑台训练及细胞移植)。术前及术后采用BBB评分和Tarlov评分行运动功能评定,术后1、2、4周取脊髓行免疫荧光染色检测细胞存活,炎症反应相关细胞(ED1阳性巨噬细胞),胶质瘢痕[胶质纤维酸性蛋白,GFAP及神经丝蛋白(NF-200),5-羟色胺(5-HT)]。结果:治疗组行为学评分及荧光定量检测均优于模型组(P<0.05);但联合组最明显,训练组和细胞组间无明显区别(P>0.05)。结论:hADSCs移植联合跑台训练对不完全性SCI大鼠运动功能恢复具有协同功效,治疗机制可能与进一步减轻伤后炎症反应,减少损伤面积,促进轴突再生有关。 展开更多

关键词 脊髓损伤 人脂肪间充质干细胞 跑台训练 运动功能 脊髓可塑性

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