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人乙醛脱氢酶2的原核表达及条件的优化
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作者 黄娟 张小骥 +3 位作者 刘传青 向玲娟 陈孝平 吴元欣 《化学与生物工程》 CAS 2014年第6期25-27,30,共4页
通过双酶切、连接转化等方法将人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因克隆至载体pGEX-4T-1上,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ALDH2。重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到大量表达。由于此载体本身带有融合蛋... 通过双酶切、连接转化等方法将人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因克隆至载体pGEX-4T-1上,构建原核表达重组质粒pGEX-4T-1-ALDH2。重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析表明目的蛋白得到大量表达。由于此载体本身带有融合蛋白标签GST(谷胱甘肽转移酶),所以得到了部分可溶性的目的蛋白。通过对表达条件进行探讨,发现在28℃下,以终浓度0.1mmol·L-1的IPTG诱导表达10h,可溶性的目的蛋白约占总蛋白的25%。表明,融合蛋白标签GST及较低的诱导温度有利于提高人乙醛脱氢酶2基因在大肠杆菌内的可溶性表达。 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶2 原核表达 融合蛋白 优化
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