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丝裂霉素C抑制人结膜囊成纤维细胞生长及增殖 被引量：6
1
作者 胡丹 惠延年 PhilipP.Chen 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第13期1230-1232,共3页
目的　观察丝裂霉素 C( MMC)对培养人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的作用 .方法　用 MTT比色法、3H- Td R掺入法及流式细胞仪检测细胞增殖周期观察 MMC对培养的人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的影响 .结果　 0 .4 g· L- 1MMC作用 5 ... 目的　观察丝裂霉素 C( MMC)对培养人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的作用 .方法　用 MTT比色法、3H- Td R掺入法及流式细胞仪检测细胞增殖周期观察 MMC对培养的人结膜囊成纤维细胞生长及增殖的影响 .结果　 0 .4 g· L- 1MMC作用 5 min后 ,可使成纤维细胞 MTT比色 A570 nm值 7d内无显著变化 ( P>0 .0 5 ) ,3H- Td R掺入实验 CPM第 1日较对照组降低了 72 .5 % ,至第 7日时仍低于对照组 86.2 % ( P<0 .0 1) .细胞增殖周期中 ,MMC组 S期细胞的百分比明显低于对照组 .结论　临床使用剂量 MMC可使结膜囊成纤维细胞增殖能力下降 ,处于增殖抑制状态 ,而不引起明显的细胞死亡 . 展开更多
关键词 丝裂霉素C 人结膜囊成纤维细胞 细胞增殖 细胞培养 青光眼
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丝裂霉素C对人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响 被引量：2
2
作者 胡丹 Chen PP 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第17期1540-1542,共3页
目的观察丝裂霉素C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响. 方法用3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用. 结果 0.4 g*L-1 MMC作用5 min,可使结膜囊成纤维细胞对3 H-脯氨酸的摄取减少... 目的观察丝裂霉素C(MMC)对培养的人结膜囊成纤维细胞胶原合成的影响. 方法用3H-脯氨酸掺入和原位杂交法观察MMC对培养人结膜囊成纤维细胞胶原合成活性的作用. 结果 0.4 g*L-1 MMC作用5 min,可使结膜囊成纤维细胞对3 H-脯氨酸的摄取减少55%以上(P<0 .05),并降低了Ⅰ型前胶原mRNA原位杂交信号. 结论临床青光眼滤过手术中使用的MMC剂量与作用时间,可减少成纤维细胞胶原的合成,有利于青光眼滤过手术成功率的提高. 展开更多
关键词 丝裂霉素C 人结膜囊成纤维细胞 胶原合成 细胞培养
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miR-26对TGF-β_(2)诱导的人Tenon氏囊成纤维细胞迁移、细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制 被引量：1
3
作者 李燕 孟凯 +3 位作者 杜允宏 陈斐 刘文静 鲍慧婧 《山东医药》 CAS 2022年第35期34-39,共6页
目的观察miR-26对转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))诱导后人Tenon氏囊成纤维细胞(HTFs)的细胞迁移及细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法切取青光眼手术患者的结膜囊组织,以组织贴壁法体外培养HTFs。取传至... 目的观察miR-26对转化生长因子β_(2)(TGF-β_(2))诱导后人Tenon氏囊成纤维细胞(HTFs)的细胞迁移及细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法切取青光眼手术患者的结膜囊组织,以组织贴壁法体外培养HTFs。取传至第3~5代的HTFs,随机分为空白组(不予转染)、TGF-β_(2)组(不予转染)、TGF-β_(2)+miR-26 mimics组(转染miR-26类似物)、TGF-β_(2)+mimics NC组(转染miR-26类似物阴性对照物),TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors组(转染miR-26抑制物),TGF-β_(2)+inhibitors NC组(转染miR-26抑制物阴性对照物),转染24 h后除空白组外均加入TGF-β_(2)5μg/L刺激48 h。采用划痕实验检测细胞迁移率,Western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、CTGF(荧光素酶报告基因实验证实miR-26和CTGF存在靶向关系)蛋白,实时荧光定量PCR法检测CTGF mRNA。将对数生长期的HTFs分为空白转染组(不予转染)、TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors组(转染miR-26 inhibitors)、TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors+si-NC组(转染miR-26 inhibitors+阴性对照siRNA)、TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors+si-CTGF组(转染miR-26 inhibitors+CTGF-siRNA),转染处理24 h后均加入TGF-β_(2)5μg/L刺激48 h,比较四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达。结果六组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达:空白组、TGF-β_(2)+miR-26 mimics组<TGF-β_(2)组、TGF-β_(2)+mimics NC组、TGF-β_(2)+inhibitors NC组<TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。六组CTGF mRNA相对表达量:空白组<TGF-β_(2)组、TGF-β_(2)+mimics NC组、TGF-β_(2)+miR-26 mimics组、TGF-β_(2)+inhibitors NC组、TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。六组CTGF蛋白相对表达量:空白组、TGF-β_(2)+miR-26 mimics组<TGF-β_(2)组、TGF-β_(2)+mimics NC组、TGF-β_(2)+inhibitors NC组<TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors组(P均<0.05)。四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达:TGF-β_(2)+miR-26 inhibitors+si-CTGF组<空白转染组<TGF 展开更多
关键词 miR-26 人tenon氏囊成纤维细胞 细胞迁移 细胞外基质 CTGF基因 转化生长因子β_(2) 青光眼
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芹黄素对人眼Tenon囊成纤维细胞增生的影响 被引量：1
4
作者 邹会会 王继兵 +4 位作者 黄旭东 刘姗姗 满辉 李寿庆 马刚 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期233-237,共5页
背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的增生是滤过手术失败的主要原因，寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊... 背景青光眼滤过手术后人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的增生是滤过手术失败的主要原因，寻找抑制术后HTFs增生的药物可提高滤过手术的成功率。目的观察芹黄素对HTFs体外生长的抑制效应并探讨其作用机制。方法斜视手术中获取的人眼Tenon囊组织剪成1mm×1mm×1mm的组织块，进行原代培养，免疫荧光法进行细胞波形蛋白检测以鉴定培养的HTFs。取第3～5代HTFs接种于96孑L板中，加入0、20、40、80、160μmol／L芹黄素后继续培养，于24、48、72h后分别取一块96孔板，在酶联免疫检测仪上检测560nm波长处各组细胞的吸光度（A。）值，磺基罗丹明B（SRB）法测定细胞的增生能力。分别在培养基中加入40、80、160μmol／L芹黄素，同时在不同浓度芹黄素组培养基中均加入10汕g／LBrdU，继续培养48h，在各组同一个视野下分别拍摄荧光显微镜和光学显微镜照片，计算BrdU的标记率，以未添加任何芹黄素（0μmol／L）组为对照组。用Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察培养细胞的形态学改变，采用流式细胞技术检测细胞的凋亡情况和细胞周期的变化。结果培养的细胞生长状态良好，免疫荧光法检测可见细胞对波形蛋白呈阳性反应，为细胞质中均匀的绿色荧光，确定培养的细胞为HTFs。SRB法检测结果显示，HTFs的增生值（A。）随着芹黄素浓度的增加而逐渐下降，同浓度芹黄素组HTFsA。值随着作用时间的延长逐渐下降，差异均有统计学意义（F㈣u：480．306，P=0．000；F目目=555．144，P=0．000）。0、40、80~mol／L芹黄素作用HTFs48h后BrdU的标记率分别为（87．860＋-0．632）％、（61．520＋-4．306）％、（23．480~4．472）％，各组之间的总体比较差异有统计学意义（F=299．347，P=0．000），其中40μmol／L、80μmol／L芹黄素组HTFsBrdU的标记率均明显低于0μmol／L芹黄素组，差异均有统计学意义（P〈 展开更多
关键词 芹黄素 人tenon囊成纤维细胞 凋亡
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苦参碱对体外人Tenon囊成纤维细胞的增生抑制及凋亡促进作用 被引量：1
5
作者 嵇芳芳 帅捷 +3 位作者 梁亚 俞秋丽 孙贞燕 袁志兰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期332-336,共5页
目的研究苦参碱对体外培养人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生和凋亡过程的影响。方法复苏冻存的HTFs后进行培养、传代,取第3~4代细胞进行实验。用终质量浓度梯度为0、0.3、0.6、0.9 g/L苦参碱作用于体外培养的HTFs 24~72 h,采用细胞计数试... 目的研究苦参碱对体外培养人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增生和凋亡过程的影响。方法复苏冻存的HTFs后进行培养、传代,取第3~4代细胞进行实验。用终质量浓度梯度为0、0.3、0.6、0.9 g/L苦参碱作用于体外培养的HTFs 24~72 h,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测HTFs增生情况;采用流式细胞术检测HTFs的凋亡情况;采用Western blot法、实时荧光定量PCR法检测凋亡相关转录因子caspase-3的表达情况。结果在梯度质量浓度苦参碱的作用下,HTFs的增生被抑制,且随时间的延长和质量浓度的增加,抑制效果更明显,差异均有统计学意义(F浓度=1 019.51,P=0.00;F时间=5 848.66,P=0.00;F交互作用=147.45,P=0.00)。0、0.3、0.6和0.9 g/L苦参碱作用后,HTFs的早期凋亡率分别为(2.68±0.30)%、(5.08±0.47)%、(6.97±0.69)%和(10.30±1.20)%,caspase-3蛋白表达的灰度值分别为1.00±0.13、1.90±0.19、2.50±0.30和2.67±0.30,caspase-3 mRNA的相对表达量分别为0.98±0.12、2.01±0.34、6.15±0.60和11.40±1.12,总体比较差异均有统计学意义(F=55.74、66.01、154.50,均P<0.01),随着苦参碱质量浓度的升高,HTFs的早期凋亡率明显升高,caspase-3蛋白、caspase-3 mRNA的相对表达量明显升高,各质量浓度组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论苦参碱可抑制体外培养HTFs的增生,并呈剂量及时间依赖性;苦参碱可促进HTFs凋亡。 展开更多
关键词 苦参碱 人tenon囊成纤维细胞 增生 凋亡
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羟基喜树碱联合依托泊苷对人Tenon囊成纤维细胞凋亡的影响及其机制 被引量：1
6
作者 于东毅 傅煜轩 +1 位作者 姚志峰 袁志兰 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期125-130,共6页
背景研究表明，羟基喜树碱（HCPT）和依托泊苷（VP-16）均能诱导人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的凋亡，但这两种药物联合应用对体外培养的HTFs是否有协同作用尚不明确。目的观察HCPT与VP-16联合应用后在促进体外培养的HTFs凋亡方面是否... 背景研究表明，羟基喜树碱（HCPT）和依托泊苷（VP-16）均能诱导人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的凋亡，但这两种药物联合应用对体外培养的HTFs是否有协同作用尚不明确。目的观察HCPT与VP-16联合应用后在促进体外培养的HTFs凋亡方面是否有协同性，并探讨其作用机制。方法人眼Tenon囊成纤维组织取自江苏省人民医院眼库，采用组织块培养法培养和传代HTFs，采用免疫组织化学法检测HTFs中波形蛋白的表达。第4代HTFs接种于96孔板，分别将不同质量浓度的HCPT（1、5、10、50、100mg／L）、VP-16（0．6、2．5、5．0、25．0、50．0mg／L）、HCPT＋VP-16（质量比为2：1，终质量浓度分别为0．80、3．75、7．50、37．50、75．00mg／L）加入细胞培养孔处理24h，用CCK-8法检测各组药物对细胞增生的抑制率。将HTFs分为空白对照组、HCPT（50mg／L）处理组、VP-16（25mg／L）处理组、HCPT＋VP-16（37．5mg／L）处理组，药物处理24h后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。提取细胞内总蛋白，采用Westernblot法检测各药物处理组细胞内caspase-3、活化型caspase-3、bax、bcl-2、JNK、p-JNK、Akt、p-Akt的表达水平。结果培养的细胞呈多边形或不规则形，波形蛋白表达阳性。不同质量浓度HCPT、VP-16和HCPT＋VP-16作用24h后，随着药物质量浓度的增加，对HTFs增生的抑制率增加，差异均有统计学意义（HCPT：F=41．34，P=0．00；VP-16：F=62．60，P=0．00；HCPT＋VP-16：F=46．77，P=0．00），HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT＋VP-16处理组药物的半数抑制浓度（IC50）分别为80．99、27．93、19．81mg／L，HCPT与VP-16联合应用的合并指数（cI）为0．399，表明VP-16和HCPT具有强协同作用。空白对照组、HCPT处理组、VP-16处理组和HCPT＋VP-16处理组HTFs的凋亡率分别为（4．87±0．78）％、（11．20±1．94）％、（12．67±1．51）％和（19．77±2．01）％，� 展开更多
关键词 羟基喜树碱 依托泊苷 人tenon囊成纤维细胞 凋亡 协同作用 细胞培养 体外
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The Preliminary Study of Interferon-γ Gene Transfection to Human Tenon's Capsule Fibroblasts in Vitro 被引量：1
7
作者 Yuqing Lan, Jian Ge, Mingkai Lin, Jianliang Zheng, Huiyi Chen, Haiquan Liu, Jing Wei , Yanyan LiZhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510060, China Sun Yat-Sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510120, China 《眼科学报》 2000年第3期153-157,共5页
关键词 眼球筋膜 成纤维细胞 Γ-干扰素 基因转染
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视网膜色素上皮细胞对结膜囊成纤维细胞的影响
8
作者 胡丹 惠延年 Philip P.Chen 《现代康复》 CSCD 2000年第5期714-715,共2页
目的 :观察人视网膜色素上皮 (RPE)细胞调理液 (RPE -CM )对人结膜囊成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法 :用MTT比色法、3H -脯氨酸掺入法和原位杂交法观察RPE -CM对体外培养的成纤维细胞生长及胶原合成活性的作用。结果 :RPE细胞培... 目的 :观察人视网膜色素上皮 (RPE)细胞调理液 (RPE -CM )对人结膜囊成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法 :用MTT比色法、3H -脯氨酸掺入法和原位杂交法观察RPE -CM对体外培养的成纤维细胞生长及胶原合成活性的作用。结果 :RPE细胞培养调理液可使成纤维细胞的OD值明显增高 (P<0.01) ,还可使成纤维细胞3H -脯氨酸掺入的CPM值明显高于对照组 (P<0.01)。处理组成纤维细胞中Ⅰ型前胶原mRNA原位杂交信号明显增强。结论 :RPE -CM可刺激成纤维细胞生长及胶原合成 。 展开更多
关键词 RPE 细胞增殖 胶原合成 视网膜病变
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氟伐他汀对体外人眼Tenon’s囊成纤维细胞增殖的抑制作用
9
作者 李敬 熊新春 童晓云 《医药导报》 CAS 2005年第11期1006-1008,共3页
目的观察氟伐他汀对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响,探讨该药作为眼部抗增殖药物的可行性。方法体外培养人Tenon’s囊成纤维细胞,分别给予含1.0×10-9,1.0×10-8,1.0×10-7,1.0×10-6,5.0×10-6,1.0&#... 目的观察氟伐他汀对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响,探讨该药作为眼部抗增殖药物的可行性。方法体外培养人Tenon’s囊成纤维细胞,分别给予含1.0×10-9,1.0×10-8,1.0×10-7,1.0×10-6,5.0×10-6,1.0×10-5,2.0×10-5mol.L-1氟伐他汀的10%新生牛血清的DMEM培养基培养24,48,72 h后,应用MTT比色法检测不同作用时间及不同浓度药物对细胞增殖的抑制作用。结果培养细胞的吸光度值随着氟伐他汀浓度的增加及作用时间的延长而降低。作用24 h后,氟伐他汀浓度≥5.0×10-6mol.L-1的各实验组的吸光度值与空白对照组比较均差异有极显著性(均P<0.01);作用48 h后,氟伐他汀浓度≥1.0×10-6mol.L-1的各实验组细胞的吸光度值与对照组比较,均差异有显著性(均P<0.05);作用72 h后,氟伐他汀浓度≥1.0×10-7mol.L-1的各实验组细胞的吸光度值均小于对照组,且均差异有显著性(均P<0.05)。结论氟伐他汀能抑制体外培养的人眼Tenon’s囊成纤维细胞的增殖,且该作用呈剂量和时间依赖性。氟伐他汀有望成为治疗成纤维细胞增殖性眼病的新型药物。 展开更多
关键词 氟伐他汀 tenong囊成纤维细胞 抑制作用
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HSP47 siRNA对体外培养HTCF细胞生物学行为及TGF-β1表达水平的影响
10
作者 姚莎莎 盘如刚 甘春芳 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期592-596,共5页
目的:探究热休克蛋白47(HSP47)siRNA对体外培养人眼Tenon囊成纤维(HTCF)细胞生物学行为及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平影响。方法:体外培养HTCF细胞,并分为:空白对照组、空载体组和转染组;转染组根据HSP47基因序列设计并合成干扰s... 目的:探究热休克蛋白47(HSP47)siRNA对体外培养人眼Tenon囊成纤维(HTCF)细胞生物学行为及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平影响。方法:体外培养HTCF细胞,并分为:空白对照组、空载体组和转染组;转染组根据HSP47基因序列设计并合成干扰siRNA序列,构建载体并导入HTCF细胞中;空载体组导入空白载体。采用RT-PCR和蛋白质印迹实验检测细胞中HSP47 mRNA和蛋白的表达情况,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell法及划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移,蛋白质印迹实验检测增殖、凋亡、侵袭、迁移蛋白和TGF-β1的表达情况。结果:相比空载体组,转染组HSP47 mRNA和蛋白的表达、克隆形成率、细胞愈合率、侵袭细胞数目、Ki67、N-cadherin、TGF-β1蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),但细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白相对表达水平均无差异(P>0.05)。结论:HSP47 siRNA可以通过抑制TGF-β1蛋白的表达降低HTCF细胞的增殖、侵袭及迁移能力,但对HTCF细胞的凋亡无明显影响。 展开更多
关键词 热休克蛋白47 人眼tenon囊成纤维细胞 转化生长因子-Β1
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