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Applications of RNA interference highthroughput screening technology in cancer biology and virology 被引量:4
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作者 Shan Gao Chen Yang +5 位作者 Shan Jiang Xiao-Ning Xu Xin Lu You-Wen He Annie Cheung Hui Wang 《Protein & Cell》 SCIE CAS CSCD 2014年第11期805-815,共11页
RNA interference (RNAi) is an ancient intra-cellular mechanism that regulates gene expression and cell function. Large-scale gene silencing using RNAi highthroughput screening (HTS) has opened an exciting frontier... RNA interference (RNAi) is an ancient intra-cellular mechanism that regulates gene expression and cell function. Large-scale gene silencing using RNAi highthroughput screening (HTS) has opened an exciting frontier to systematically study gene function in mammalian cells. This approach enables researchers to identify gene function in a given biological context and will provide considerable novel insight. Here, we review RNAi HTS strategies and applications using case studies in cancer biology and virology. 展开更多
关键词 RNA interference (RNAi) short interferingRNA (siRNA) short hairpin RNA (shRNA) high-throughputscreening cancer VIROLOGY
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基于细胞高内涵分析表征氮芥HN-3的细胞毒性
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作者 魏爱丽 龙隆 +3 位作者 李微 丁锐 陈伟 王莉莉 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期742-753,共12页
目的研究氮芥HN-3对不同来源细胞的毒性表型特征。方法 HN-3100,300和450μmol·L^(-1)分别作用于原代人胚表皮角质细胞(HEKf),原代成人皮肤成纤维细胞(HDFa)和人肺成纤维细胞(HLF)0.5,2,4,6,8,24和48 h后,采用基于细胞成像的多参... 目的研究氮芥HN-3对不同来源细胞的毒性表型特征。方法 HN-3100,300和450μmol·L^(-1)分别作用于原代人胚表皮角质细胞(HEKf),原代成人皮肤成纤维细胞(HDFa)和人肺成纤维细胞(HLF)0.5,2,4,6,8,24和48 h后,采用基于细胞成像的多参数分析技术,检测HN-3对细胞存活、细胞核、细胞骨架(微丝和微管)、线粒体膜电位(MMP)、氧化应激、核膜通透性(NMP)、磷酸化组蛋白、溶酶体、自噬、细胞周期和凋亡等参数的影响。结果 HN-3引起不可逆性的细胞损伤,表现为存活细胞数量显著减少(P<0.01)。在存活细胞数量显著减少前,从0.5 h开始,细胞内活性氧和磷酸化组蛋白水平即显著升高,谷胱甘肽含量显著降低(P<0.01)。HEKf细胞内溶酶体在0.5 h时减少,而HDFa和HLF细胞内溶酶体则分别在0.5和2 h升高,并伴有微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达升高伴随存活细胞数量减少,HEKf细胞核亮度升高,核面积减少,微丝、微管亮度和面积减少,MMP显著降低(P<0.01),溶酶体亮度有增加趋势;与此相反,HDFa和HLF细胞表现为核面积增加,微丝、微管亮度和面积增加,MMP显著升高(P<0.01),但溶酶体亮度增加,且HLF细胞LC3B的含量显著升高(P<0.01);同时,3种细胞均有NMP增高和锰超氧化物歧化酶含量增加,G2期阻滞。此外,HEKf细胞出现早期和晚期凋亡,HDFa细胞出现早期凋亡。结论 HN-3诱发早期的细胞损伤效应包括DNA损伤、氧化胁迫和溶酶体损伤,晚期导致MMP失衡、NMP增加、G2期细胞周期阻滞;此外,HN-3特异性地诱导HEKf细胞核固缩、细胞骨架蛋白核聚集和细胞凋亡;诱导HDFa和HLF细胞核肿胀和细胞骨架松散,并最终导致HDFa细胞早凋和HLF细胞自噬性死亡。 展开更多
关键词 氮芥 细胞毒表型 DNA损伤 氧化应激 高通量筛选分析
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基于常压室温等离子体诱变技术选育高产色氨酸突变株的研究 被引量:10
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作者 杨立鹏 李小刚 +4 位作者 魏爱英 陈金龙 马风勇 贾惠萍 孟刚 《发酵科技通讯》 CAS 2015年第1期28-32,共5页
本研究通过常压室温等离子体(ARTP)微生物育种技术,选育到一株高产L-色氨酸的突变株TRP-YP-3-2。与出发菌TRP-1201相比,该突变株生长及耗糖更快、产酸更高。TRP-YP-3-2色氨酸产量达到61.4 g/L,糖酸转化率达到19.25%,比出发菌分别提高了1... 本研究通过常压室温等离子体(ARTP)微生物育种技术,选育到一株高产L-色氨酸的突变株TRP-YP-3-2。与出发菌TRP-1201相比,该突变株生长及耗糖更快、产酸更高。TRP-YP-3-2色氨酸产量达到61.4 g/L,糖酸转化率达到19.25%,比出发菌分别提高了15.41%和22.77%。TRP-YP-3-2的产酸遗传稳定性研究发现经过30代培养后,仍具有很好的遗传稳定性。本研究不仅获得了一株高产色氨酸的突变株,具有很大的经济价值;同时确立的育种方法可为其他工业微生物的诱变育种提供有益的参考。 展开更多
关键词 常压室温等离子体 色氨酸 高通量筛选
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常压室温等离子体(ARTP)诱变及高通量筛选那西肽高产菌株 被引量:24
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作者 周扬 薛正莲 +2 位作者 夏俊 张翀 邢新会 《工业微生物》 CAS CSCD 2015年第2期7-12,共6页
采用新型常压室温等离子体(ARTP)诱变活跃链霉菌(Streptomyces actuosu),并应用抑菌圈和48孔板培养方法高通量筛选高产那西肽菌株。研究表明抑菌圈径的大小与48孔板效价之间以及48孔板效价与摇瓶效价之间均有较好的相关性,系数R分别达到... 采用新型常压室温等离子体(ARTP)诱变活跃链霉菌(Streptomyces actuosu),并应用抑菌圈和48孔板培养方法高通量筛选高产那西肽菌株。研究表明抑菌圈径的大小与48孔板效价之间以及48孔板效价与摇瓶效价之间均有较好的相关性,系数R分别达到0.534和0.896。通过多轮ARTP诱变及高通量筛选最终获得了3株相对效价提高50%以上的遗传性能稳定的突变株。ARTP诱变技术作为获得那西肽高产菌株的有效途径,与传统摇瓶发酵筛选相比,48孔板及抑菌圈法能显著提高那西肽高产菌株的筛选效率。 展开更多
关键词 那西肽 活跃链霉菌 常压室温等离子体(ARTP) 高通量筛选 抑菌圈法
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