目的用分子生物学研究肾癌形成和进展,可为临床治疗提供更可靠的依据,高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)是近年来研究热点之一。本研究观察HMGA2对肾癌细胞增殖和侵袭能力影响,为肾癌进一步临床研究提供依据。方法培养人...目的用分子生物学研究肾癌形成和进展,可为临床治疗提供更可靠的依据,高迁移率族蛋白A2(high mobility group A2,HMGA2)是近年来研究热点之一。本研究观察HMGA2对肾癌细胞增殖和侵袭能力影响,为肾癌进一步临床研究提供依据。方法培养人肾癌细胞系786-O、769-P、人肾癌转移细胞系ACHN、人正常肾小管上皮细胞系HKC,研究分为3组,HMGA2-siRNA组、Mock-siRNA组和未转染组。利用RNA干扰技术,瞬时转染肾癌ACHN细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测HMGA2mRNA及蛋白表达;MTT法检测干扰后ACHN细胞增殖能力;Transwell法检测干扰后ACHN细胞侵袭能力。结果786-O、769-P、ACHN和HKC细胞系HMGA2mRNA表达量分别为0.82±0.10、0.79±0.09、0.98±0.16和0.04±0.01,组内差异有统计学意义,F=63.36,P=0.002;4种细胞系中HMGA2蛋白表达量分别为0.80±0.09、0.75±0.08、0.94±0.10和0.06±0.02,组内差异有统计学意义,F=49.09,P=0.005。选择ACHN细胞作为后续研究:成功构建特异性沉默HMGA2表达的肾癌细胞株。在转染后24、48、72和96h,HMGA2-siRNA组细胞增殖速度分别为0.69±0.02、0.90±0.05、0.99±0.07和1.10±0.09,Mock-siRNA组细胞增殖速度分别为0.89±0.03、1.36±0.06、1.82±0.08和2.10±0.10,未转染组细胞增殖速度分别为0.91±0.02、1.50±0.06、1.91±0.10和2.20±0.12。HMGA2-siRNA组细胞增殖速度低于Mock-siRNA组和未转染组,F组别=630.724,P<0.001;F时间=566.968,P<0.001;F组别×时间=51.328,P=0.002。在转染后48h,HMGA2-siRNA组、Mock-siRNA组及未转染组穿过细胞数的比值分别为0.34±0.04,0.87±0.09和0.91±0.10,F=6.42,P=0.039。结论用HMGA2-siRNA干扰ACHN细胞,可抑制细胞增殖及侵袭能力,HMGA2基因在肾癌发生、发展中可能发挥“癌基因”作用,HMGA2基因及蛋白表达可能与肿瘤形成、进展和转移密切相关,有望成为肾癌治疗的一个重要靶点。展开更多
High mobility group A2（HMGA2） protein is a small nonhistone chromosomal protein that can modulate transcription of an ample number of genes.Many previous studies demonstrate that up-regulation of HMGA2 expression oc...High mobility group A2（HMGA2） protein is a small nonhistone chromosomal protein that can modulate transcription of an ample number of genes.Many previous studies demonstrate that up-regulation of HMGA2 expression occurrs in many kinds of cancers including colorectal cancer,suggesting that HMGA2 might play a critical role in the progression of various tumors.However,the exact role of HMGA2 in colorectal cancer has not been determined.To verify the essential role of HMGA2 in the growth and invasiveness of colorectal cancer,HMGA2 expression was down-regulated by RNA interference（RNAi） in SW480 cells.We observed that the knockdown of HMGA2 led to the significant inhibition of proliferation and invasion of SW480 cells in vitro.These results suggest that HMGA2 might play a crucial role in the progression of colorectal cancer,and be a potential therapeutic target for human colorectal cancer.展开更多
目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和...目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和敲低MUC5B,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。生物信息学预测结合实验验证MUC5B对高迁移率族蛋白组A1(human high mobilitygroup A1,HMGA1)的调控作用。在乳腺癌细胞中干预MUC5B,同时干预MUC5B和HMGA1,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。结果UALCAN结合The human Protein Altas在线数据库证实MUC5B在乳腺癌组织中的表达量显著高于其在正常组织中的表达量。qRT-PCR结果显示MUC5B在乳腺癌中的表达量远高于其在正常上皮细胞MCF-10A中的表达量。在乳腺癌细胞MCF-7中过表达MUC5B,transwell实验发现MUC5B可明显增加该细胞的侵袭能力;在乳腺癌细胞MDA-MB-231中敲低MUC5B,则该细胞的侵袭能力大大降低。最后,生物信息学结合qRT-PCR和WB实验证实MUC5B可显著上调HMGA1的表达。在MCF-7细胞中,敲低HMGA1可逆转该细胞因MUC5B而增加的侵袭能力;相似的,在MDA-MB-231细胞中,过表达HMGA1可逆转该细胞因敲低MUC5B而减弱的侵袭能力。结论MUC5B通过上调HMGA1促进乳腺癌细胞侵袭。展开更多
目的:探讨长基因间非编码RNA 00519(long intergene non-coding RNA 00519,LINC00519)调控miR-876-3p/高迁移率家族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)轴在胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用。方法:采用qPCR...目的:探讨长基因间非编码RNA 00519(long intergene non-coding RNA 00519,LINC00519)调控miR-876-3p/高迁移率家族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)轴在胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用。方法:采用qPCR检测胃癌细胞HGC-27和胃黏膜上皮细胞GES-1中LINC00519的表达水平。将HGC-27细胞按转染处理分为si-NC、si-LINC00519、si-LINC00519+anti-miR-NC和si-LINC00519+anti-miR-876-3p组,采用集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告实验和qPCR验证LINC00519与miR-876-3p、miR-876-3p与HMGA1之间的相互作用。结果:HGC-27细胞中LINC00519表达较GES-1细胞显著升高(P<0.05),转染siRNA后si-LINC00519组HGC-27细胞中LINC00519的表达水平较si-NC组显著降低(t=47.294,P<0.01)。与si-NC组比较,si-LINC00519组HGC-27细胞克隆数、迁移侵袭数、S期细胞比例均显著降低(均P<0.01),凋亡率、G0/G1期细胞比例均显著升高(均P<0.01)。与si-LINC00519+anti-miR-NC组比较,si-LINC00519+anti-miR-876-3p组HGC-27细胞克隆数、迁移侵袭数、S期细胞比例升高(均P<0.01),凋亡率、G0/G1期细胞比例显著降低(均P<0.01)。LINC00519能够靶向负调控miR-876-3p的表达,miR-876-3p靶向负调控HMGA1的表达。结论:敲降LINC00519能够通过调控miR-876-3p/HMGA1轴抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。展开更多
文摘High mobility group A2（HMGA2） protein is a small nonhistone chromosomal protein that can modulate transcription of an ample number of genes.Many previous studies demonstrate that up-regulation of HMGA2 expression occurrs in many kinds of cancers including colorectal cancer,suggesting that HMGA2 might play a critical role in the progression of various tumors.However,the exact role of HMGA2 in colorectal cancer has not been determined.To verify the essential role of HMGA2 in the growth and invasiveness of colorectal cancer,HMGA2 expression was down-regulated by RNA interference（RNAi） in SW480 cells.We observed that the knockdown of HMGA2 led to the significant inhibition of proliferation and invasion of SW480 cells in vitro.These results suggest that HMGA2 might play a crucial role in the progression of colorectal cancer,and be a potential therapeutic target for human colorectal cancer.
文摘目的探讨黏蛋白5B(mucin 5B,MUC5B)抑制乳腺癌细胞侵袭转移的作用及可能的分子机制。方法在多个数据库中统计MUC5B在乳腺癌组织中的表达量,qRT-PCR方法检测MUC5B在正常乳腺上皮细胞和多种乳腺癌细胞中的表达量。在乳腺癌细胞中过表达和敲低MUC5B,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。生物信息学预测结合实验验证MUC5B对高迁移率族蛋白组A1(human high mobilitygroup A1,HMGA1)的调控作用。在乳腺癌细胞中干预MUC5B,同时干预MUC5B和HMGA1,transwell实验检测上述细胞的侵袭能力。结果UALCAN结合The human Protein Altas在线数据库证实MUC5B在乳腺癌组织中的表达量显著高于其在正常组织中的表达量。qRT-PCR结果显示MUC5B在乳腺癌中的表达量远高于其在正常上皮细胞MCF-10A中的表达量。在乳腺癌细胞MCF-7中过表达MUC5B,transwell实验发现MUC5B可明显增加该细胞的侵袭能力;在乳腺癌细胞MDA-MB-231中敲低MUC5B,则该细胞的侵袭能力大大降低。最后,生物信息学结合qRT-PCR和WB实验证实MUC5B可显著上调HMGA1的表达。在MCF-7细胞中,敲低HMGA1可逆转该细胞因MUC5B而增加的侵袭能力;相似的,在MDA-MB-231细胞中,过表达HMGA1可逆转该细胞因敲低MUC5B而减弱的侵袭能力。结论MUC5B通过上调HMGA1促进乳腺癌细胞侵袭。
文摘目的:探讨长基因间非编码RNA 00519(long intergene non-coding RNA 00519,LINC00519)调控miR-876-3p/高迁移率家族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)轴在胃癌HGC-27细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭中的作用。方法:采用qPCR检测胃癌细胞HGC-27和胃黏膜上皮细胞GES-1中LINC00519的表达水平。将HGC-27细胞按转染处理分为si-NC、si-LINC00519、si-LINC00519+anti-miR-NC和si-LINC00519+anti-miR-876-3p组,采用集落形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。双荧光素酶报告实验和qPCR验证LINC00519与miR-876-3p、miR-876-3p与HMGA1之间的相互作用。结果:HGC-27细胞中LINC00519表达较GES-1细胞显著升高(P<0.05),转染siRNA后si-LINC00519组HGC-27细胞中LINC00519的表达水平较si-NC组显著降低(t=47.294,P<0.01)。与si-NC组比较,si-LINC00519组HGC-27细胞克隆数、迁移侵袭数、S期细胞比例均显著降低(均P<0.01),凋亡率、G0/G1期细胞比例均显著升高(均P<0.01)。与si-LINC00519+anti-miR-NC组比较,si-LINC00519+anti-miR-876-3p组HGC-27细胞克隆数、迁移侵袭数、S期细胞比例升高(均P<0.01),凋亡率、G0/G1期细胞比例显著降低(均P<0.01)。LINC00519能够靶向负调控miR-876-3p的表达,miR-876-3p靶向负调控HMGA1的表达。结论:敲降LINC00519能够通过调控miR-876-3p/HMGA1轴抑制胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。
